Yeasen Anti-DYKDDDDK (Flag)-Affinitätsgel: Präzisionsreinigung für Membranproteine ​​mit geringer Häufigkeit

Im Bereich der biomedizinischen Forschung ist die Proteinreinigung eine Schlüsseltechnologie zur Erforschung der Geheimnisse des Lebens. Traditionelle Reinigungsmethoden haben jedoch mit Ineffizienz und hohen Kosten zu kämpfen – insbesondere bei Membranproteinen, die im Fokus der Strukturbiologieforschung stehen. Diese Proteine ​​sind strukturell komplex, weisen niedrige Expressionsniveaus in Zellmembranen auf und reagieren empfindlich auf Umweltbedingungen, was ihre Reinigung besonders schwierig macht. Yeasen Biotech mit seinen hervorragenden F&E-Kapazitäten hat die verbesserte Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Kat.-Nr. 20584ES), ein leistungsstarkes Werkzeug zur effizienten und bequemen Proteinreinigung, selbst für anspruchsvolle Membranproteine.

Produktleistung

1. Hohe Spezifität und hohe Bindungskapazität: Wichtige Vorteile für die Zielproteinerfassung

Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Kat.-Nr. 20584ES) wird durch kovalente Kopplung hochwertiger monoklonaler Maus-IgG2b-Antikörper mit 4% hochvernetztem Agarosegel hergestellt. Dieses einzigartige Herstellungsverfahren verleiht dem Produkt eine extrem hohe Spezifität und ermöglicht es ihm, Fusionsproteine ​​mit dem Flag-Tag präzise zu erkennen und zu binden. Ob es sich nun um das durch Met (Met-Flag-Protein), das N-terminale Flag-Fusionsprotein (Flaggen-Protein) oder das C-terminale Flag-Fusionsprotein (Protein-Flag), kann das Gel problemlos damit umgehen.

Bei der Reinigung von Membranproteinen ist diese Spezifität besonders wichtig, da diese Proteine ​​strukturell komplex sind und zu unspezifischen Bindungen mit anderen Proteinen neigen. Die hohe Spezifität des Flag-Gels reduziert wirksam Störungen durch unspezifische Proteine ​​und gewährleistet so eine hohe Reinheit der gereinigten Membranproteine. Darüber hinaus hat das Gel eine hohe Bindungskapazität für Flag-markierte Fusionsproteine ​​(mindestens 1,1 mg Protein/ml Das bedeutet, dass das Zielprotein auch dann effizient erfasst und mithilfe des Flag-Gels gereinigt werden kann, wenn es nur in geringen Mengen exprimiert wird.

2. Hohe Reinheit und hohe Ausbeute: Ermöglichung nachgelagerter Anwendungen

Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Kat.-Nr. 20584ES) weist eine minimale unspezifische Bindung von Verunreinigungen auf, was nach der Reinigung zu hochreinen Proteinproben führt. Dies ist für nachgelagerte Anwendungen wie Bioaktivitätstests und Strukturanalysen von entscheidender Bedeutung. Hochreine Proteinproben liefern genauere experimentelle Daten und bilden eine solide Grundlage für die Studien der Forscher.

3. Optimierter experimenteller Arbeitsablauf: Vereinfachung der Herausforderungen bei der Proteinreinigung

Die Proteinreinigung muss unter milden Bedingungen durchgeführt werden, um strukturelle Schäden an den Proteinen zu vermeiden, insbesondere bei komplexen Membranproteinen. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Kat.-Nr. 20584ES) ist mit diesem Gedanken konzipiert. Sein Speicherpuffer ist TBS mit 50 % Glycerin bei pH 7.4, das nicht nur die Aktivität des Gels schützt, sondern auch eine schonende Umgebung für die Proteinreinigung bietet.

Der Reinigungsprozess mit dem Flag-Gel ist einfach und effizient. Um die Verwendung der 1×Flag-Peptidelution zu erleichtern, enthält das Produktpaket ein kostenloses 1×Flag-Peptid (Cat#20572ES). Dies macht den Elutionsprozess schonend (mit fast keiner Schädigung der Proteine) und äußerst praktisch (was das Experimentieren weiter erleichtert).

