PEI linéaire 40000, un réactif de transfection plus efficace
En général, la transfection est le processus d'introduction artificielle d'acides nucléiques (ADN ou ARN) dans des cellules eucaryotes. Les réactifs de transfection, comme leur nom l'indique, sont une série de réactifs impliqués dans la transfection. Au cours du processus de transfection, nous sommes souvent gênés par la faible efficacité de la transfection, la gamme d'application étroite, la forte toxicité, la lourdeur du fonctionnement et le prix élevé des réactifs de transfection. Alors, existe-t-il un réactif de transfection capable de résoudre ces problèmes ? Oui, le PEI linéaire est le meilleur choix pour résoudre ces problèmes.
Remarque : Yeasen a lancé un nouveau PEI Réactif de transfection Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV pour la production à grande échelle de divers vecteurs viraux et l'expression transitoire de protéines adaptées aux systèmes adhérents et en suspension.
1. Quels sont les types de transfection cellulaire ?
2. Qu'est-ce que le PEI linéaire MW 40000 ?
3. Comment fonctionne le PEI linéaire MW 40000 ?
4. Quelles sont les caractéristiques du PEI MW 40000 ?
5. Autres réactifs de transfection de Yeasen
6. Considérer la lecture
1. Quels sont les types de transfection cellulaire ?
Avant de présenter le PEI linéaire MW 40000, commençons par comprendre brièvement les types de transfection cellulaire. La transfection cellulaire est d'une grande importance pour la recherche génétique, la recherche sur les protéines et la recherche cytologique, qui fait référence au processus d'introduction artificielle d'acides nucléiques (ADN ou ARN) dans les cellules en utilisant des moyens d'infection non viraux. Le principal objectif de la transfection est d'étudier la fonction des gènes ou des produits géniques, en améliorant ou en inhibant l'expression génique spécifique dans les cellules, ou de produire des protéines recombinantes. L'introduction d'acide nucléique exogène modifiera les caractéristiques des cellules, de manière à atteindre l'objectif de la transfection, ce qui est utile pour l'étude de la régulation des gènes et de l'expression des protéines, ainsi que pour la synthèse et la production de protéines.
Les transfections cellulaires peuvent être divisées par des méthodes chimiques, biologiques et physiques, ou par le temps de séjour d'un gène étranger dans la cellule. Dans le cas d'une transfection transitoire, l'acide nucléique introduit peut exister dans la cellule pendant une durée limitée sans se répliquer, tandis que dans le cas d'une transfection stable, l'acide nucléique introduit est intégré dans le génome de l'hôte et peut être exprimé dans la progéniture de la cellule transfectée.
Avec autant de méthodes de transfection cellulaire différentes, comment choisir la bonne méthode ?
Aucune méthode de transfection ne convient à tous les types de cellules et ne répond à tous les besoins expérimentaux. La méthode de transfection optimale doit être sélectionnée en fonction des exigences du type de cellule et des conditions expérimentales.
À l’heure actuelle, les réactifs de transfection chimique restent les principales méthodes de transfection cellulaire en raison de leur facilité d’utilisation et de leur compatibilité avec une variété de lignées cellulaires.
2. Qu'est-ce que le PEI linéaire MW 40000 ?
Polyéthylèneimine linéaire (PEI) MW40000 (lyse rapide) est un réactif de transfection transitoire à base de polyéthylèneimine d'un poids moléculaire de 40 000 (PEI 40000). Le PEI 40000 est un polymère cationique hautement chargé qui peut facilement lier des molécules d'acide nucléique chargées négativement pour former des complexes, introduisant ainsi des complexes dans les cellules.
Comparé au réactif de transfection PEI 25000, le PEI 40000 est facile à dissoudre et peut être directement dissous dans l'eau. De plus, le PEI 25000 contient 4 à 11 % de résidus de propionyle, qui empêchent le squelette polymère de se lier à l'ADN.Mais le PEI 40000 est une construction de hangar complète, donc ses performances sont toujours efficaces.
3. Comment fonctionne le PEI linéaire MW 40000 ?
Le polyéthylèneimine (PEI) est un excellent vecteur non viral multifonctionnel avec une bonne adhérence cellulaire et peut être utilisé pour transfecter des cellules indépendamment des inhibiteurs lysosomal. Le PEI et l'ADN sont liés par des forces électrostatiques, ce qui provoque l'effondrement de l'ADN de la structure lâche en forme de bobine en complexes de particules sphériques. Les complexes PEI-ADN sont généralement chargés positivement pour interagir électrostatiquement avec la membrane cellulaire externe et sont absorbés par endocytose. Les complexes PEI-ADN endocytés sont ensuite capturés par les endosomes pour être transférés aux lysosomes pour dégradation. La pression ionique interne toujours croissante provoque le gonflement et la rupture de l'endosome, libérant de l'ADN étranger dans le cytoplasme. Ce mécanisme de transfection est appelé effet « éponge à protons ».
Des études ont montré que les molécules PEI peuvent recouvrir la surface des complexes PEI-ADN pour protéger suffisamment l'ADN de la dégradation par les nucléases dans le cytoplasme, assurant ainsi le transit de l'ADN étranger du cytoplasme vers le noyau. De plus, les molécules PEI peuvent s'insérer dans les membranes phospholipidiques et créer des canaux stables pour transférer l'ADN dans le noyau cellulaire. Les molécules PEI ne pénètrent pas dans le noyau cellulaire et jouent un rôle important en tant que vecteur d'ADN.
L'expression du gène peut être détectée 1 à 4 jours après l'introduction du gène exogène dans les cellules de mammifère. Cette expression est due au fait qu'une partie de l'ADN introduit est transcrite en ARNm après son entrée dans le noyau, puis traduite dans le cytoplasme. Cette méthode étant relativement simple et facile à mettre en œuvre, en sélectionnant un bon vecteur d'expression et une bonne méthode de transfection, la quantité d'expression protéique peut atteindre un niveau plus élevé. Les réactifs de transfection PEI ont été largement utilisés dans la recherche scientifique et les applications industrielles comme méthode de transfection courante pour étudier la structure et la fonction des protéines.
4. Quelles sont les caractéristiques du PEI MW 40000 ?
En tant que réactif de transfection transitoire à faible cytotoxicité, le PEI 40000 présente une efficacité de transfection élevée et une efficacité d'expression génique élevée dans des cellules telles que HEK293 et CHO. Le réactif de transfection linéaire PEI a été validé pour une large gamme de lignées cellulaires, notamment les cellules HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 et Hela. L'efficacité de transfection est aussi élevée que 80 % à 90 %. Continuer à consulter les données de performance :
- Efficacité de transfection élevée, adaptée aux cellules adhérentes et en suspension
Il convient à une variété de lignées cellulaires, notamment les cellules HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 et Hela, etc., l'efficacité de transfection est aussi élevée que 80 % à 90 %.
Tableau 1.Liste des lignées cellulaires validées
| Cellules adhérentes (1 μg d'ADN) | Efficacité | Cellules en suspension (2 μg d'ADN) | Efficacité |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| Sf9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| Hépatite G2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Héla | 80%-90% |
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Figure 2. Plasmide GFP transfecté par PEI 40000 dans les cellules adhérentes HEK-293, l'efficacité de la transfection a atteint 90 % après 72 h (à gauche) ; Le plasmide GFP transfecté par PEI 40000 dans les cellules en suspension CHO-K1, et l'efficacité de la transfection a atteint 80 % après 72 h (à droite)
- Faible toxicité
Il assure la viabilité cellulaire et améliore l'efficacité de la transfection.
Figure 3. Le PEI 40000 fourni par YEASEN présente une cytotoxicité bien inférieure à celle du poly** concurrent
- L'efficacité de la transfection est supérieure à celle du PEI 25000, qui peut remplacer complètement le PEI 25000
Le PEI 25000 contient 4 à 11 % de résidus de propionyle, ce qui empêche la liaison du squelette polymère à l'ADN. Par rapport au PEI 25000, le PEI 40000 est une construction à shed complet, ses performances sont donc toujours efficaces.
Figure 4. Les cellules HEK-293 ont été transfectées de manière transitoire avec le plasmide GFP en utilisant les réactifs de transfection PEI 25000 et PEI 40000, et la fluorescence a été observée après 72 h. Résultats expérimentaux : l’efficacité de transfection du PEI 40000 est meilleure que celle du PEI 25000.
- Configuration simple et temps de transfection court
Ce produit est de type instantané, qui peut être directement dissous dans l'eau sans ajustement du pH. Et compatible avec le sérum et les antibiotiques, pas besoin de changer de milieu.
- Rentable, adapté à la transfection transitoire à grande échelle
Comparé aux produits importés, le réactif de transfection Yeasen PEI 40000 a un prix bas et des lots stables.
5. Autres réactifs de transfection de Yeasen
Yeasen propose une gamme complète de réactifs de transfection, notamment les méthodes de transfection chimiques courantes actuelles, les réactifs liposomiques cationiques et les réactifs polymères cationiques, qui peuvent être appliqués à une variété de scénarios d'utilisation. Dans cette section, nous listons tous les réactifs de transfection de Yeasen et leurs applications dans le tableau suivant, vous pouvez choisir celui qui convient le mieux à votre expérience.
Tableau 2.Liste des réactifs de transfection Yeasen
| Chat# | Nom du produit | Type d'acide nucléique | Type de cellule |
| 40823ES | ADN | Adhérent et Cellules suspendues | |
| 40816ES | ADN | Adhérent et Cellules suspendues | |
| 40820ES | ADN | Adhérent et Cellules suspendues | |
| 40821ES | ADN | Adhérent et Cellules suspendues | |
| 40802ES | ADN (<10kb), shRNA | UNcellules adhérentes | |
| 40805ES | Suspension sans cellules Hieff Trans™ Réactif de transfection liposomale (Renseigner) | ADN (<10kb) | Cellules en suspension (pour cellules sanguines en suspension ou immunitaires cellules, l'efficacité de la transfection des réactifs chimiques actuels est pas haut. Méthode d'électroporation ou de virus sont recommandés.) |
| 40806ES | ARNsi、miARN、pré-miARN, miARN mimétique, antimiARN | Cellules adhérentes et en suspension |
6. Considérer la lecture
Réactif de transfection – Hieff Trans™ et PEI
Guide de sélection des réactifs de transfection cellulaire in vitro
Référence:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Formation et comportement d'agrégation des complexes polyéthylèneimine-ADN. Département de pharmacie, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Nouvelles perspectives sur le mécanisme de transfection de la polyéthylèneimine et leurs implications sur la thérapie génique et les vaccins à ADN. Colloïdes et surfaces B : Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Transfection transitoire de cellules de mammifères avec de la polyéthylèneimine (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