Descripción general

El ADN residual de la célula huésped es una impureza relacionada con el proceso que interviene en la producción de productos biológicos, que no solo reduce la eficacia de estos, sino que también puede plantear problemas de seguridad, como su capacidad de infectividad o tumorigenicidad. Por lo tanto, las agencias reguladoras de varios países han impuesto límites a la cantidad de ADN residual en los productos biológicos.

Las directrices actuales de la OMS y la FDA recomiendan que el ADN residual en los productos terminados no supere los 10 ng/dosis, y la FDA también establece que el ADN residual en el ADN de la célula huésped de los productos biológicos no debe superar los 100 pg/dosis. Los Principios Generales de la Farmacopea Europea estipulan que la mayoría de los límites de ADN residual de los productos biológicos no deben superar los 10 ng/dosis, pero los límites de ADN residual de las vacunas individuales son más estrictos, por ejemplo, el ADN residual en la vacuna inactivada contra la hepatitis A no debe superar los 100 pg/dosis, y el ADN residual en la vacuna contra la hepatitis B no debe superar los 10 pg/dosis. La edición de 2020 de la Farmacopea China, Parte III, estipula que el residuo de ADN en las preparaciones biológicas producidas en una matriz celular no debe superar los 100 pg/dosis, y el residuo de ADN en las vacunas producidas en una matriz bacteriana o fúngica no debe superar los 10 ng/dosis.

Además, para los métodos de determinación de residuos de ADN exógeno, las farmacopeas nacionales también dan recomendaciones de orientación. La edición de 2017 de la Disposición General 1130 USP40-NF35 de la Farmacopea de los Estados Unidos describe 3 métodos para la determinación de residuos de ADN exógeno, que son la hibridación de sonda de ADN, el método de umbral y el método de PCR cuantitativa en tiempo real. La Farmacopea Europea propone PCR cuantitativa en tiempo real y métodos inmunoenzimáticos, que son 2 métodos analíticos sensibles para cuantificar el ADN residual en células huésped. La versión 2020 de la Farmacopea China de las tres reglas generales 3407 también estipula que los métodos de detección de residuos de ADN en células huésped son la hibridación de sonda de ADN, la tinción de fluorescencia y la PCR cuantitativa.

Entre ellos, el método qPCR tiene una sensibilidad, especificidad de secuencia y precisión muy altas, lo que puede proporcionar un medio de detección confiable para la industria biofarmacéutica en la investigación de procesos y el control de calidad de productos terminados, y ahora se ha convertido en el método de detección preferido por cada fabricante de productos biológicos.

Biotecnología Yeasen Kits de detección de ADN residual

Basándose en el principio de la PCR cuantitativa con sonda fluorescente, Yeasen ha desarrollado una serie de kits de detección rápida y especializada de ADN residual en células huésped, entre los que se incluyen CHO, HEK293, E. coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, etc. Estos kits proporcionan una detección especializada y rápida de residuos de ADN en productos intermedios, semiterminados y terminados durante el desarrollo y la producción de productos biológicos, como fármacos de anticuerpos, productos de terapia celular y génica, fármacos de proteínas recombinantes y vacunas.

Característica

Alta sensibilidad: Desarrollado con base en el método qPCR de sonda fluorescente con LLOD tan bajo como 0.0,5 fg/µL;

Alta precisión: recuperaciones de muestras en el rango de 70%~130%;

Alta especificidad: sin reactividad cruzada con ADN irrelevante, lo que reduce los falsos positivos en la detección;

Cumplimiento de la normativa: totalmente validado de acuerdo con Chp, USP, ICHQ2 (R1) y otros requisitos, rendimiento de acuerdo con los estándares regulatorios chinos y extranjeros;

Cooperar con la auditoría: La producción del producto se ajusta a los estándares del sistema de calidad ISO13485, con documentos de auditoría perfectos.

Garantía de calidad: Las materias primas de los kits se desarrollan de forma independiente, y la mezcla qPCR y otros productos enzimáticos se producen en una fábrica de enzimas ultralimpia.

Solicitud

Medicamentos con anticuerposDetección de impurezas residuales en células huésped
VacunasDetección de impurezas residuales en células huésped
Fármacos de proteínas recombinantesDetección de impurezas residuales en células huésped

Medicamentos para terapia de células génicas Detección de impurezas residuales en células huésped

