PEI 40000 lineal, un reactivo de transfección más eficiente
En general, la transfección es el proceso de introducir artificialmente ácidos nucleicos (ADN o ARN) en células eucariotas. Los reactivos de transfección, como su nombre lo indica, son una serie de reactivos que intervienen en la transfección. Durante el proceso de transfección, a menudo nos preocupamos por la baja eficiencia de la transfección, el estrecho rango de aplicación, la fuerte toxicidad, la operación engorrosa y el alto precio de los reactivos de transfección. Entonces, ¿existe un reactivo de transfección que pueda resolver estos problemas? Sí, el PEI lineal es la mejor opción para resolver estos problemas.
Nota: Yeasen ha lanzado un nuevo PEI Reactivo de transfección Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV para la producción a gran escala de diversos vectores virales y la expresión transitoria de proteínas adecuadas para sistemas adherentes y de suspensión.
1. ¿Cuáles son los tipos de transfección celular?
2. ¿Qué es el PEI lineal MW 40000?
3. ¿Cómo funciona el PEI lineal MW 40000?
4. ¿Cuáles son las características del PEI MW 40000?
5. Otros reactivos de transfección de Yeasen
6. Considera la lectura
1. ¿Cuáles son los tipos de transfección celular?
Antes de presentar el PEI lineal MW 40000, primero entendamos brevemente los tipos de transfección celular. La transfección celular es de gran importancia para la investigación genética, la investigación de proteínas y la investigación citológica, que se refiere al proceso de introducir artificialmente ácidos nucleicos (ADN o ARN) en células utilizando medios de infección no virales. El objetivo principal de la transfección es estudiar la función de los genes o productos genéticos, mediante la mejora o inhibición de la expresión de genes específicos en las células, o para producir proteínas recombinantes. La introducción de ácido nucleico exógeno cambiará las características de las células, a fin de lograr el objetivo de la transfección, que es útil para el estudio de la regulación genética y la expresión de proteínas, así como la síntesis y producción de proteínas.
Las transfecciones celulares se pueden dividir según métodos químicos, biológicos y físicos, o según el tiempo de residencia de un gen extraño en la célula. En la transfección transitoria, el ácido nucleico introducido puede existir en la célula durante un tiempo limitado sin replicarse, mientras que en la transfección estable, el ácido nucleico introducido se integra en el genoma del huésped y puede expresarse en la progenie de la célula transfectada.
Con tantos métodos diferentes de transfección celular, ¿cómo elegir el método correcto?
No existe un único método de transfección adecuado para todos los tipos de células ni que satisfaga todas las necesidades experimentales. El método de transfección óptimo debe seleccionarse según los requisitos del tipo de célula y las condiciones experimentales.
En la actualidad, los reactivos de transfección química siguen siendo los principales métodos de transfección celular debido a su facilidad de operación y compatibilidad con una variedad de líneas celulares.
2. ¿Qué es el PEI lineal MW 40000?
Polietilenimina lineal (PEI) MW40000 (Lisis rápida) es un reactivo de transfección transitoria basado en polietilenimina con un peso molecular de 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 es un polímero catiónico altamente cargado que puede unirse fácilmente a moléculas de ácido nucleico cargadas negativamente para formar complejos, introduciendo así complejos en las células.
En comparación con el reactivo de transfección PEI 25000, el PEI 40000 es fácil de disolver y se puede disolver directamente en agua. Además, el PEI 25000 contiene entre un 4 y un 11 % de residuos de propionilo, que evitan que la cadena principal del polímero se una al ADN.Pero PEI 40000 es una construcción de cobertizo completa, por lo que su rendimiento es constantemente eficiente.
3. ¿Cómo funciona el PEI lineal MW 40000?
La polietilenimina (PEI) es un excelente vector no viral multifuncional con buena adhesión celular y se puede utilizar para transfectar células independientemente de los inhibidores lisosomales. La PEI y el ADN se unen mediante fuerzas electrostáticas, lo que hace que el ADN colapse de la estructura suelta en forma de espiral a complejos de partículas esféricas. Los complejos PEI-ADN suelen estar cargados positivamente para interactuar electrostáticamente con la membrana celular externa y ser absorbidos por endocitosis. Los complejos PEI-ADN endocitados son capturados por los endosomas para transferirlos a los lisosomas para su degradación. La presión iónica interna en constante aumento hace que el endosoma se hinche y se rompa, liberando ADN extraño en el citoplasma. Este mecanismo de transfección se denomina efecto de "esponja de protones".
Los estudios han demostrado que las moléculas de PEI pueden recubrir la superficie de los complejos de PEI-ADN para proteger suficientemente el ADN de la degradación por nucleasas en el citoplasma, asegurando el tránsito del ADN extraño desde el citoplasma hasta el núcleo. Además, las moléculas de PEI pueden insertarse en las membranas de fosfolípidos y crear canales estables para transferir el ADN al núcleo celular. Las moléculas de PEI no entran en el núcleo celular y desempeñan un papel importante como vector de ADN.
