Im Prozess der Zellkultur ist häufig eine Zellverdauung erforderlich. Daher ist das zur Zellverdauung verwendete Trypsin für die Zellkultur unverzichtbar und außerdem sehr wichtig, da es den Wachstumszustand der Zellen beeinflusst.

Trypsin kann grob in zwei Typen unterteilt werden: rekombinantes Trypsin und nicht-rekombinantes Trypsin.

• Nicht-rekombinantes Trypsin wird aus tierischen Extrakten gewonnen, hat also einen tierischen Ursprung und ist auch die traditionelle Verwendung von Trypsin, das häufig im Verdauungssystem von Tieren vorkommt und direkt aus dem Pankreasgewebe von Rindern oder Schweinen gewonnen wird.
• Rekombinantes Trypsin wird mithilfe genetischer Rekombinationstechnologie hergestellt und ist nicht tierischen Ursprungs.

Produkteinführung und Anwendung

Nicht-rekombinantes Trypsin (tierischen Ursprungs)

Produktmerkmale:

Nicht-rekombinantes Trypsin (auch als Trypsin bekannt) ist ein Serin-proteolytisches Enzym tierischen Ursprungs, das aus der Bauchspeicheldrüse von Rindern, Schafen und Schweinen gewonnen wird und spezifisch das Carboxylende von positiv geladenem Lysin und Arginin spalten kann. Es wird durch mehrfache Kristallisation gereinigt und anschließend mittels Chromatographie- und Ultrafiltrationstechnologie weiter aufbereitet.

Da Pankreasenzyme auf Transmembranproteine ​​und Proteine ​​in der extrazellulären Matrix wie Cadherin, Integrin usw. einwirken können, werden sie heute häufig verwendet, um Gewebe und einschichtige Zellen zu dissoziieren. Obwohl Trypsin die Proteolyse zwischen Zellen zu diskreten Zellen hydrolysieren kann, ist die Reaktion verschiedener Gewebe oder Zellen auf Trypsin unterschiedlich, und die Aktivität dispergierter Zellen hängt auch von der Trypsinkonzentration, der Reaktionstemperatur und der Reaktionszeit ab, und die Fähigkeit von Trypsin, Zellen zu dispergieren, ist unter den Bedingungen eines pH-Werts von 7-9 und einer Temperatur von 37 °C am stärksten. Die Zugabe von EDTA zur Trypsinlösung als Chelatbildner bindet Calcium und Magnesium in einer sechszackigen Struktur, was die Zell-Zell-Adhäsion schwächen und die Aufnahme hydrolysierter gezielter Peptidbindungen durch Trypsin verbessern kann.

Die Hauptanwendung von Trypsin in der Anfangszeit im biopharmazeutischen Bereich war die Produktion von Insulin, und bald wurde es auch in anderen Zellkulturbereichen eingesetzt. Tierische Pankreasenzyme werden häufig in Serumkulturen verwendet, und die Zusammensetzung und Konzentration des Trypsins, das verschiedenen Zellen zugesetzt wird, sind unterschiedlich.

Anwendungen

1. Herstellung von Insulin und inaktivierten Impfstoffen;
2. Isolierung und Kultivierung von Gewebezellen;
3. Klinische und chirurgische Verwendung;
4. Verarbeitungshilfsstoffe in der Lebensmittelindustrie;

Rekombinantes Trypsin (tierischen Ursprungs)

Produktmerkmale

Rekombinantes Trypsin ist ein Enzym, das mithilfe gentechnischer Verfahren hergestellt wird und die Vorteile guter Stabilität, hoher Reinheit und nicht tierischen Ursprungs aufweist. Im Produktionsprozess moderner Biopharmazeutika kann die Verwendung von Rohstoffen tierischen Ursprungs potenzielle Virusquellen in das Produkt bringen, die Zoonosen wie BSE (Rinderwahnsinn), Maul- und Klauenseuche-Virus usw. verursachen. Um die Verschmutzungsquelle zu reduzieren, wird Trypsin mithilfe gentechnischer Verfahren synthetisiert, wodurch das Risiko einer Viruskontamination, das durch herkömmliches Schweine- oder Rindertrypsin entstehen kann, beseitigt wird.

