La technologie de diagnostic moléculaire se distingue des autres méthodes de détection par sa sensibilité et sa spécificité exceptionnelles. Cependant, les réactifs de diagnostic liquides classiques présentent des inconvénients tels que des frais de transport élevés et une durée de conservation limitée, qui limitent leur utilité. En réponse à l'évolution des besoins du marché et aux avancées technologiques, des réactifs de diagnostic moléculaire lyophilisés ont vu le jour. Les produits lyophilisés offrent plusieurs avantages par rapport aux réactifs de test liquides traditionnels, notamment :
- Stable à température ambiante - la structure tridimensionnelle est fixe, ce qui peut assurer la stabilité de l'enzyme et du système de réaction à température ambiante. Pas besoin de transport en chaîne du froid et de stockage dans des réfrigérateurs ou des chambres froides, ce qui peut prolonger la durée de conservation des produits.
- Facile à utiliser- Pas besoin de congélation et de décongélation répétées, de distribution de liquide, etc.
- Coût réduit- Pas besoin de transport sous chaîne du froid ni de stockage congelé, ce qui réduit efficacement les coûts de transport et de stockage.
- Haute précision- Un micronoyau lyophilisé est utilisé dans une réaction pour réduire l'erreur de composition lors de la préparation du réactif, raccourcir le temps de fonctionnement, éviter la perte d'activité biologique lors de la préparation du liquide et améliorer fondamentalement la précision.
- Utilisation flexible- Non limité par le nombre d'échantillons, un échantillon peut également être chargé.
Les enzymes moléculaires ou les prémélanges conventionnels incorporent souvent de fortes concentrations de glycérine comme agent cryoprotecteur et stabilisant. Cependant, la présence de glycérine dans le réactif peut perturber l'intégrité structurelle de l'eau, ce qui rend difficile son élimination efficace. Cela a à son tour un impact négatif sur la structure et la stabilité du produit lyophilisé. Par conséquent, lors du choix de la lyophilisation, il est conseillé de sélectionner des réactifs sans glycérol.
De plus, dans les applications particulièrement sensibles à la composition des réactifs, comme la PCR numérique, l'utilisation d'enzymes sans glycérine à haute concentration peut atténuer davantage l'influence du glycérol sur la réaction de PCR numérique. Cette approche minimise non seulement les interférences, mais élargit également le potentiel d'optimisation du système de réactifs de détection de PCR numérique.
YEASEN Sans glycérol solution d'enzymes moléculaires
YEASEN a mis en place une plate-forme complète de R&D et de production d'enzymes moléculaires sans glycérine et a réalisé une production à grande échelle de plusieurs enzymes moléculaires sans glycérol grâce à la sélection des matériaux, au contrôle environnemental, à l'optimisation des processus et à l'assurance qualité.
- Essai du procédé de dialyse
Optimisation du processus de dialyse pour un volume fixe d'enzyme glycérine :
- Recherche du tampon de dialyse optimal pour différentes enzymes moléculaires ;
- Recherche de solutions de stockage stables pour différentes enzymes moléculaires afin de permettre un stockage à long terme à 4℃ ou -20℃.
- Amplification du procédé de filtration à flux tangentiel
Le processus de dialyse permet de déterminer les composants optimaux du tampon de dialyse et leurs solutions de stockage optimales. Par la suite, le procédé de filtration à flux tangentiel (également appelé UFDF) peut être utilisé pour remplacer le tampon de solution.
Les facteurs cruciaux dans le développement du procédé de filtration à flux tangentiel tournent autour du choix de la formule de la solution de stockage, de la formule de la solution de lavage et de filtration, ainsi que de la pression transmembranaire et du débit appliqués pendant la filtration. YEASEN a établi une approche standardisée pour la filtration à flux tangentiel, permettant la détermination rapide des volumes de lavage et de filtration et des paramètres de temps en fonction de la teneur en glycérine souhaitée dans l'enzyme moléculaire cible. Cette approche permet d'économiser à la fois du matériel et du temps.
