- RT-qPCR impulsada por reverso de alta eficiencia transcriptasa
La transcriptasa inversa (RT) es una enzima capaz de convertir las plantillas de ARN en ADN complementario (ADNc). En la investigación de biología molecular, la transcriptasa inversa se utiliza ampliamente, especialmente desempeñando un papel indispensable en el campo del diagnóstico molecular. A través del proceso de transcripción inversa, el genoma de ARN de los virus se puede convertir en ADNc, que luego se puede amplificar y detectar utilizando técnicas como la PCR cuantitativa. Esta característica permite un diagnóstico preciso de los virus de ARN, como el VIH, la gripe A y la gripe B.
Figura 1. Diagrama esquemático del proceso de transcripción inversa
La búsqueda de reactivos de diagnóstico molecular RT-qPCR que sean más rápidos, más sensibles y más fáciles de operar se ha convertido en la principal tendencia actual de desarrollo. Como una de las materias primas clave en el proceso RT-qPCR, la transcriptasa inversa debe poseer una velocidad de transcripción inversa más rápida, un mayor rendimiento de síntesis y una mejor resistencia al calor. Para obtener una transcriptasa inversa más adecuada para RT-qPCR, Yeasen Ha desarrollado el HifairMT. Serie de transcriptasas inversas mediante modificación genética basada en M-MLV, que presentan menor actividad de ARNasa H, mayor estabilidad térmica y mayor capacidad de síntesis continua.
Figura 2. Esquema de la acción de la transcripción inversa.
Hola feriado™Transcriptasas inversas
Yeasen tiene una variedad de HifairMT. La transcriptasa inversa de Yeasen puede ofrecer una variedad de formas de productos, incluidas enzimas y premezclas, que puede elegir según sus necesidades reales. La siguiente tabla enumera las características y aplicaciones recomendadas de las diferentes transcriptasas inversas de Yeasen.
Tabla 1 Pautas de selección de Hifair™ Transcriptasas inversas| Nombre del producto (Número de producto) ) | Características del producto | Aplicación recomendada |
| Térmicamente estable (hasta 65 °C), adecuado para plantillas complejas | LÁMPARA RT | |
| Fuerte compatibilidad, alta velocidad y alto rendimiento de síntesis. | Un paso PCR en tiempo real/PCR cuantitativa |
Nota: Todas las enzimas mencionadas anteriormente están disponibles en formulaciones de alta concentración o sin glicerol.
Ahora destacamos una transcriptasa inversa utilizada en reactivos de diagnóstico molecular RT-qPCR: HifairMT. V Transcriptasa inversa. Esta enzima se distingue por su gran compatibilidad, velocidad rápida y alto rendimiento de síntesis, capaz de soportar temperaturas de reacción de hasta 58 °C. Es especialmente adecuada para el desarrollo de reactivos de diagnóstico molecular RT-qPCR.
Demostración del rendimiento de Hifair™ V transcriptasa inversa
1.Capaz de soportar una temperatura de reacción de 58 °C, es adecuado para la transcripción inversa de plantillas de ARN complejas..
Figura 3. La transcriptasa inversa de HifairMT. La transcriptasa inversa V y la marca T* se incubaron a 55 ℃ y 58 ℃ respectivamente durante 30 minutos para detectar la actividad enzimática residual. Los resultados mostraron que HifairMT. La transcriptasa inversa V aún pudo mantener una actividad del 70% después de la incubación a 58℃ durante 30 minutos, lo que fue mucho más alto que el de la marca T*.
2. La tasa de detección de RT-qPCR fue mejor que la de otras marcas.,y tEl rango de detección fue de 1 pg-1 μg.
Figura 4. Utilizando 1 pg-1 μg (7 gradientes) de ARN total de células 293T como plantilla, se realizó la transcripción inversa utilizando HifairMT. V SuperMix de digestión RT-gDNA en un solo paso para qPCR (Cat#11142), V*, T*. El ADNc obtenido se analizó cuantitativamente mediante qPCR. Los resultados mostraron que la sensibilidad de 11142ES podía alcanzar 1 pg, lo que era mejor que la de otras marcas.
La biblioteca de mutantes de la transcriptasa inversa de Yeasen
Yeasen continúa promoviendo la evolución de la transcriptasa inversa con Su ZymeEditorMT. Plataforma. Hasta ahora, hemos seleccionado una variedad de mutantes de transcriptasa inversa con un rendimiento excelente en diferentes aplicaciones, que pueden satisfacer plenamente las necesidades de diferentes grupos de clientes en campos de aplicación diversificados.Tabla 2. El Guía de selección de mutantes de la transcriptasa inversa de Yeasen
Productos recomendados
| Clasificación de productos | Nombre del producto | N.º de catálogo |
| Serie de enzimas PCR de alto rendimiento | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |