Mitochondrien
Mitochondrien sind die Energiefabriken der Zelle, der Hauptort der intrazellulären oxidativen Phosphorylierung und der Synthese von Adenosintriphosphat (ATP), das Energie für zelluläre Aktivitäten liefert. 95 % der für zelluläre Lebensaktivitäten benötigten Energie stammen aus Mitochondrien. Neben der Energieversorgung von Zellen sind Mitochondrien auch an Prozessen wie Zelldifferenzierung, zellulärer Informationsübertragung und Apoptose beteiligt und besitzen die Fähigkeit, Zellwachstum und Zellzyklus zu regulieren. Daher sind Untersuchungen wie Mitochondrien und Mitochondrienmembranen ein wesentlicher Bestandteil der Zellforschung.
Definition und Bedeutung des mitochondrialen Membranpotentials
Das mitochondriale Membranpotential ist das Ergebnis der Ladungsverteilung auf beiden Seiten der inneren Mitochondrienmembran und ein Schlüsselfaktor für die Aufrechterhaltung der normalen Mitochondrienfunktion. In Mitochondrien erzeugt die Elektronentransportkette durch Redoxreaktionen einen Protonengradienten, der die ATP-Synthese antreibt. Die Stabilität des mitochondrialen Membranpotentials steht in direktem Zusammenhang mit der Energieversorgung der Zelle und ihrem Überlebensstatus. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass Mitochondrien eng mit der Apoptose verbunden sind, bei der die Abnahme des mitochondrialen Transmembranpotentials als eines der frühesten Ereignisse im apoptotischen Kaskadenreaktionsprozess angesehen wird. Es tritt vor dem Auftreten apoptotischer Merkmale (Chromatinkondensation, DNA-Brüche) im Zellkern auf, und sobald das mitochondriale Transmembranpotential zusammenbricht, ist die Apoptose irreversibel. Somit ist die Abnahme des mitochondrialen Membranpotentials ein charakteristisches Ereignis in den frühen Stadien der Apoptose.
Funktionsprinzip der JC-1-Sonde
JC-1 ist ein kationischer Lipid-Fluoreszenzfarbstoff, der als Indikator für das mitochondriale Transmembranpotential verwendet werden kann. JC-1 existiert in zwei Zuständen, Monomer und Multimer. In geringer Konzentration liegt es als Monomer vor und eine grüne Fluoreszenz kann nachgewiesen werden. Wenn es durch einen Durchflusstest nachgewiesen wird, befindet es sich normalerweise im FL-1-Kanal (derselbe Kanal wie FITC). In hoher Konzentration liegt es als Multimer vor und rotes Licht kann nachgewiesen werden. und wenn es durch einen Durchflusstest erkannt wird, befindet es sich normalerweise im FL-2-Kanal (derselbe Kanal wie PE). JC-1 kann auch als kationischer Lipidfluoreszenzfarbstoff und als Indikator für das mitochondriale Transmembranpotential verwendet werden. und PE gleicher Kanal). Aufgrund der Änderung der JC-1-Konzentration entsteht ein reversibler Übergangsprozess zwischen Monomer und Multimer.
In normalen Zellen gelangt JC-1 bei normalem Membranpotential durch die mitochondriale Membranpolarität in die Mitochondrien und bildet aufgrund der Konzentrationserhöhung rot fluoreszierende Multimere, während in apoptotischen Zellen das mitochondriale Transmembranpotential depolarisiert wird und JC-1 in reduzierter Konzentration aus den Mitochondrien freigesetzt und in die grün fluoreszierende Monomerform umgewandelt wird. Daher können Änderungen des mitochondrialen Membranpotentials durch Nachweis der grünen und roten Fluoreszenz nachgewiesen werden.
