Reduzieren Sie die Zeit effizient und sorgen Sie für eine Qualität mit dem neuesten Upgrade auf OnePot -mRNA -Transkriptionsprozess!

In den letzten Jahren haben die Entwicklung und Anwendung der mRNA-Technologie weiterhin Aufmerksamkeit erregt. Bei mRNA-Medikamenten wird mRNA, die Antigenproteine ​​kodiert, in den menschlichen Körper injiziert. Unter Verwendung des genetischen Materials in menschlichen Zellen exprimieren und synthetisieren sie Antigenproteine. Dieser Prozess induziert und aktiviert das Immunsystem des Körpers durch Antigenproteine ​​und zielt darauf ab, Krankheiten vorzubeugen und zu behandeln. mRNA-Medikamente haben Vorteile wie Sicherheit, Effizienz und einen kurzen Zyklus. Sie können gleichzeitig humorale und zelluläre Immunität induzieren und werden bei verschiedenen Indikationen angewendet, darunter Tumoren, Infektionskrankheiten, seltene Krankheiten, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und mehr.

Der gesamte Prozess der mRNA-Arzneimittelentwicklung kann grob in mehrere Schritte unterteilt werden:

Sequenzbestimmung und -design – mRNA-In-vitro-Transkription – Verkapselungsvorbereitung

Der konventionell Zu den Schritten der mRNA-In-vitro-Transkription (IVT) gehören:

Plasmid-DNA-Extraktion und Linearisierung—Plasmid-DNA-Reinigung—In vitro-Transkription (Co-Transkriptionelles Capping)—Reinigung—mRNA-Stammlösung

Der Eintopf Zu den mRNA-In-vitro-Transkriptionsprozessen (IVT) gehören:

Plasmid-DNA-Extraktion und Linearisierung—In-vitro-Transkription (Co-Transkriptionelles Capping) – Reinigung – mRNA-Stammlösung

Derzeit umfassen die meisten bestehenden Verfahren einen einzigen Reinigungsschritt für Plasmid-DNA nach enzymatischer Spaltung vor dem IVT-Schritt. Yeasen Biotechlogy hat auf der Grundlage eines ausgereiften mRNA-Anwendungsentwicklungszentrums das Verfahren „Onepot mRNA Transcription“ entwickelt. Bei diesem Verfahren wird zirkuläre Plasmid-DNA nach enzymatischer Spaltung nicht gereinigt, sondern direkt für die In-vitro-Transkription verwendet, wodurch eine hochwertige mRNA-Stammlösung entsteht. Dieser gesamte Prozess verkürzt die Dauer des bestehenden Verfahrens und stellt gleichzeitig die Produkt- und Prozessqualität sicher.

Prozessvorteile:

1. Prozessoptimierung, Reduzierung der IVT-Schritte für eine einfachere Bedienung.
2. Geringere Materialkosten, da keine Reinigung und Qualitätskontrolle nach der Spaltung erforderlich ist.
3. Aufrechterhaltung der mRNA-Qualität und -Ausbeute.

Daten:

1. Erträge und Integrität:

Mithilfe der 1 μg linearisierter 2K-, 4K- und 9K-Plasmide, im Eintopfverfahren können 150–200 μg mRNA erzeugt werden.

Länge	Erträge	Integrität
2K	200 μg	94,00 %
4K	185 μg	92,20 %
9K	150 μg	87,50 %

Die Integritätsprüfung wurde mittels Kapillarelektrophorese (CE) durchgeführt, um die Integrität von Fragmenten mit Längen von 2K, 4K und 9K zu bewerten. Die Integrität von 2K- und 4K-Fragmenten betrug >92 %, und die Integrität von 9K-Fragmenten betrug >87 %.

2. mRNA Capping Effizienz Erkennung

Mittels LC-MS wurde die Capping-Effizienz der 2K-Sequenz beurteilt. Dabei ergab sich eine Capping-Effizienz von 99,5 %.

Oberes Bild: HPLC-UV-Chromatogramm

Unteres Bild: Dekonvolutiertes Molekulargewichtsspektrum

3. mRNA-Polyadenylierungseffizienz-Erkennung

Zur Ermittlung der Polyadenylierungseffizienz der Proben wurde LC-MS verwendet, wobei sich zeigte, dass die Ergebnisse normal verteilt waren.

Oberes Bild: TIC-Chromatogramm der Flüssigkeitschromatographie

Unteres Bild: Dekonvolutiertes Molekulargewichtsspektrum

4.mRNA-Expression Untersuchung

Transfektion von 293T-Zellen mit mRNA-Produkten, die sowohl mit dem konventionell Verfahren (Links, linearisierte Plasmide mith Reinigung) und das Eintopfverfahren (rechts, linearisierte Plasmide ohne Reinigung) zeigte nach 24 Stunden Kultur keinen Unterschied in der Fluoreszenzproteinexpression.

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