Tag Antikörper Einführung
Tag-Antikörper werden zur Erkennung und Reinigung von Tag-Sequenzen auf verschiedenen kommerziellen Expressionsvektoren verwendet, um die Expressionsniveaus und Funktionen der Zielproteine zu analysieren und zu bestimmen. Das Prinzip ihrer Verwendung ist die Antigen-Antikörper-Reaktion, bei der diese Tag-Antikörper spezifisch an die entsprechenden Tag-fusionierten Proteine binden können. Hier ist eine kurze Liste einiger gängiger Protein-Tags, die für die Verwendung mit Tag-Antikörpern geeignet sind:
Tabelle 1. Einführung in verschiedene Protein-Tags
| Etikett | Sequenz | Merkmale | Anwendbare Szenarien |
| Flagge | DYKDDDDK | 1. Geringes Molekulargewicht, verändert die Funktion des Fusionsproteins nicht, hydrophiler als ähnliche Tags; 2. Enthält eine Enterokinase-Erkennungsstelle (DDDDK), die sich bei Fusion mit dem N-Terminus des Zielproteins bequem zur Entfernung der Markierung eignet. | Geeignet für die Reinigung und Erkennung von Fusionsproteinen mit niedrigem Expressionsniveau in eukaryotischen Expressionssystemen. |
| HA | : YPYDVPDYA | Abgeleitet vom Hämagglutinin-Oberflächenantigen-Determinanten des Grippevirus. Vermeiden Sie die Verwendung in Experimenten im Zusammenhang mit apoptotischen Zellen. | Geeignet für die Proteinreinigung und -erkennung. |
| MeinC | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | Abgeleitet vom menschlichen Proto-Onkogen Myc; Verwendung in Experimenten mit menschlichen Zellen vermeiden. | Wird im Allgemeinen nicht zur Proteinreinigung verwendet, ist aber zur Detektion geeignet. |
Leitfaden zur Produktauswahl für die
| Produktserie | Reinigungsharzserie | ImmunoMagnetic Bead-Serie | |||||
| Produktnummer | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Produktname | Anti-HA MagBeads | Anti-MycMagBeads | |||||
| Liganden | Hochwertige monoklonale Maus-IgG-Antikörper | Hochwertige monoklonale Maus-Anti-GFP/Flag/HA/Myc-Antikörper | |||||
| Proteinbindungskapazität | ≥1,1 mg Flag-markiertes Fusionsprotein/ml Gel ≥1,5 mg HA-markiertes Fusionsprotein/ml Gel ≥0,9 mg Myc-markiertes Fusionsprotein/ml Gel | ≥0,8 mg GFP-markiertes Fusionsprotein/mg Perlen ≥0,6 mg Flag-markiertes Fusionsprotein/mg Perlen ≥0,4 mg HA-markiertes Fusionsprotein/mg Perlen ≥0,5 mg Myc-markiertes Fusionsprotein/mg Perlen
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| Matrix | 4% vernetztes Agarosegel | Magnetische Beads auf Silica-Basis | |||||
| Partikelgröße | 45-165 µm | 200 nm | |||||
| Vorteile | Geringe unspezifische Bindung, hohe Kapazität | Hohe Reinheit, hohe Kapazität, hohe Spezifität, bequeme Verwendung mit Magnetgestell | |||||
| Empfohlene Anwendungen | Affinitätsreinigung markierter Fusionsproteine in jedem Maßstab, Immunpräzipitation (IP) | Immunpräzipitation (IP), Co-Immunpräzipitation (COIP) | |||||
Testdaten
1. Vergleichstest der Aufreinigung zwischen
Abbildung 1.
M: Proteinmarker; 1: Vorsäulenlysat der Flag-N-, M-, C-Proteine; 2: Nachsäulenpermeat der Flag-N-, M-, C-Proteine; 3: Elution (pH 2,7-Elution); 4: Elution (pH 12-Elution)
2. Die Pfeile in der Abbildung unten zeigen die markierten Zielproteine an, und die drei Bänder von oben nach unten nach dem direkten Kochen der magnetischen Perlen sind BSA, die schwere Kette des Antikörpers und die leichte Kette des Antikörpers.
Figur 2. Anti-Flag MagBeads-Reinigung von Flag-markierten Proteinen
1: E. coli-Lysat mit Flag-markiertem Protein 10 μL; 2: Überstand nach Inkubation von E. coli-Lysat mit Flag-markiertem Protein mit magnetischen Kügelchen 10 μL; 3: Direktes Kochen von Flag-markiertem Protein mit Anti-Flag MagBeads 10 μL; 4: Direktes Kochen von Anti-Flag MagBeads; 5: Marker
3.
Figur 3. Anti-GFP MagBeads-Reinigung von GFP-markierten Proteinen
1: E. coli-Lysat mit GFP-markiertem Protein 10 μL; 2: Überstand nach Inkubation von E. coli-Lysat mit GFP-markiertem Protein mit magnetischen Kügelchen 10 μL; 3: Direktes Kochen von GFP-markiertem Protein mit Anti-GFP MagBeads 10 μL; 4: Direktes Kochen von Anti-GFP MagBeads; 5: Marker
Produktinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation |
| 20584ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20586ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20587ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20565ES03/08 | 1 ml/5 ml | |
| Anti-HA MagBeads | 20566ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| Anti-Myc MagBeads | 20567ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| 20564ES03/08 | 1 ml/5 ml |