- Contrôle de qualité
Les différents procédés de préparation décrits ci-dessus sont conçus pour répondre aux diverses exigences des différents volumes et types de produits. Pour évaluer la stabilité du produit sur différents lots et au sein du même procédé, YEASEN a développé un système complet de caractérisation des paramètres de performance. Ce système permet une évaluation approfondie de l'impact des mesures sans glycérol sous plusieurs angles. Les méthodes de caractérisation englobent la quantification des protéines, l'évaluation de l'activité enzymatique (taux de récupération), l'analyse de la teneur en glycérine, l'évaluation de la teneur en agent protecteur et l'évaluation des performances enzymatiques, entre autres.
Produits enzymatiques moléculaires sans glycérol YEASEN
YEASEN a adopté une méthode de préparation d'enzymes moléculaires sans glycérol pour produire des enzymes sans teneur en glycérine à partir de celles contenant initialement de la glycérine. Actuellement, nous pouvons fournir des quantités importantes de matières premières enzymatiques sans glycérol adaptées aux applications qPCR/RT-qPCR et LAMP/RT-LAMP. Ces matières premières sont conçues pour la lyophilisation dans les tests de diagnostic, tout en conservant le même niveau de qualité et de performance que leurs homologues liquides.
Produits enzymatiques moléculaires sans glycérol
Les prémélanges qPCR ont été préparés en utilisant YEASEN ADN polymérase E-Taq 14316ES et les enzymes correspondantes sans glycérol, respectivement, et le modèle de 105, 104 et 103 copies/mL ont été amplifiées en même temps. Les résultats ont montré que l'effet d'amplification de 14316ES sans glycérol était cohérent avec celui de glycérine homologue. Le test de stabilité accéléré du 14316ES a été réalisé à 37℃. Les résultats ont montré que les performances d'expansion du 14316ES étaient cohérentes avec celles du témoin non accéléré après 54 jours de traitement accéléré à 37℃. Les résultats ci-dessus ont montré qu'il n'y avait aucune différence dans les performances de l'enzyme sans glycérol et de l'enzyme contenant de la glycérine homologue, et la stabilité était bonne.
- Produits lyophilisés RT-qPCR : Accélérés à 50℃ pendant 25 jours, les produits lyophilisés ont une morphologie et des performances stables
Le Yeasen 14316ES a été préparé dans une solution prémélangée RT-qPCR, qui a été lyophilisée et testée pour une stabilité accélérée à 50 ℃ pendant 25 jours. Dans le même temps, 105, 104 et 103 copies/mL du modèle de pseudovirus du nouveau coronavirus ont été amplifiées.Les résultats ont montré que la morphologie du produit, la valeur Ct et la valeur de fluorescence n’avaient pas de changement significatif avant et après la lyophilisation, et que le produit lyophilisé avait une bonne stabilité.
Figure 4 : Données de test de stabilité accélérée des produits lyophilisés par RT-qPCR- Produits lyophilisés RT-LAMP : Accélérés à 45℃ pendant 30 jours, les produits lyophilisés ont une morphologie et des performances stables
Le prémélange RT-LAMP a été préparé avec YEASEN 14405ES et 11297ES, et le test de performance a été effectué après lyophilisation. Le trou de réaction positif était orange et le trou de réaction négatif était magenta, ce qui montrait un grand contraste, et le résultat était clairement interprété. De plus, la morphologie des produits lyophilisés n'a pas changé de manière significative après 30 jours d'accélération à 45℃. Les résultats ont montré que le produit lyophilisé était stable en forme et en performance.
Informations sur le produit
| Classification | Nmoi | Numéro de catalogue |
| Produits enzymatiques sans glycérol pour qPCR/RT-qPCR | Kit RT-qPCR Hifair™ Lyo Multiplex en une étape - 11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Produits enzymatiques sans glycérol pour RT-LAMP | Transcriptase inverse Hifair® III, 600 U/μl, sans glycérol | 11297ES |
| ADN polymérase Bst Plus lyophilisée (60 U/μL, sans glycérol) | 14405ES |