Kostenloser Leitfaden: Optimierung der Proteinreinigungs Workflows

Die Proteinreinigung ist eine grundlegende Technik in der Biochemie und Molekularbiologie, die in Forschung, Diagnostik und therapeutischen Anwendungen umfassend eingesetzt wird. Um ein bestimmtes Protein zu untersuchen, besteht der erste Schritt darin, es aus biologischen Proben zu isolieren und zu reinigen. Angesichts der Vielfalt von Proteinen und der Komplexität biologischer Systeme kann es jedoch eine Herausforderung sein, hochreines Protein zu erhalten. Wenn Sie die Grundprinzipien der Proteinreinigung verstehen und die richtigen Techniken für Ihre Forschung auswählen, können Sie die Effizienz und Ausbeute Ihrer Arbeitsabläufe erheblich steigern.

Die Grundlagen der Proteinreinigung

Die Proteinreinigung beruht auf Unterschieden in den physikalischen und chemischen Eigenschaften von Proteinen, wie Größe, Ladung, Hydrophobie und Affinität zu bestimmten Liganden. Durch Ausnutzung dieser Unterschiede können Forscher Zielproteine ​​effektiv von anderen biologischen Komponenten trennen und so die Kontamination minimieren.

Hier sind die wichtigsten Proteinreinigungstechniken, die auf unterschiedlichen Trennmechanismen basieren:

Jede dieser Techniken kann durch die Auswahl geeigneter Materialien und Säulen optimiert werden. Die ideale Methode hängt von den Eigenschaften des Proteins und dem für nachfolgende Anwendungen erforderlichen Reinheitsgrad ab.

Optimieren Sie Ihren Proteinreinigungs-Workflow mit Yerleichtern Biologieprodukte

Bei Yeasen Biologie: Wir bieten eine breite Palette hochwertiger Reagenzien und Materialien zur Optimierung der Proteinreinigung. Ob Sie mit komplexen biologischen Proben arbeiten oder hochergiebige, hochreine Proteine ​​benötigen, wir bieten Ihnen Werkzeuge zur Verbesserung Ihres Reinigungsprozesses. Hier ist eine Übersicht über einige unserer wichtigsten Produkte, die Ihnen bei der Optimierung Ihrer Reinigungsabläufe helfen:

Sein Tag Proteinreinigung (Kat.-Nr. 20502ES):

Bei der rekombinanten Proteinexpression Sein Tag (normalerweise 6×His) wird aufgrund seiner geringen Größe, niedrigen Immunogenität und minimalen Auswirkung auf die Proteinfunktion häufig verwendet. Seine Tag-Proteine ​​können effizient durch Affinitätsharze gereinigt werden, die mit Nickelionen chelatiert sind, wie etwa Ni-NTA-Harze. HisSep Ni-NTA Agarose-Harz (Kat.-Nr. 20502ES) bereitgestellt von Yerleichtern Biologie verwendet hochvernetztes Agarosegel als Matrix, kombiniert mit dem vierfach koordinierten Stickstofftriessigsäure-Liganden (NTA), um stabile Nickelionenchelate zu bilden. Die kombinierte Struktur gewährleistet eine effiziente Proteinbindung und Elutionsleistung.

Tag-Antikörper-Affinitätsreinigung

Bei der Affinitätsreinigung von Tag-Antikörpern wird eine hohe spezifische Bindung zwischen dem Antikörper und seinem spezifischen Tag genutzt, um die Reinigung des Fusionsproteins zu erreichen. Zu den üblichen Tags gehören Flagge, HA, Mycusw. Durch Verwendung der entsprechenden Antikörper-Affinitätsmedien kann das gewünschte Protein effizient aus komplexen Proben isoliert werden.

