Los reactivos de transfección celular se han convertido en reactivos de rutina para estudiar y controlar la función genética en células eucariotas. Los reactivos de transfección se utilizan ampliamente en la investigación de la función genética, la regulación de la expresión genética y el análisis de mutaciones, así como en la terapia génica, la terapia celular, la producción de proteínas y la producción de vacunas. Entonces, ¿qué es la transfección? ¿Y cómo elegir un tipo de reactivo de transfección en función de sus experimentos?

¿Cuáles son los tipos de transfección?

Las características de los reactivos de transfección de Yeasen

¿Cómo elegir un tipo de reactivo de transfección en función de sus experimentos?

Caso de aplicación

Referencia para las condiciones de transfección

Preguntas frecuentes

Considerando la lectura

¿Cuáles son los tipos de transfección?

Según si el ácido nucleico se integra en el cromosoma de la célula huésped después de la transfección, se divide en "transitorio" (transfección transitoria) y "estable" (transfección estable). La eficiencia de la transfección, la citotoxicidad, los efectos sobre la fisiología normal y los niveles de expresión génica de los diferentes métodos de transfección son diferentes. Los principios, aplicaciones y características se comparan en la siguiente tabla:

Tabla 1 Comparación de diferentes métodos de transfección

Las características de Reactivos de transfección de Yeasen

En el campo de los reactivos de transfección de ADN y ARN, Yeasen Biotechnology cuenta con un sólido equipo de I+D y producción, optimiza continuamente las fórmulas, mejora los procesos de producción y ha lanzado una variedad de productos basados ​​en liposomas catiónicos y polímeros catiónicos. Las instituciones de investigación científica y las empresas ofrecen una gama completa de productos, y la línea de productos cubre todos los campos relacionados con los reactivos de transfección.

• Alta eficiencia: adecuado para la transfección transitoria o la transfección estable de líneas celulares.
• Baja toxicidad: las células transfectadas permanecen viables.
• Amplia adaptabilidad: cobertura integral de células comunes y células primarias difíciles de transfectar.
• Fácil de operar: adecuado para el medio en presencia de suero, sin cambiar el medio antes y después de la transfección.
• Rentable: económico y práctico, alta eficiencia de transfección, bajo precio.

¿Cómo elegir un tipo de reactivo de transfección en función de sus experimentos?

La selección de reactivos de transfección debe realizarse de acuerdo con los diferentes propósitos experimentales y contenidos experimentales, como las sustancias transfectadas, las células específicas, la conveniencia de la operación y otros factores.

Caso de aplicación

Reactivo de transfección liposomal Hieff Trans™

Hieff Trans™ Se suministra en forma de líquido estéril. Generalmente, para la transfección en placas de 24 pocillos, se utilizan aproximadamente 1,5 μL cada vez, 1 mL de Hieff Trans™ Puede realizar aproximadamente 660 transfecciones; para una placa de 6 pocillos, aproximadamente 6 μL cada vez, 1 mL de Hieff Trans™ puede realizar alrededor de 660 transfecciones. 160 transfecciones;

Para más detalles, consulte Confianza en la transfección con el reactivo de lipofectamina Hieff Trans™

Polietilenimina lineal (PEI) MW40000 (lisis rápida)

El PEI 40000 es un polímero catiónico altamente cargado con un peso molecular de 40 000 que se une a las moléculas de ácido nucleico cargadas negativamente con mucha facilidad, formando un complejo y permitiendo que el complejo entre en las células. El PEI 40000 es un reactivo de transfección transitoria con baja citotoxicidad, alta eficiencia de transfección y alta eficiencia de expresión génica en células como HEK293 y CHO. Los reactivos de transfección PEI lineales se han validado para una amplia gama de líneas celulares, incluidas las células HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 y Hela. La eficiencia de transfección es tan alta como 80%~90%.

Para más detalles, consulte Nuevo favorito para la transfección: Linear PEI MW 40000, un reactivo de transfección más eficiente

Hieff Trans™ in vitro Reactivo de transfección de ARNi/ARNmi

Este producto puede alcanzar una eficiencia de expresión de más del 90% de 1 nM de ARNi en una amplia gama de líneas celulares, evitando efectos fuera del objetivo. Adecuado para la transfección de una variedad de células, incluidas Hela, MCF-7, HepG2, CHO y otras células adherentes; y líneas celulares en suspensión difíciles de transfectar, como las células K562 o THP-1, pueden alcanzar una eficiencia de silenciamiento del 80%. Incluyendo algunas células primarias, fibroblastos humanos primarios y hepatocitos humanos primarios, etc., se puede lograr una eficiencia de silenciamiento del 80%.

