Protein A und Protein G sind die Goldstandard-Proteine für die Antikörper-Affinitätsreinigung und Immunpräzipitation (IP). Durch die kovalente Kopplung von Protein A und Protein G an Agarose oder magnetische Beads bieten diese Werkzeuge ein breiteres Bindungsspektrum im Vergleich zu Beads mit nur einem Proteintyp und erhöhen so ihre Vielseitigkeit. Darüber hinaus werden die in diesen Produkten verwendeten Proteine A und G gentechnisch verändert, um ihre hohe Affinität zu Immunglobulinen (Ig) beizubehalten und gleichzeitig nicht-primäre Bindungsdomänen zu eliminieren, wodurch unspezifische Interaktionen reduziert werden.
Tabelle 1: Vergleich von Protein A/G-Agarose-Perlen und magnetischen Perlen
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| rProtein A/G-Agarose Harz | Protein A/G MagBeads |
| Matrix | Hochvernetzte 4%ige Agarose-Mikrokügelchen | Magnetische Beads auf Silica-Basis |
| Partikelgröße | 45-165 µm | 200 nm |
| Kapazität | >20 mg hIgG/ml Harz | >0,7 mg hIgG/ml magnetische Kügelchen |
| Vorteile | Einfach zu bedienen, keine Zusatzgeräte erforderlich | Einfache Bedienung |
| Große Porengröße, starke Bindungskraft | Kleiner Durchmesser, gute Kinetik | |
| Hohe Ausbeute an Zielprotein | Glatte Oberfläche, minimale Perlenadsorption, geringer Hintergrund, geringerer Antikörperverbrauch | |
| Nachteile | Porös und anfällig für Adsorption (Vorreinigung erforderlich) | Bequem zu verwenden mit einem magnetischen Rack |
Produktanwendungen
1. Reinigung von Antikörpern
Isolieren Sie hochreine Antikörper aus Serum oder Aszites in einem einzigen Schritt.
2. Immunpräzipitation (IP)
Spezifisches Protein anreichernS um seine Eigenschaften (wie posttranslationale Modifikationen) zu untersuchen.
3. Co-Immunpräzipitation (Co-IP)
Bereichern Ziel Protein zu untersuchen andere Proteine, die daran binden (d. h. Protein-Protein-Interaktionen, Proteinkomplexe usw.).
Vorgehensweise
Testdaten
1. Reinigung von Antikörpern aus Kaninchenserum mittels RProtein A/G Agarose Harz.
 | M: Proteinmarker L: Rohprobe vor der Säule elu: Elution |
Abbildung 1. Elektrophorese-Ergebnis der Antikörperreinigung mittels RProtein A/G Agarose Harz.
2. Antikörper-Konjugationsexperiment mit Protein A/G MagBKöpfe
 | 1: NC 2: 3: 4: Konkurrent |
Figur 2.
3. Verwendung von Protein A/G Magbeads für IP
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Zielprotein 1: NC 2: 3: 4: Konkurrent |
Figur 3.
4. Verwendung von Protein A/G Magbeads für Co-IP: Spezifische Antikörper gegen p65 und Cyclin-abhängige Kinase 9 (CDK9) werden für die Immunpräzipitationsanalyse des extrahierten gesamten Zellproteins verwendet.
Figur 4. Anschließend wurden die Immunpräzipitanten einer Western-Blot-Analyse mit spezifischen Antikörpern gegen CDK9 und p65 unterzogen.
Produktinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation |
| Protein A/G Magbeads | 1 ml/5 ml | |
| rProtein A/G Agarose Harz | 36403ES08/25/60 | 5 ml/25 ml/100 ml |
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