Rekombinantes Trypsin wird größtenteils rekombinant durch rekombinante E. coli- oder Hefesysteme exprimiert und durch mehrstufige Chromatographie gereinigt, ohne Heterozymverunreinigungen wie Chymotrypsin. Rekombinantes Trypsin hat die gleichen Eigenschaften wie natürlich extrahiertes Trypsin, mit einer Aminosäuresequenz, die homolog zur Schweinetrypsinsequenz ist und spezifisch die Carboxylgruppen in Lysin- und Argininresten in der Polypeptidkette spaltet.Da es nicht aus tierischen Quellen stammt und hochreinheitlich ist, findet es in der Arzneimittelentwicklung, der biochemischen Forschung, der Proteomik und anderen Bereichen breite Anwendung.

Das gängigste rekombinante Trypsin auf dem Markt ist ein rekombinantes Schweinetrypsin, das mithilfe der DNA-Rekombinationstechnologie in Escherichia coli oder Hefe exprimiert wird. Seine Aminosäuresequenz stimmt vollständig mit der von Schweinetrypsin überein und weist dieselbe Aktivität und Spezifität wie natürliches Trypsin auf. Es besteht aus 223 Aminosäuren und enthält 6 Paare Disulfidbindungen. Das Enzym enthält zwei aktive Formen von Trypsin: α-Trypsin und β-Trypsin. Seine Aktivität wird durch Serinproteaseinhibitoren wie PMSF und TLCK, Metallionenchelatoren wie EDTA usw. gehemmt. Rekombinantes Trypsin wird in serumfreier Kultur verwendet, und wie bei Trypsin werden verschiedenen Zellen unterschiedliche Komponenten und Konzentrationen von Trypsin hinzugefügt.

Anwendungen

1. Impfstoff- und rekombinante Insulinproduktion;
2. Vorbereitung von Gewebeproben für die Zellanalyse;
3. Immunzelltherapie;
4. Biopharmazeutische Produktion;
5. Proteinsequenz-, Struktur- und Omics-Forschung

Detaillierter Produktvergleich

Produkte	Nicht-rekombinantes Trypsin (tierischen Ursprungs)	Rekombinantes Trypsin (tierischen Ursprungs)
Artikel	40123ES (Phenolrot(-),EDTA(+)) 40124ES (Phenolrot(-),EDTA(-)) 40126ES (Phenolrot(+),EDTA(-)) 40127ES (Phenolrot(+), EDTA(+))	40512ES 20416ES (MS-SAFE)
Quelle	Aus der Bauchspeicheldrüse von Rindern, Schweinen und Schafen	colibacillus (40512ES) Pichia pastoris (20416ES)
Sicherheit	Kontamination mit potenziellen Krankheitserregern	Keine exogene Viruskontamination
Reinheit	Mehr als 90 % der 1:250 Trypsinlösung sind Verunreinigungen	Hohe Reinheit (β-Trypsin≥ 70%, α-Trypsin ≤ 20 %)
Verdauungszelltyp	Die meisten zusammenhängenden, stark anhaftenden Zelllinien	Die meisten zusammenhängenden, stark anhaftenden Zelllinien
Chymotrypsin-Grenze	Nicht mehr als 50 Einheiten Chymotrypsin pro 2500 Einheiten Trypsin.	Keine Myrosinase und andere verunreinigende Enzymkontamination
Spezifische Aktivität	≥2500 USP-Einheiten/mg Protein	≥3800 USP-Einheiten/mg Protein
Verdauungsfördernde Wirkung	Instabilität	Starke Verdauung und geringe Enzymmenge
Selbstschneiderate	Es ist leicht, sich selbst zu schneiden und selbstschneidende Fragmente zu produzieren, was die Ergebnisse der Massenspektrometrieanalyse beeinflusst	Es ist leicht, sich selbst zu schneiden und selbstschneidende Fragmente zu produzieren, was die Ergebnisse der Massenspektrometrieanalyse beeinflusst
Gelöste Flüssigkeit	HBSS-Lösung mit oder ohne Ca2+, Mg2+	HBSS-Lösung mit oder ohne Ca2+ und Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL (20416ES)
Zellüberleben	Normal	Normal
Ob Frost-Tau-Verfahren erforderlich sind	Ja	Ja

Neben dem am häufigsten bei der Zellverdauung verwendeten Trypsin gibt es viele weitere Arten von Verdauungsenzymprodukten, die ebenfalls verwendet werden können, wie zum Beispiel die folgenden.

