La transcriptase inverse, également connue sous le nom d'ADN polymérase dépendante de l'ARN, est une enzyme ADN polymérase qui transcrit l'ARN simple brin en ADN. Les performances de la transcriptase inverse affecteront directement les performances finales des réactifs de diagnostic moléculaire. En réponse aux problèmes des fabricants de réactifs de diagnostic moléculaire, Yeasen a réalisé la transformation directionnelle de la transcriptase inverse. La transcriptase inverse a d'excellentes performances et est bien accueillie par les clients !

1. Quelle est la fonction de la transcriptase inverse ?
2. Comment choisir la transcriptase inverse ?
3. Pourquoi choisir la transcriptase inverse de Yeasen ?
4. Produits associés et performances
5. Produits associés

1. Quelle est la fonction de la transcriptase inverse ?

La transcriptase inverse est une ADN polymérase dépendante de l'ARN. Elle peut transcrire l'ARN matrice et former l'ADN complémentaire (ADNc). L'ADNc simple brin est converti en ADN double brin à l'aide de l'ADN polymérase. Les transcriptases inverses sont donc couramment utilisées pour quantifier le niveau de synthèse d'ARNm lorsqu'elles sont combinées à la technique de réaction en chaîne par polymérase, appelée RT-PCR. Les tests RT-PCR quantitatifs sont couramment utilisés dans le diagnostic des maladies. Par conséquent, la transcriptase inverse joue un rôle important dans la recherche scientifique et les applications pratiques.

2. Comment choisir la transcriptase inverse ?

Les transcriptases inverses courantes sont la M-MLV et l'AMV, parmi lesquelles la M-MLV est meilleure que l'AMV. Mais les enzymes RT conventionnelles ont deux sites actifs, l'un exécutant les activités de polymérase et l'autre exécutant l'activité de ribonucléase H. La RNase H est une endonucléase capable de dégrader la fraction ARN de la famille des hybrides ADN-ARN. Par conséquent, la transcriptase inverse dépourvue d'activité RNase H est bénéfique pour la synthèse d'ADNc. En outre, l'utilisation d'une version thermostable de la RT est bénéfique pour réduire l'amplification non spécifique des acides nucléiques et minimiser l'impact des structures secondaires complexes.

3. Pourquoi choisir la transcriptase inverse de Yeasen ?

Yeasen a effectué une modification directionnelle sur la transcriptase inverse, qui supprime l'activité de la RNase H, améliorant ainsi la capacité de synthèse de l'ADNc. Utilisation de la technologie d'évolution des protéines pour améliorer la thermostabilité de la transcription inverse.

La transcriptase inverse de Yeasen possède non seulement une forte capacité de synthèse, mais également une forte capacité de tolérance. De plus, Yeasen a des exigences strictes en matière de qualité. C'est le meilleur choix pour la transcriptase inverse.

4. Produits associés et performances

4.1 Résistant à une température élevée de 65°C

En utilisant 500 ng d'ARN total de cellules 293T comme modèle, la transcription inverse a été réalisée à 42 °C-65 °C à l'aide de la transcriptase inverse Hifair™ III. Prenez 1 μL d'ADNc comme modèle pour amplifier le gène TFRC (4,4 kb).

Figure 1. Effectuer une transcription inverse à 42°C-65℃

4.2 Compatible avec les modèles complexes

La température de réaction de 55°C peut satisfaire la transcription inverse des modèles conventionnels et des modèles de structure secondaire, et la température de réaction des modèles à GC élevé peut être augmentée de manière appropriée jusqu'à 65°C.

Figure 2.Convient aux modèles riches en GC et aux modèles de structure secondaire

4.3 Excellentes performances d'extension

En utilisant 500 ng d'ARN total de cellules 293T comme matrice et Oligo(dT) comme amorce, l'ADNc a été synthétisé à l'aide de la transcriptase inverse Hifair™ III. Prenez 1 μL d'ADNc comme matrice pour amplifier 500 pb de 5' du gène DY1C1N1 (19,9 kb). Les résultats ont montré que la transcriptase inverse Hifair™ III peut synthétiser de l'ADNc jusqu'à 19,8 kb.

Figure 3. Il est possible de synthétiser jusqu'à 19,8 kb d'ADNc

4.4 Synthèse rapide

En utilisant l'ARN des cellules 293T comme modèle, la transcription inverse a été réalisée selon la procédure standard du manuel et le temps de transcription inverse a été fixé à 5, 10, 15, 30, 45 et 60 minutes respectivement. La transcriptase inverse Hifair™ III peut synthétiser un ADNc de 6 kb en 5 minutes et sa spécificité et son rendement sont supérieurs à ceux de la marque V.

Figure 4. Un ADNc de 6 ko peut être synthétisé en 5 minutes

4.5 Large plage linéaire

En utilisant 5pg-5μg d'ARN total de cellules 293T comme modèle, l'ADNc a été synthétisé à l'aide de la transcriptase inverse Hifair™ III. 1 μL d'ADNc a été utilisé comme modèle et une qPCR a été réalisée sur les quatre gènes. Les résultats ont montré que les efficacités d'amplification étaient toutes comprises entre 98 % et 100,10 %. Cela montre que l'ADNc peut être synthétisé efficacement dans une large gamme linéaire de modèles.

Figure 5. L'ADNc peut être synthétisé efficacement dans une large gamme de modèles

4.6 Contrôle qualité strict

Pour garantir la stabilité des performances de l'enzyme inverse de Yeasen, Yeasen applique strictement les exigences du processus de production pour stabiliser le processus de production et assurer la stabilité des lots. Dans le même temps, l'inspection de la qualité est renforcée pour détecter les résidus, notamment l'exonucléase, la nickase, la RNase, etc. s’assurer qu’il n’y a pas de résidus, afin de ne pas affecter les expériences en aval.

Figure 6. Détection de résidus

5. Produits associés

Les produits fournis par Yeasen sont les suivants.

Tableau 1. Produits connexes

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