4. Mehrere Größen und flexible Versandoptionen: Erfüllung unterschiedlicher experimenteller Anforderungen

Angesichts der unterschiedlichen Größenordnungen und Bedürfnisse verschiedener Laboratorien, Yeasen bietet das Flag Gel in mehreren Größen an, darunter 1 ml, 5 ml, 25 ml und 100 ml. Ob für vorläufige Erkundungen im kleinen Maßstab oder Proteinproduktion im großen Maßstab, es gibt eine passende Option. Bei jährlichen Großabnahmen können Kunden Lieferungen in Chargen wählen, wodurch sie von Preisnachlässen profitieren und gleichzeitig den Druck übermäßiger Lagerbestände vermeiden können.

Testdaten

M: Proteinmarker 1: Vorsäulen-Rohprobe des Flag-N/Flag-M/Flag-C-Proteins 2: Nachsäulendurchfluss des Flag-N/Flag-M/Flag-C-Proteins 3: Elution (pH 2,7 Elution) 4: Elution (pH 12 Elution) 5: Elution (1×Flag-Peptid-Elution) 6: Gereinigtes Gel (pH 2,7 Elution) 7: Gereinigtes Gel (pH 12 Elution) 8: Gereinigtes Gel (1×Flag-Peptid-Elution) A:Flagge-N   B:Flagge-M   C:Flagge-C

Abbildung 1.   Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel Reinigungsergebnisse für niedrig exprimierende Proteine ​​(Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)), dargestellt in SDS-PAGE.

M: Proteinmarker 1: Vorsäulen-Rohprobe des Flag-C-Proteins 2: Nachsäulendurchfluss des Flag-C-Proteins 3: Elution (pH 2,7 Elution) 4: Elution (pH 12 Elution) 5: Elution (1×Flag-Peptid-Elution) 6: Gereinigtes Gel (pH 2).7 Elution) 7: Gereinigtes Gel (pH 12 Elution) 8: Gereinigtes Gel (1×Flag-Peptid-Elution) A:Yeasen B:Marke S*   C:Marke G*

Figur 2. Vergleich von Yeasen (a) mitBrand S* (b) und Brand G* (c) Anti-Flag-Gele bei der Reinigung niedrig exprimierter Proteine ​​(z. B. Membranproteine), dargestellt in SDS-PAGE.

Schlussfolgerungen:

1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Kat.-Nr. 20584ES) hat eine hohe Spezifität und kann an Flag-Tags an verschiedenen Positionen binden (N-terminale Flag-Fusionsproteine, Met-modifizierte N-terminale Flag-Fusionsproteine, C-terminale Flag-Fusionsproteine).

2. Unter Bedingungen extrem niedriger Zielproteinexpression (z. B. Membranproteine), Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel (Cat#20584ES) erzielt im Vergleich zu Wettbewerbern deutlich höhere Ausbeuten und Reinheiten. Der Einsatz von Yeasen Das kostenlose 1×Flag-Peptid (Cat#20572ES) zur Elution liefert sogar noch bessere Ergebnisse.

Komplettlösungen für Flag-Tagged Fusionsproteine:

Rekombinante Enterokinase (Kat.-Nr. 20395ES): Eine spezifische Protease, die das Carboxylende von Lysin spaltet, dem vier Asparaginsäuren vorangehen: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Diese Sequenz ist Teil des Octapeptid-Flag-Tags (DYKDDDDK). Rekombinante Enterokinase (rEK) kann den Flag-Tag problemlos von Fusionsproteinen entfernen und ist somit ein ideales Werkzeug zum Studium der Struktur und Funktion nativer Proteine.

Anti-DYKDDDDK(Flagge) MagBeads (Kat.-Nr. 20565ES): Magnetische Polymermikrokügelchen, hergestellt durch kovalente Kopplung hochwertiger monoklonaler Maus-Anti-DYKDDDDK (Flag)-Antikörper mit magnetischen Kügelchen auf Silica-Basis (Durchmesser von 200 nm). Diese Beads eignen sich für die Immunpräzipitation (IP) oder Co-Immunpräzipitation (Co-IP) von Proteinen mit dem Flag-Tag.

Produktinformationen

Produktname	Produktnummer	Spezifikation
Anti-DYKDDDDK(Flag)-Affinitätsgel	20584ES03/25.08.	1 ml/5 ml/25 ml
Rekombinante bovine Enterokinase, His, exprimiert in Hefe	20395ES60/76/90	100 U/500 U/5000 U
Anti-DYKDDDDK(Flagge) MagBeads	20565ES03/08	1 ml/5 ml