Yeasen Biologie bietet eine Vielzahl von Produkten zur Affinitätsreinigung markierter Antikörper an:

• Anti-Flag-Affinität Gel (Kat.-Nr.: 20584ES):
  Hergestellt aus hochwertigem murinem IgG2b monoklonalem Antikörper mit 4% hochvernetztem Agarosegel durchugh Versorgungskopplung, es hat eine hohe Flag-Tag Fusionsprotein-Ladekapazität, suitable für Immunpräzipitation und Reinigung von Flag-Tag-Proteinen. yeasen.com

• Anti-HA Affinitätsgel(Katze#20586ES):
  Hergestellt aus hochwertigem murinem IgG1-monoklonalen Antikörper und Sepharose 4B-Gel durch Zufuhrkopplung, verfügt es über eine hohe Beladungskapazität für HA-Tag-Fusionsproteine ​​und eignet sich für die Immunpräzipitation und Reinigung von HA-Tag-Proteinen. Yeasen.mit

• Anti-Myc Affinitätsgel（Katze#20587ES）:
  Der hochwertige murine IgG1-monoklonale Antikörper ist an Sepharose 4B-Gel gekoppelt und wurde für die Reinigung von Myc-markierten Proteinen mit hoher Spezifität und hoher Bindungsfähigkeit entwickelt.

• Anti-Flag Immunmagnetische Perlen（Kat.-Nr.: 20565ES）:
  Diese immunomagnetische Perle ist mithilfe eines hochwertigen, aus der Maus stammenden monoklonalen IgG2b-Antikörpers mit magnetischen Agarose-Mikrokügelchen gekoppelt, kann Flag-markierte Proteine ​​unter Einwirkung magnetischer Felder schnell reinigen und eignet sich für die Reinigung kleiner Probengrößen.

Antikörper-Affinitätsreinigung (Kat.-Nr. 36401ES):

Antikörper-Affinitätsreinigung ist eine Methode, bei der die spezifische Bindung eines Antikörpers an sein Antigen zur Proteinreinigung genutzt wird. Alkalibeständiges, rekombinantes Protein A-Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 36401ES) wird häufig als Affinitätsreinigungsmedium für Antikörper verwendet und wird häufig zur Antikörperreinigung und -anreicherung eingesetzt.

Proteinase

Bei Proteinstudien werden Proteasen eingesetzt, um Fusionsmarkierungen zu spalten und so den natürlichen Zustand des Zielproteins wiederherzustellen. Die Einbindung dieser Proteasen in Ihren Proteinreinigungs-Workflow kann die Qualität und Funktionalität Ihrer Zielproteine ​​verbessern und so fortgeschrittene Forschungs- und Entwicklungsprojekte erleichtern.

• Rekombinante Enterokinase (Kat.-Nr. 20401ES):

Enterokinase, auch Enteropeptidase genannt, ist eine Serinprotease, die spezifisch nach der Aminosäuresequenz DDDDK spaltet. Yeasens rekombinante Enterokinase wird exprimiert in Escherichia coli und ist frei von Markierungen, sodass es nachfolgende Anwendungen nicht beeinträchtigt. Dieses Enzym eignet sich ideal zum Entfernen von Fusionsmarkierungen von rekombinanten Proteinen und erleichtert die Produktion nativer Proteine ​​für Struktur- und Funktionsstudien.

• mPNGase F (Kat.-Nr. 20407ES):

PNGase F ist eine Amidase, die spezifisch zwischen den innersten GlcNAc- und Asn-Resten von N-gebundenen Glykoproteinen spaltet. Yeasens PNGase F wird in einer Konzentration von 100.000 U/ml bereitgestellt und bietet eine hohe Aktivität für Deglykosylierungsreaktionen. Dieses Enzym ist für die Untersuchung von Glykoproteinstrukturen und -funktionen von entscheidender Bedeutung, da es N-gebundene Glykane entfernt, ohne das Peptidrückgrat zu beeinträchtigen.