Referencia para las condiciones de transfección

Además de las instrucciones de cada producto, los clientes operan de acuerdo con su contenido experimental específico y habrá diferentes diferencias en la cantidad de uso. De acuerdo con las condiciones de transfección celular in vitro informadas por los clientes después de usar el producto, se han ordenado para su referencia.

Preguntas frecuentes

1 reactivo de transfección liposomal Hieff Trans™

1.1 P: ¿Puede haber suero presente al preparar complejos de reactivos de transfección de ácidos nucleicos?

R: La presencia de suero afectará la formación de liposomas. Se recomienda utilizar un medio sin suero (generalmente medio MEM) al preparar complejos de reactivos de transfección de ácidos nucleicos.

1.2 P: ¿A qué debo prestar atención al utilizar el reactivo de transfección de ácidos nucleicos liposomales Hieff Trans™?

A:

1) Cuando se transfectan las células, la densidad celular es preferiblemente del 80% al 95%, y la densidad de siembra específica se determina de acuerdo con la situación de las células;

2) El uso de ADN de alta pureza ayuda a obtener una mayor eficiencia de transfección;

3) Es necesario diluir el ADN y los reactivos de transfección con el medio sin suero cuando se preparan complejos de transfección;

4) No se pueden añadir antibióticos al medio durante la transfección;

5) Los reactivos deben almacenarse a una temperatura entre 2 y 8 °C y se debe tener cuidado de evitar abrir la tapa repetidamente durante un tiempo prolongado;

6) La concentración de ADN y la cantidad de reactivos liposomales catiónicos deben optimizarse para el primer uso a fin de obtener la máxima eficiencia de transfección. En general, se recomienda que la proporción de ADN y reactivo de transfección sea de 1:2 a 1:3.

1.3 P: ¿Es necesario finalizarlo después de la transfección?

R: No es necesario. Los complejos de liposomas son estables durante 6 horas. Si no se cambia el medio celular antes de la transfección, para garantizar los nutrientes necesarios para el crecimiento normal de las células, es necesario cambiar a un nuevo medio después de 4 a 6 horas. Sin embargo, si se ha cambiado el medio antes de la transfección, no es necesario cambiarlo después de la transfección de liposomas.

1.4 P: ¿Se puede realizar la cotransfección de ADN y ARNi? ¿Cuál es el efecto?

R: Sí, cuando se cotransfectan ADN y ARNi, la eficiencia de transfección del ARNi será ligeramente peor.

1.5 P: ¿Se puede utilizar el reactivo de transfección para la transfección de envases lentivirales?

A: El envasado lentiviral es posible.

1.6 P: ¿Se pueden transfectar células en suspensión con el reactivo de transfección de ácidos nucleicos liposomales Hieff Trans™?

A: El reactivo de transfección de ácidos nucleicos de liposomas Hieff Trans™ se puede utilizar para la transfección de células en suspensión; consulte el protocolo para obtener más detalles. Además, también presentamos un reactivo de transfección específico para células en suspensión (n.º de cat.40805, reactivo de transfección liposomal libre de células en suspensión Hieff Trans™

2 Hieff Trans™ in vitro Reactivo de transfección de ARNi/ARNmi

2.1 P: ¿Es necesario cambiar el reactivo de transfección después de la transfección?

A: Este problema se puede dividir en dos casos: 1. Si no hay un cambio de medio antes de la transfección, el medio debe cambiarse aproximadamente 6 horas después de la transfección para garantizar los nutrientes necesarios para el crecimiento celular; 2. Si hay un cambio de medio antes de la transfección, ¿se puede operar de acuerdo con el funcionamiento normal de las células cultivadas? ? ¿Después de la operación de cambio de líquido?

2.2 P: ¿Se pueden congelar los reactivos de transfección?

R: No se puede congelar, porque el reactivo de transfección es un reactivo de transfección catiónico PEI. La congelación a bajas temperaturas destruirá la actividad del reactivo de transfección PEI. Por lo tanto, es mejor almacenarlo a 2-8 °C para mantener la mejor eficacia de transfección.

