Um Diabetikern mehr Behandlungsmöglichkeiten zu bieten, wurden zu Beginn des 21. Jahrhunderts einige neue Diabetesmedikamente entwickelt, wie z. B. Glucagon-ähnliche Peptid-1-Analoga (GLP-1). Semaglutid, eines der repräsentativen Medikamente der GLP-1-Analoga, hat sich in mehreren klinischen Studien als wirksam erwiesen, wenn es mit verschiedenen oralen Antidiabetika kombiniert wird, und kann Patienten beim Abnehmen helfen, den systolischen Druck senken und die Funktion der Pankreas-β-Zellen verbessern. Seine drei Formulierungen (Antidiabetika-Injektion Ozempic, orales Antidiabetika Rybelsus und Gewichtsverlust-Injektion Wegovy) erzielten im Jahr 2023 einen Umsatz von über 20 Milliarden US-Dollar. Aufgrund seiner hervorragenden Leistung in Blutzuckersenkung und Gewichtsverlust, die Branche erwartet, dass Semaglutid seine starke Verkaufsdynamik noch einige Zeit beibehält und viele Unternehmen anlockt, die um das Layout konkurrieren!
Die Hauptkettenstruktur von Semaglutid ist ein 29-Aminosäure-Zwischenpolypeptid Arg34GLP-1 (9-37) oder ein 27-Aminosäure-Zwischenpolypeptid Arg34GLP-1 (11-37). Die Produktion und Herstellung dieses Zwischenpolypeptids umfasst hauptsächlich chemische Synthese und Biopräparationsmethoden. Im Vergleich zur chemischen Synthese hat die Biopräparation den Kapazitätsengpass durchbrochen und eignet sich besser für eine kontinuierliche Produktion im großen Maßstab, was die Produktionskosten weiter senken und größere wirtschaftliche Vorteile bringen kann.
Tabelle 1. Beispiele für Biopräparationsmethoden für Semaglutid-Zwischenpolypeptide
| Biopräparationsmethode (Beispiel 1)
| Biopräparationsmethode (Beispiel 2)
| |
| Gensynthese | Synthetisieren Sie eine Fusionsproteinsequenz, einschließlich eines Fusionspeptids, einer Enterokinase-Spaltstelle und der Zielhauptmolekülsequenz | Synthetisieren Sie eine Tandem-Expressionssequenz mit der GLP-1(9-37)-Gensequenz |
| Bakterienkonstruktion | Einführung in E. coli zur Konstruktion rekombinanter, veränderter Bakterien | Einführung in E. coli zur Konstruktion rekombinanter, veränderter Bakterien |
| Expression von Fusionsproteinen | Durch Optimierung der Fusionspeptidsequenz, Änderung des isoelektrischen Punkts und der Hydrophilie des Proteins usw. wird die Expression des Fusionsproteins effektiv erhöht
| Nach der Induktion einer hochdichten Fermentation wird ein Tandem-Expressions-Einschlusskörperprotein erhalten, das GLP-1 (9-37) exprimiert, und die Rückfaltung ergibt ein lösliches Protein |
| Zwischenpeptidakquisition | Nachdem das Fusionsprotein einer Enterokinasespaltung, Reinigung und anderen Schritten unterzogen wurde, kann das Semaglutid-Zwischenproduktpolypeptid Arg34GLP-1 (9-37) gewonnen werden. | Das lösliche Protein kann nach einer zweistufigen enzymatischen Spaltung mit dem Enzym Kex2 und Carboxypeptidase B sowie anschließenden Reinigungsschritten gewonnen werden, um das Semaglutid-Zwischenpolypeptid GLP-1 (9-37) zu erhalten. |
Das mit Carboxypeptidase B kombinierte Enterokinase- oder Kex2-Enzym ist ein Schlüsselenzym für die Hauptpeptidkette von Semaglutid (Biopräparationsmethode), und die enzymatische Schneidwirkung und die Kosten sind für die Produktion entscheidend.Yisheng Biology ist bestrebt, Pharmaunternehmen stabile Enzymrohstoffe bereitzustellen und bietet qualitativ hochwertige Enzyme und umfassende Qualitätskontrollstandards, um Kunden dabei zu helfen, ihre Produktionskapazität und Chargenstabilität zu verbessern, Kosten zu senken und schnell in der Markt.
1.Rekombinante Enterokinase
Rekombinante Enterokinase (rEK) ist eine hochreine Untereinheit der leichten Kette der Enterokinase aus dem Darm von Rindern, die die gleiche spezifische Schneideenzymaktivität wie natürlich gewonnene Enterokinase besitzt, mit einer Schnittstelle von Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, die das Fusionsprotein am N-Terminus des Proteins entfernen kann, um unnötige Fusionsmarkierungen zu entfernen, und ist eine häufig gewählte Protease für die N-terminale Fusion. Sie weist ein geringes Maß an unregelmäßigen Schnitten an anderen Resten auf.
Yisheng bietet den Kunden derzeit rekombinante Enterokinasen aus verschiedenen Quellen, in verschiedenen Qualitäten und mit oder ohne His-Tags zur Auswahl an.
Merkmale
Hohe Spezifität: Eine spezifische Protease, die am Carboxylende von Lysin schneidet, das vier Asparaginsäuren enthält: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;
Hohe Reinheit: Keine anderen Proteasen, kein unspezifisches Schneiden;
Kein tierischer Ursprung: Rekombinante Herstellung, keine exogene Viruskontamination, keine Verwendung tierischer Rohstoffe im Produktionsprozess;
Stabile Qualität: Durch die Chargenproduktion kann eine stabile und kontinuierliche Chargenproduktion gewährleistet werden. Keine Unterschiede von Charge zu Charge, stabile Qualität.
Ausreichende Kapazität: Ein 500-l-Fermenter kann ca. 50 MU Enterokinase gewinnen.
Angebot an Produkten unterschiedlicher Qualität: Produkte der F&E-Klasse (20395ES), GMP-Klasse (20396ES) und GMP-Klasse entsprechen dem Qualitätsmanagementsystem ISO 13485.
Testdaten
Enterokinase-Aktivitätstest:
Abbildung 1. Der Enzym-Schneideffekt von
Hinweis: Das positive Substrat (20391ES) ist ein Fusionsprotein, das aus zwei spezifischen Proteinsequenzen besteht, die durch DDDDK (Enterokinase-Erkennungs- und -Schnittstelle) verbunden sind, mit einem Gesamtmolekulargewicht von etwa 64,6 kDa, das durch Enterokinase spezifisch in zwei unabhängige Proteinfragmente mit Molekulargewichten von etwa 27,9 kDa bzw. 36,6 kDa geschnitten werden kann. Dieses Produkt kann als Enterokinasesubstrat zur semiquantitativen oder qualitativen Enzymaktivitätsbestimmung von rekombinanter oder natürlicher Enterokinase verwendet werden.
Enterokinase-Reinheitstest:
Hinweis: Der theoretische Wert der Enterokinase beträgt 22,7 kDa. Aufgrund des Glykosylierungseffekts nach der Expression in Pichia pastoris zeigt die SDS-PAGE, dass das Molekulargewicht des Zielproteins etwa 40 kDa beträgt. Im Allgemeinen weisen die glykosylierten Bänder ein leicht diffuses Band auf, das nach oben verläuft (wie in der rechten Abbildung gezeigt). Unser Unternehmen kann Kunden auch das Deglykosylierungsenzym Endo H (Kat.-Nr. 20414) zur Verfügung stellen, um die Glykosylierung durchzuführen und die Reinheit im Gel zu messen (wie in der linken Abbildung gezeigt).
Enterokinase-Schneidspezifitätstest:
Abbildung 3.
Hinweis: Unter den gleichen Bedingungen
Enterokinase, wiederholter Gefrier-Auftau-Stabilitätstest, beschleunigter Test:
Abbildung 4.
Hinweis:
Bei Lagerung bei 25 °C für 7, 16, 32 Tage, 37 °C für 7, 14 Tage änderte sich die Enzymaktivität im Vergleich zur anfänglichen Enzymaktivität nicht signifikant.
2.Rekombinantes Kex2-Enzym, Carboxypeptidase B
Tabelle 2.
| Produktnummer | 20418ES | 20417ES |
| Produkt Name | Rekombinante Kex2-Protease, exprimiert in Hefe
| Rekombinantes CPB, exprimiert in E.coli
|
| Produktqualität | GMP-Qualität | GMP-Qualität |
| Quelle | Rekombinante Expression von Pichia pastoris | Rekombinante Expression von E. coli |
| Aktivität | ≥10,0 Einheiten/mg pro
| ≥170 USP-Einheiten/mg pro
|
| Spaltstelle | Erkennt und spaltet spezifisch Peptidbindungen am Carboxylende von zweibasischen Aminosäuren wie Arg-Arg, Lys-Arg | Hydrolysiert spezifisch Proteine an der Amino-terminalen Seite der basischen Aminosäuren (Lysin, Arginin, Histidin) am C-Terminus |
| Produktanwendung | 1. Prozess-Enzymspaltung bei der Herstellung von Peptid-Arzneimitteln. 2. Enzymatische Verdauung von Proteinen und Peptidmapping, Sequenzierung usw. | 1. Herstellung von rekombinantem Insulin und seinen Analoga. 2.Bestimmung der Aminosäuren am C-Terminus von Proteinen. 3. Entfernung von Histidin-Markierungen am C-Terminus von Proteinen. 4. Herstellung anderer rekombinanter Peptidsubstanzen. 5. Enzymatische Synthese bestimmter spezieller Verbindungen. |
Kex2-Enzym kombiniert mit Carboxypeptidase B: Anforderungen an den Tandem-Expressionsprozess, hohe Ausbeute an Semaglutid-Zwischenprodukt nach Enzym-Schnitt
Yerleichtern Produktionsstandort für Enzyme nach GMP-Standard
ISO-zertifizierte Produktionsstätte für ultrareine molekulare Enzyme – UCF.ME, ausgestattet mit AKTA-Reinigungs- und physikochemischen Analysegeräten in Industriequalität, 100-Liter-Hochdichtefermentationseinheiten, Standard-Reinigungswerkstätten in Zehntausendstel-Qualität und automatisierten Produktionslinien. Es verfügt über Fermentations- und Reinigungssysteme verschiedener Spezifikationen, darunter 5 l, 10 l, 30 l, 100 l, 500 l und 1.500 l, mit der Möglichkeit, die Produktion im Bereich der Industrialisierung molekularer Enzyme von 5 l auf 1.500 l zu steigern und den Kernbedarf an Enzymrohstoffen nachgelagerter Kunden in verschiedenen Phasen wie Forschung und Entwicklung, Pilotmaßstab und Großproduktion vollständig zu erfüllen.
Werbeproduktinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation | Listenpreis ($） | Werbeartikel Preis ($） |
| 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 U/500 U/ 5000 U/ 100 KU/ 1 ME(1000 KU) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
Verwandte Produktinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation |
| 20391ES03/11 | 1 mg/ 4 mg | |
| Rekombinante Kex2-Protease, exprimiert in Hefe | 20418ES60 | 100 μg |
| 20417ES03/10 | 1 mg/10 mg | |
| 20414ES92/97 | 10000 Einheiten/50000 Einheiten |