• Rekombinantes Trypsin (MS-SAFE) (Kat.-Nr. 20416ES):

Trypsin ist eine Serinprotease, die Peptidbindungen auf der Carboxylseite von Lysin- und Argininresten spaltet. Yeasens rekombinantes Trypsin ist MS-SAFE, d. h. es ist aufgrund seiner hohen Reinheit und minimalen autolytischen Aktivität für Massenspektrometrieanwendungen geeignet. Dieses Enzym ist ideal für proteomische Studien, einschließlich der Proteinverdauung für die Massenspektrometrieanalyse.

Reinigung Verfahren	Reagenztyp	Produkttyp	Empfohlene Produkte
Gelfiltration	Dextran Gel Chromatographie	Entsalzungsfüller Entsalzung vorgepackter Säulen Entsalzungs-Schwerkraftsäulen Spin-Säulen	Entsalzungskolonne G25 M（Kat.-Nr.: 20590ES） Spin-Entsalzungssäule, 0,5 ml （Kat.-Nr.: 20599ES） Schwerkraft-Entsalzungssäule, 8.3 ml (Kat.-Nr.: 20741ES）
	Agarose Gel Chromatographie	Füllstoff Vorgepackte Säulen	Geldex 200 PG Hochauflösungs-Agarose-Gelchromatographie-Packung (10-600 kDa) (Kat.-Nr. 20598ES) Geldex 200 PG Chromatographiesäule （Kat.-Nr.: 20593ES）
Ionenaustausch	Anionenaustausch Chromatographie	Füllstoff Vorgepackte Säulen	Q Agarose HP (Q Starke Anionenaustauschchromatographie-Packung HP) (Kat.-Nr. 20460ES) Q HP Starke Anionenaustauschersäule, vorgepackt, 5 ml (Kat.-Nr. 20462ES)
	Kationenaustauschchromatographie		SP Agarose HP (SP starke Kationenaustauschchromatographie-Packung HP) (Kat.-Nr. 20463ES) SP HP Starke Kationenaustauschersäule, vorgepackt, 5 ml (Kat.-Nr. 20465ES)
Hydrophobe Interaktionschromatographie	Schwach hydrophob Chromatographie	Füllstoff Vorgepackte Säulen	Schwaches hydrophobes Butyl-Chromatographiemedium mit hoher Auflösung (Kat.-Nr. 20484ES) Butyl HP schwach hydrophobe Chromatographie-Vorsäule, 5 ml (Kat.-Nr. 20485ES)
	Stark hydrophob Chromatographie		Hochauflösendes, stark hydrophobes Phenyl-Chromatographiemedium (Kat.-Nr. 20486ES) Vorgeladene Phenyl HP-Säule für stark hydrophobe Chromatographie, 5 ml (Kat.-Nr. 20487ES)
Affinitätsreinigung	Sein Tag Proteinreinigung	Harz Vorgepackte Säulen Magnetische Reinigungsperlen	His-Tag-Protein-Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 20502ES) Vorgeladene Säule zur His-Tag-Proteinreinigung, 5 ml (Kat.-Nr. 20504ES) Magnetische Kügelchen zur His-Tag-Proteinreinigung (Kat.-Nr. 20561ES)
	Mehrwertsteuer-Etikett Proteinreinigung	Harz Vorgepackte Säulen Magnetische Reinigungsperlen	Glutathion-Agarose-Harz (zur Reinigung von GST-markierten Proteinen) (Kat.-Nr. 20507ES) Vorgeladene Säule zur Aufreinigung von Proteinen mit GST-Tag, 5 ml (Kat.-Nr. 20510ES) GST-markierte magnetische Perlen zur Proteinreinigung (Kat.-Nr. 20562ES)
	MBP-Etikett Proteinreinigung	Harz Vorgepackte Säulen	MBP-markiertes, hochvernetztes Protein-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 20515ES) Vorgeladene MBP-Säule zur Reinigung markierter Proteine, 5 ml (Kat.-Nr. 20517ES)
	Streptokokken(Ⅱ) Etikett Proteinreinigung	Harz Vorgepackte Säulen	Strep(II)-markiertes Protein-Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 20495ES)
	Bioti-Etikett Proteinreinigung	Harz Vorgepackte Säulen Immunmagnetische Perlen	Streptavidin-Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 20512ES) Vorgeladene Säule zur molekularen Biotinreinigung, 5 ml (Kat.-Nr. 20514ES) Streptavidin (SAV) Immunomagnetische Perlen (Kat.-Nr. 47503ES)
	Tag-Antikörper-Affinitätsreinigung	Gel Immunmagnetische Perlen	Anti-Flag Affinity Reinigungsgel (Kat.-Nr. 20584ES) Anti-HA Affinitäts-Reinigungsgel (Kat.-Nr. 20586ES) Anti-Myc Affinitäts-Reinigungsgel (Kat.-Nr. 20587ES) Anti-Flag Immunmagnetische Perlen (Kat.-Nr. 20565ES)
	Antikörper-Affinitätsreinigung	Harz Vorgepackte Säulen Immunmagnetische Perlen	Rekombinantes Protein A Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 36401ES) Protein G Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 36405ES) Protein A/G Agarose-Reinigungsharz (Kat.-Nr. 36403ES) Protein A/G Immunmagnetische Perlen (Kat.-Nr. 36417ES)
	Andere Antikörper-Affinitätsreinigung	Harz Vorgepackte Säulen	Reinigungsharz zur hocheffizienten Entfernung von Endotoxinen (Kat.-Nr. 20518ES) Heparin-Affinitätsreinigungsmedium (Kat.-Nr. 20493ES)
Weiteres	Proteasen	Tag-spaltende Enzyme Glykosidasen Enzyme in Massenspektrometriequalität	E.coli-exprimierte rekombinante Enterokinase (ohne Markierung) (Kat.-Nr. 20401ES) Bovines Thrombin (hohe Lebensfähigkeit, >2000 IU/mg) (Kat.-Nr. 20402ES) rTEV-Protease Rekombinante Tabak-Ätzvirus-Protease (Kat.-Nr. 20403ES) PNGase F, N-Glycosidase F (100000 U/mL) (Kat.-Nr. 20407ES) Rekombinantes Trypsin (MS-SAFE) Rekombinantes Trypsin (Massenspektrometrie-Qualität) (Kat.-Nr. 20416ES)
	Chromatographie-Verbrauchsmaterialien	Schwerkraftfluss - Leere Säulen Typ Leere Spalten YXK-Säulen Dialysebeutel	12 ml leere Schwerkraftchromatographiesäule (Kat.-Nr. 20523ES) 5 ml, leere Säule Typ C (angeschlossen an Akata, Spritze oder Schlauchpumpe) (Kat.-Nr. 20526ES) YXK16/70 Chromatographie-Leersäule (Kat.-Nr. 20443ES) 27 mm Dialysebeutel (MWCO 50 kDa) (Kat.-Nr. 20534ES)

Fazit: Passen Sie Ihren Workflow an Ihre Bedürfnisse an

Die Optimierung Ihres Proteinreinigungs-Workflows ist entscheidend, um hochreine Proteine ​​mit hoher Ausbeute für Ihre Forschung oder Anwendung zu erhalten. Wenn Sie die Reinigungsprinzipien verstehen und die richtigen Werkzeuge auswählen, können Sie Ihren Prozess optimieren und häufige Fehler vermeiden. Yeasen Biology bietet Reagenzien und Verbrauchsmaterialien höchster Qualität für alle Phasen der Proteinreinigung und stellt sicher, dass Ihre Proteine ​​rein, funktionsfähig und bereit zur Analyse sind.

Um mehr darüber zu erfahren, wie unsere Produkte Ihren Proteinreinigungsprozess verbessern können, besuchen Sie unsere Produktseiten oder kontaktieren Sie unser Team für personalisierte Empfehlungen.

Für weitere Informationen oder zum Kauf besuchen Sie unsere offiziell wirBWebsite.