Información del producto

Algunos de los artículos publicados utilizando nuestros productos

[1] Liu R, Yang J, et al. Control optogenético de la función y el metabolismo del ARN mediante el uso de proteínas de unión al ARN conmutables por luz diseñadas. Nat Biotechnol. 3 de enero de 2022. (IF:55)

[2] Luo J, Yang Q, et al. TFPI es un receptor de cripta colónica para TcdB del clado 2 hipervirulento de C. difficile. Cell. 17 de marzo de 2022. (IF: 41.582)

[3] Zhou J, Chen P, et al. Variantes de Cas12a diseñadas para reducir el efecto fuera del objetivo en todo el genoma mediante un reconocimiento estricto de PAM. Mol Ther. 5 de enero de 2022. (IF:11.454)

[4] Chen S, Cao X, et al. circVAMP3 impulsa la separación de fases de CAPRIN1 e inhibe el carcinoma hepatocelular al suprimir la traducción de c-Myc. Adv Sci (Weinh). 24 de enero de 2022. (IF:16.808)

[5] Gu C, Wang Y, et al. AHSA1 es un objetivo terapéutico prometedor para la proliferación celular y la resistencia a los inhibidores del proteasoma en el mieloma múltiple. J Exp Clin Cancer Res. 6 de enero de 2022. (IF:11.161)

[6] Zhang Y, Yu X, et al. El factor de empalme arginina/serina-rica 8 promueve la malignidad del mieloma múltiple y la lesión ósea a través del empalme alternativo de CACYBP y la comunicación celular basada en exosomas. Clin Transl Med. 2022 Feb.(IF:11.492)

[7] Qin J, Cai Y, et al. Mecanismo molecular del agonismo y agonismo inverso en el receptor de grelina. Nat Commun. 13 de enero de 2022. (IF: 14.9)

[8] Tang X, Deng Z, et al.Una nueva proteína codificada por circHNRNPU promueve la progresión del mieloma múltiple al regular el microambiente de la médula ósea y el empalme alternativo. J Exp Clin Cancer Res. 8 de marzo de 2022. (IF:11.161)

[9] Xie F, Su P, et al. Ingeniería de vesículas extracelulares enriquecidas con ACE2 palmitoilada como terapia contra la COVID-19. Adv Mater. 19 de octubre de 2021. (IF:30.849)

[10] Liang Y, Lu Q, et al. Reactivación del supresor tumoral en el cáncer de mama mediante el cambio de potenciador a través de la red NamiRNA. Nucleic Acids Res. 7 de septiembre de 2021. (IF: 16.9)

[11] Fan Y, Wang J, et al. CircNR3C2 promueve el efecto supresor de tumores mediado por HRD1 mediante la absorción de miR-513a-3p en el cáncer de mama triple negativo. Mol Cancer. 2 de febrero de 2021. (IF:27.403)

[12] Dai L, Dai Y, et al. Perspectiva estructural del reclutamiento del complejo BRCA1-BARD1 a la cromatina dañada. Mol Cell. 1 de julio de 2021. (IF: 17.97)

[13] Zhang K, Wang A, et al. El eje UBQLN2-HSP70 reduce los agregados de poli-Gly-Ala y alivia los defectos de comportamiento en el modelo animal C9ORF72. Neuron. 16 de junio de 2021. (IF:17.17)

[14] Li T, Chen X, et al. Un dispositivo optogenético sintético basado en BRET para la expresión pulsátil de transgenes que permite la homeostasis de la glucosa en ratones. Nat Commun. 27 de enero de 2021. (IF: 14.92)

[15] Yan F, Huang C, et al. La ribosilación de la ubiquitina por ADP-treonina por una familia de efectores bacterianos bloquea la ubiquitinación del huésped. Mol Cell. 21 de mayo de 2020. (IF:17.97)

[16] Sun X, Peng X, et al. El ADNP promueve la diferenciación neuronal mediante la modulación de la señalización Wnt/β-catenina. Nat Commun. 12 de junio de 2020. (IF:14.911)

[17] Yang X, Wang H, et al. La reconexión de la señalización de ERBB3 y ERK confiere resistencia a la inhibición de FGFR1 en el cáncer gastrointestinal que albergaba una mutación ERBB3-E928G. Protein Cell. Diciembre de 2020 (IF: 14.872)

[18] Zou Y, Wang A, et al. Análisis de paisajes redox y dinámicas en células vivas e in vivo utilizando sensores fluorescentes codificados genéticamente. Nat Protoc. 2018 Oct.(IF:13.490)

[19] Hao H, Hu S, et al. La pérdida de CXCR7 endotelial afecta la homeostasis vascular y la remodelación cardíaca después de un infarto de miocardio: implicaciones para el descubrimiento de fármacos cardiovasculares. Circulation. 28 de marzo de 2017. (IF: 29.69)

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Reactivo de transfección – Hieff Trans™ y PEI

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