Especificación

Programa de pruebas y validación		Normas o requisitos de referencia	nortebeneficios según objetivos
1. Normas de referencia (estándares de kit)		Evaluación comparativa con estándares nacionales o Normas preparadas
2. yolineal Rángel	Alcance de la curva estándar	Consulte el manual o la situación real. (p. ej. 30 fg/μL ~ 300 pg/μL)
	R²	≥0,98 (Kits de PsYeasen ≥0,99）	Requisitos para HCD en la Farmacopea China Edición 2020 3407 Disposiciones generales
	Pendiente	-3,1~-3,8 (Kits de PsYeasen -3,1~-3,6)	Requisitos para HCD en la Farmacopea China Edición 2020 3407 Disposiciones generales
	Eficiencia de amplificación	90%~110%（（PsPendiente correspondiente -3.1~-3.6, Requisitos dentro de la industria）
3. APrecisión	Desviación del estándar nacional de ADN	＜15%
3. APrecisión	Tasa de recuperación de la muestra	50%~150%（Requisitos dentro de la industria 70 ~ 130 %）	Requisitos para HCD en la Farmacopea China Edición 2020 3407 Disposiciones generales
4. PAGrescisión	Repetible	CV<15%
4. PAGrescisión	Precisión intermedia	CV<15%
5. Sespecialidad		Sin interferencias con el ADN exógeno
6. yolímite de cuantificación		nivel de fg/μL
7. Sestabilidad	Congelación y descongelación repetidas	10 veces
	Estabilidad de aceleración	2~8℃ 30 días, 37℃ 14 días
	Periodo de validez	-20°C de almacenamiento durante 2 años

Cifras

Alta sensibilidad: LLOQ tan bajo como 0,3 fg/µL, LLOD tan bajo como 0,05 fg/µL.

1. El rango lineal del kit de detección de ADN residual de células huésped CHO (3G) fue de 3 fg/μL ~ 300 pg/μL, R²=1, la eficiencia de amplificación fue del 99,29% y el CV del valor de detección de cada concentración fue <15%.

Figura 1. Gráfico de calibración de ADN CHO (3G) (izquierda) y mapeo lineal de la curva de amplificación (derecha)

2. Detectar ADN de CHO (3G) en el punto de concentración más bajo de la canción estandarizada a concentraciones de 3 fg/uL y menores, 10 réplicas por concentración. Los resultados mostraron que a concentraciones de 0,3 fg/uL y mayores, el CV fue <20%, es decir, el límite de cuantificación del kit de ensayo de residuos de ADN de células huésped de CHO (3G) fue de 0,3 fg/uL.

3. Detectar ADN de CHO (3G) en concentraciones de 0,3 fg/μL y menores en el límite de cuantificación (LOQ) de 20 réplicas por concentración. Los resultados mostraron que la tasa de detección de 20 pocillos de réplicas en concentraciones de 0,05 fg/μL y mayores fue ≥19 (es decir, la tasa de detección fue ≥95%), es decir, el límite de detección del kit de detección de residuos de ADN de células huésped de CHO (3G) podría alcanzar 0,05 fg/μL.

Figura 3. Resultados del ensayo qPCR de ADN CHO (3G) de 0,05 fg/μL

Alta especificidad: sin reactividad cruzada con el ADN de otras células huésped.

Al evaluar la interferencia del ADN genómico de especies de ratón con alta afinidad al ADN CHO (3G), así como del ADN genómico de células comúnmente utilizadas en la producción de productos biológicos con el reactivo de detección de ADN CHO, las curvas de amplificación del grupo de interferencia y el grupo de control se superpusieron y no se observó ninguna interferencia (los siguientes gráficos muestran, en orden, los datos de interferencia del ADN genómico de ratón, HEK293 y E. coli con el reactivo de detección de ADN CHO).

Figura. 4.Resultados de experimentos de interferencia con el kit CHO DNA (3G)

Información del producto

Categorización	Artículo Nro.	Nombre del producto	Especificación
Pretratamiento de muestra	18461ES	Kit de preparación de muestras de ADN residual magnético MolPure®	25 toneladas/100 toneladas
Pretratamiento de muestra	18467ES	Kit de preparación de muestras MolPure® Mag48 FN	3×16 dientes/6×16 dientes
Instrumento de extracción de ácidos nucleicos	80511ES	Extractor de ácidos nucleicos automatizado de 48 canales	48 flujos
Detección de ADN residual	41307ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped Vero (2G)	50 toneladas/100 toneladas
	41308ES	Kit de detección de residuos de ADN de células hospedadoras de E. coli (2G)	50 toneladas/100 toneladas
	41310ES	Kit de detección de residuos de ADN SV40LTA&E1A	50 toneladas/100 toneladas
	41317ES	Kit de detección de residuos de ADN en células hospedadoras de Hansenula polymorpha	50 toneladas/100 toneladas
	41319ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped MDCK	50 toneladas/100 toneladas
	41323ES	Kit de detección de residuos de ADN plasmídico	50 toneladas/100 toneladas
	41324ES	Kit de detección de residuos de ADN de células hospedadoras de S. cerevisiae	50 toneladas/100 toneladas
	41325ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped humanas	50 toneladas/100 toneladas
	41328ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped de Pichia pastoris	50 toneladas/100 toneladas
	41330ES	Kit de detección de residuos de ADN de baculovirus y Sf9	50 toneladas/100 toneladas
	41331ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped HEK293 (3G)	50 toneladas/100 toneladas
	41332ES	Kit de detección de residuos de ADN de células huésped CHO (3G)	50 toneladas/100 toneladas

Artículo anterior Siguiente artículo

Kits de detección de ADN residual de alta sensibilidad, grado FG para el control de calidad de productos biológicos