La expresión génica se puede detectar de 1 a 4 días después de que el gen exógeno se introduce en las células de mamíferos. Esta expresión se debe al hecho de que una parte del ADN introducido se transcribe en ARNm después de entrar en el núcleo y luego se traduce al citoplasma. Debido a que este método es relativamente simple y fácil de implementar, al seleccionar un buen vector de expresión y un método de transfección, la cantidad de expresión de proteína puede alcanzar un nivel más alto. Los reactivos de transfección PEI se han utilizado ampliamente en la investigación científica y en aplicaciones industriales como un método de transfección común para estudiar la estructura y la función de las proteínas.
4. ¿Cuáles son las características del PEI MW 40000?
Como reactivo de transfección transitoria con baja citotoxicidad, PEI 40000 tiene una alta eficiencia de transfección y una alta eficiencia de expresión génica en células como HEK293 y CHO. El reactivo de transfección PEI lineal ha sido validado para una amplia gama de líneas celulares, incluidas las células HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 y Hela. La eficiencia de transfección es tan alta como 80%~90%. Continúe viendo los datos de rendimiento:
- Alta eficiencia de transfección, adecuado para células adherentes y en suspensión.
Es adecuado para una variedad de líneas celulares, incluidas HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 y células Hela, etc., la eficiencia de transfección es tan alta como 80%~90%.
Tabla 1.Lista de líneas celulares validadas
| Células adherentes (1 μg de ADN) | Eficiencia | Células en suspensión (2 μg de ADN) | Eficiencia |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| SF9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Hola | 80%-90% |
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Figura 2. Plásmido GFP transfectado con PEI 40000 en células adherentes HEK-293, la eficiencia de transfección alcanzó el 90% después de 72 h (izquierda); El plásmido GFP transfectado con PEI 40000 se introdujo en células en suspensión CHO-K1 y la eficiencia de transfección alcanzó el 80 % después de 72 h (derecha)
- Baja toxicidad
Asegura la viabilidad celular y mejora la eficiencia de la transfección.
Figura 3. El PEI 40000 proporcionado por YEASEN tiene una citotoxicidad mucho menor que el poli** de la competencia.
- La eficiencia de transfección es mayor que la del PEI 25000, que puede reemplazar completamente al PEI 25000.
El PEI 25000 contiene entre un 4 y un 11 % de residuos de propionilo, lo que evita que la cadena principal del polímero se una al ADN. En comparación con el PEI 25000, el PEI 40000 es una construcción de cobertizo completo, por lo que su rendimiento es consistentemente eficiente.
Figura 4. Las células HEK-293 fueron transfectadas transitoriamente con plásmido GFP usando reactivos de transfección PEI 25000 y PEI 40000, y la fluorescencia se observó después de 72 h. Resultados experimentales: la eficiencia de transfección de PEI 40000 es mejor que la de PEI25000.
- Configuración sencilla y tiempo de transfección corto.
Este producto es de tipo instantáneo, que se puede disolver directamente en agua sin necesidad de ajustar el pH. Es compatible con sueros y antibióticos, sin necesidad de cambiar el medio.
- Rentable, adecuado para transfección transitoria a gran escala.
En comparación con los productos importados, el reactivo de transfección Yeasen PEI 40000 tiene un precio bajo y lotes estables.
5. Otros reactivos de transfección de Yeasen
Yeasen tiene una línea completa de productos de reactivos de transfección, incluidos los métodos de transfección química convencionales actuales, reactivos de liposomas catiónicos y reactivos de polímeros catiónicos, que se pueden aplicar a una variedad de escenarios de uso. En esta sección, enumeramos todos los reactivos de transfección de Yeasen y sus aplicaciones en la siguiente tabla, puede elegir el mejor que sea adecuado para su experimento.
Tabla 2.Lista de reactivos de transfección de Yeasen
| Gato# | Nombre del producto | Tipo de ácido nucleico | Tipo de célula |
| 40823ES | ADN | Adherente y Celdas de suspensión | |
| 40816ES | ADN | Adherente y Celdas de suspensión | |
| 40820ES | ADN | Adherente y Celdas de suspensión | |
| 40821ES | ADN | Adherente y Celdas de suspensión | |
| 40802ES | ADN (<10 kb), shRNA | Acélulas adherentes | |
| 40805ES | Suspensión Hieff Trans™ sin células Reactivo de transfección liposomal (Preguntar) | ADN (<10 kb) | Celdas de suspensión (para células sanguíneas suspendidas o inmunes células, la eficiencia de transfección de los reactivos químicos actuales es no alto Electroporación o método viral Se recomiendan.) |
| 40806ES | Reactivo de transfección de ARNi/miARN in vitro Hieff Trans™ | ARNi、miARN、pre-miRNA, miRNA imitador, antimiRNA | Células adherentes y en suspensión |
6. Considera la lectura
Reactivo de transfección – Hieff Trans™ y PEI
Guía de selección de productos reactivos para transfección de células in vitro
Referencia:
[1] Lu, Y., Yao, J. y Zhou, J. (sin fecha). Formación y comportamiento de agregación de complejos de polietilenimina-ADN. Departamento de Farmacia, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Nuevos conocimientos sobre el mecanismo de transfección de polietilenimina y sus implicaciones en la terapia génica y las vacunas de ADN. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Transfección transitoria de células de mamíferos con polietilenimina (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