Hinweis: Bilder aus dem Internet zitiert
JC-10 Sonde
JC-10, ein Derivat von JC-1, ist eine potenzialabhängige Sonde, die zur Bestimmung des mitochondrialen Transmembranpotenzials mittels Durchflusszytometrie, Fluoreszenzmikroskopie und Fluoreszenztests auf Mikrotiterplattenbasis verwendet wird. In gesunden Zellen reichert sich JC-10 selektiv in Mitochondrien an und erzeugt rote Aggregate, die ein breites Anregungsspektrum und hohe Emissionswerte bei 590 nm aufweisen.In apoptotischen und nekrotischen Zellen mit niedrigem mitochondrialen Transmembranpotential diffundiert JC-10 jedoch aus den Mitochondrien und produziert JC-10-Monomere, was zu einer Verschiebung in Richtung grüne Emission (525 nm) führt. Es wurde erfolgreich als Indikator für das mitochondriale Transmembranpotential in einer Vielzahl von Probentypen verwendet, darunter Myozyten, Neuronen, intakte Gewebe und isolierte Mitochondrien.
JC-10 - Ersatz für JC-1
- Stabilität: JC-10 weist einen geringeren Nachweisfehler auf, da es eine höhere Löslichkeit und Empfindlichkeit in wässrigen Medien aufweist.
- Verbessertes Signal: JC-10 hat ein höheres Signal-Hintergrund-Verhältnis als JC-1.
- Verbesserte Empfindlichkeit: JC-10 kann subtile Veränderungen im Verlust des mitochondrialen Transmembranpotenzials in allen getesteten Zelllinien besser erkennen als JC-1.
- Breite Anwendung: JC-10 kann in primären Rattenhepatozyten verwendet werden.
- Praktisch: JC-10 ist mit fluoreszierenden Enzymmarkern, Zellbildgebern und Durchflusszytometern kompatibel.
Hinweise: Durch Komedonen verursachte Veränderungen des mitochondrialen Membranpotentials wurden in Jurkat-Zellen mit JC-10 und JC-1 gemessen. Nach der Behandlung der Jurkat-Zellen mit Camptothecin (10 mM) für 4 Stunden wurden den Vertiefungen Farbstoff-Upsampling-Lösungen von JC-1 und JC-10 hinzugefügt und 30 Minuten lang inkubiert. Die Fluoreszenzintensität der aggregierten und monomeren Formen von JC-1 und JC-10 wurde bei Ex/Em = 490/525 nm und 490/590 nm mit einem NOVOstar-Enzymmarkierer (BMG Labtech) gemessen.
Analyse der Ergebnisse
Beim Erkennen des JC-1-Monomers kann das Anregungslicht auf 490 nm und das Emissionslicht auf 530 nm eingestellt werden; beim Erkennen des JC-1-Polymers kann das Anregungslicht auf 525 nm und das Emissionslicht auf 590 nm eingestellt werden. Apoptose wurde mittels Durchflusszytometrie erkannt, grüne Fluoreszenz wurde über den FL-1-Kanal und rote Fluoreszenz über den FL-2-Kanal erkannt. FL-1+, FL-2+ sind normale Zellen und FL-1+, FL-2- sind apoptotische Zellen.
Hinweis: Die Bildquelle ist das Forum der Website der China Streamline Association
Handeln Sie ohne Zweifel
F: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Fluorescent Probe, kann dieses Produkt zum Färben von Gewebeschnitten verwendet werden?
A: Zerlegen Sie das lebende Gewebe in einzelne Zellen, um die Aktivität der Zellen vor dem Färben sicherzustellen.
F: Kann ich die Zellen vor dem Färben mit JC-1 fixieren?
A: Nein. Der Farbstoff JC-1 reichert sich in den Mitochondrien potenzialabhängig an und kann zur Erkennung von Zellen, Geweben oder gereinigten mitochondrialen Membranpotenzialen verwendet werden. Die Immobilisierung unterbricht das elektrische Potenzial, wodurch sich die Sonde nicht mehr in den Mitochondrien anreichern kann und ihre Spezifität verloren geht.
Q: In der JC-1-Arbeitslösung befinden sich aggregierte Partikel und ich beabsichtige, diese vor dem Färben durch Zentrifugieren zu entfernen. Gibt es empfohlene Parameter für die Zentrifugation?
A: Die JC-1-Arbeitslösung kann etwa 1–2 Minuten lang bei 13.000 g zentrifugiert werden.
Bestellinformationen
| Produktname | Artikelnr. | Spezifikation |
| 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg | |
| 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |