Beschreibung
Hifair™ Multiplex One Step RT-qPCR Sondenkit (UDG Plus) ist ein Multiplex-Quantitative-PCR-Kit, das auf RNA als Vorlage basiert. Während des Experiments wurden Reverse Transkription und quantitative PCR im selben Röhrchen durchgeführt, was den Versuchsablauf vereinfachte und das Kontaminationsrisiko verringerte.
In diesem Kit wurde der Erststrang der cDNA effizient mit hitzebeständigen HifairTM V Reverse Transkriptase und quantitativ amplifiziert durch UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. Das Kit enthält hauptsächlich optimierten MP-Puffer, Enzymmischung usw. Die Pufferlösung enthält bereits Mg2+ und dNTP. Darüber hinaus werden Faktoren hinzugefügt, die die unspezifische PCR-Amplifikation wirksam hemmen und die Amplifikationseffizienz mehrerer qPCR-Reaktionen verbessern können, wodurch die Amplifikationseffizienz sichergestellt und bis zu mehrere Amplifikationsreaktionen durchgeführt werden können. Das dUTP/UDG-System wurde hinzugefügt, um das Risiko einer Aerosolkontamination wirksam zu verhindern.
Merkmale
1. GGute Vielseitigkeit: Es eignet sich für die qPCR-Amplifikation und den Nachweis von Nukleinsäuren pathogener Mikroorganismen, menschlicher Genome, Pflanzen und anderer Arten.
2. Hohe Empfindlichkeit: Das sorgfältig optimierte Puffersystem verbessert die Nachweisempfindlichkeit von Vorlagen mit niedriger Konzentration auf bis zu 250 Kopien/ml.
3. dUP/UDG-System: Das dUTP/Hitzelabile UDG-Anti-Pollution-System wird eingeführt, um die Aerosolverschmutzung von Produkten effizient abzubauen, falsche Positivmeldungen zu reduzieren und authentische Ergebnisse sicherzustellen.
4. Unterstützunging Schnellprogramm: kompatibel mit dem schnellen 40-Minuten-Programm.
5. Super Stabilität: stabilt 14 Tage lang bei 37 °C, 10-maliges Einfrieren und Auftauen.
Komponenten
Komponenten | Name | 16630ES60 (100 T) | 16630ES80 (1000 T) | 16630ES92 (10000 T) |
16630-A | 5×Hifair MP-Puffer | 500 μL | 5 ml | 50 ml |
16630-B | Hifair-Enzym Mischen | 100 μL | 1 ml | 10 ml |
16630-C | GC-Enhancer | 500 μL | 5 ml | 50 ml |
Notiz: 1) 5×HifairTM MP-Puffer ist die Abkürzung von HifairTM V Multiplex One Step RT-qPCR Sondenpuffer, Dazu gehören dNTPs, dUTP, Mg2+, Stabilisatoren, Verstärker und mehr.
2) Hifair Enzymmischung enthält hauptsächlich hitzebeständiges HifairTM V Reverse Transkriptase, UNICONTM HotStart Taq DNA-Polymeras und UDGase.
3) GC Enhancer ist optional. Hier finden Sie die kostenlose Version von GC Enhancer: Kat: 16901ES.
4) Die Modelle 16630-A und 16630-B entsprechen den Modellen 16901-A und 16901-B.
Technische Daten
PCR-Methode | Einstufige RT-qPCR |
Art der Probe | RNA |
Lagerung
TEr Produkt sollen Sei gelagert bei -25 °C bis -15 °C für 1 Jahr.
Zahlen
Abbildung 1. Hohe Erkennungsrate
Anweisungen
1. Reaktion Zusammensetzung
Komponenten | Volumen (μL) | Endkonzentration |
5×Hifair™ MP-Puffer | 5 | 1 × |
Hifair Enzymmischung | 1 | - |
GC-Enhancer | 0-5 | - |
Primer-Mix (10 μM) | 0,4 jede | 0,16 μM |
Sondenmischung (10 μM) | 0,2 jede | 0,08 μM |
RNA | 1-5 | - |
RNase-freies H2O | bis 25 | - |
Notiz:Vor Gebrauch unbedingt gut vermischen und übermäßige Blasenbildung durch heftige Vibrationen vermeiden.
a) Primerkonzentration: Grundierung Mischung inklusive Multiplexprimer, je nach Situation kann die optimale Primerkonzentration zwischen 0,1 und 1,0 μM liegen.
b) Sondenkonzentration: Sondenmischung einschließlich Multiplexsondenmarkierung mit unterschiedlichen Fluoreszenzgruppen. Je nach Situation kann die optimale Sondenkonzentration zwischen 0,05 und 0 liegen.5 μM.
c) Verdünnung der Vorlage: qPCR ist hochempfindlich und es wird empfohlen, die Vorlage zu verdünnen. Der Kontroll-Ct-Wert liegt zwischen 20 und 35.
D) Systemvorbereitung: Kopf mit Filterelement entfernen. Kreuzkontamination und Aerosolkontamination vermeiden.
2. Optimiertes Fahrradprotokoll
Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus | |
1 | Umgekehrte Transkription | 50°CA | 15 Min | 1 |
2 | Erste Denaturierung | 95°C | 5 Minuten | 1 |
3 | Amplifikationsreaktion | 95°C | 15 Sek. | 45 Zyklen |
60°CB | 30 Sek.C |
Notiz:ein) Reverse-Transkription: Die Temperatur kann 42 wählen°C oder 50°C für 10-15 Minuten.
b) Amplifikationsreaktion: Die Temperatur wird entsprechend dem Tm-Wert der entwickelten Primer angepasst.
C) Erfassung von Fluoreszenzsignalen: Bitte stellen Sie den Versuchsablauf entsprechend den Vorgaben im Gerätehandbuch ein.
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