Über das Anwendungsgebiet der Kollagenase

Kollagenase ist eine Peptidase-Endonuklease, die spezifisch die Pro-X-Gly-Pro-Sequenz erkennen und die Peptidbindung zwischen der neutralen Aminosäure (X) und Glycin (Gly) in der Sequenz spalten kann. Kollagenase ist die einzige Protease, die die natürlichen Kollagenfibrillen mit einer dreisträngigen, superspiralisierten Struktur abbauen und andere Proteine, Polysaccharide und Lipide in der extrazellulären Matrix von Bindegewebe und Epithelgewebe wirksam hydrolysieren kann, wodurch sich dieses Produkt sehr gut für die Gewebeverdauung eignet.

1. Kollagenase I, häufig verwendet als Präparat aus Epithelzellen, Leber-, Lungen-, Fett- und Nebennierengewebezellen;
2. Kollagenase II, die zur Herstellung von aus Gewebe gewonnenen Zellen wie Herz, Knochen, Muskel, Leber, Schilddrüse und Knorpel verwendet wird;
3. Kollagenase III, wird häufig bei der Herstellung von Brustzellen verwendet;
4. Kollagenase IV, die häufig zur Präparation von Pankreasinselzellen oder für Zellpräparationsexperimente verwendet wird, bei denen die Rezeptorintegrität gewahrt werden muss.
5. Kollagenase V., geeignet zur Isolierung von Pankreasinselzellen und Bindegewebszellen.

Über das Anwendungsgebiet von Compound-Trypsin

Accutase ist ein Zellverdau, der proteolytische und Kollagenase-Aktivität enthält und ein perfekter Ersatz für Trypsin-EDTA-Verdauungen zum Verdauen von Zellen aus herkömmlichen Gewebekulturgefäßen und Gefäßen für anhaftende Kulturen ist. Accutase eignet sich für die Gewebedissoziation und Zellisolierung, da die isolierten Zellen intakte Oberflächenantigene behalten und keine tierischen oder bakteriellen Bestandteile enthalten, wodurch die Anforderungen nachfolgender Experimente wie Zelloberflächenmarkierung, Viruswachstumsanalyse, Durchflusszytometrie und bioreaktorbezogene Assays erfüllt werden können.

Anwendungsgebiete für Pankreasenzymersatz

PerfCell Tryzyme™ Express-Enzymprodukte sind hochrein, verursachen nur geringe Zellschäden, sind schonend verdaulich und können bei Raumtemperatur stabil gelagert werden, was sie zu einem idealen Verdauungsenzym für verschiedene Zelllinienkulturen macht. Dieser Produkttyp erfordert keine Trypsininhibitoren zur Inaktivierung und enthält keine tierischen Inhaltsstoffe, was für einige serumfreie Wachstumsexperimente mit anhaftenden Zellen besser geeignet ist.

Über den Anwendungsbereich von Dispase

Dispase II Dispase II, eine unspezifische Metalloproteinase, wird in der Zellbiologie häufig verwendet, um einzelne Zellen aus verschiedenen Geweben oder Organen zu isolieren, und wird in nachfolgenden Zellkulturen verwendet, beispielsweise zur Isolierung von Primärzellen, zur Zellpassage usw., und kann auch verwendet werden, um Zellaggregationen zu beseitigen, die während der Suspensionszellkultur auftreten. Im Vergleich zu anderen in der Zellbiologie häufig verwendeten Proteasen (z. B. Trypsin, Kollagenase, Pronase usw.) hat dieses Enzym die folgenden Vorteile:

1. Schnelle, wirksame und schonende Zellverdauungsenzyme, die die Zellen kaum schädigen und die Integrität der Zellmembranen aufrechterhalten können;
2. Stammt aus Bakterien, keine Kontamination mit Mykoplasmen oder anderen tierischen Viren;
3. Starke Stabilität, wird nicht durch Temperatur, pH-Wert und Serumbestandteile beeinflusst;
4. Es kann zur Isolierung verschiedener Gewebe- und Zelltypen verwendet werden.

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