एपोप्टोसिस का परिचय
एपोप्टोसिस एक क्रमादेशित कोशिका मृत्यु घटना है जो किसी कोशिका के विकास के दौरान या जब यह कुछ कारकों से प्रभावित होती है, और इंट्रासेल्युलर जीन और उनके उत्पादों के विनियमन द्वारा ट्रिगर होती है। एपोप्टोसिस के मार्ग में, घटनाएँ एक कालानुक्रमिक क्रम में, एक-एक करके होती हैं, जिससे एपोप्टोटिक पुटिकाओं की प्रस्तुति होती है, और फिर एपोप्टोसिस होता है। एपोप्टोसिस भ्रूण के विकास और रूपजनन, ऊतकों में सामान्य कोशिकाओं की एक स्थिर आबादी के रखरखाव, शरीर की रक्षा और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं, बीमारी या नशा, उम्र बढ़ने और ट्यूमर के विकास के कारण होने वाली सेलुलर क्षति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, और इसका संभावित चिकित्सीय मूल्य है।
पता लगाने का सिद्धांत
सामान्य कोशिका झिल्लियों में फॉस्फोलिपिड्स का वितरण असममित होता है। फॉस्फेटिडिलसेरिन (PS) जीवित कोशिकाओं में कोशिका झिल्ली की आंतरिक सतह पर स्थित होता है, और एपोप्टोसिस के दौरान, कोशिका झिल्ली में परिवर्तन होता है, और PS कोशिका झिल्ली की आंतरिक सतह से कोशिका झिल्ली की बाहरी सतह पर चला जाता है। एनेक्सिन V एपोप्टोटिक कोशिकाओं की सतह पर PS को विशेष रूप से पहचानता है, जबकि जीवित कोशिकाओं से PS कोशिका झिल्ली की आंतरिक सतह पर स्थित होता है और एनेक्सिन V से विशेष रूप से जुड़ने में असमर्थ होता है।
नेक्रोटिक कोशिकाओं का PS भी कोशिका झिल्ली की आंतरिक सतह से कोशिका झिल्ली की बाहरी सतह पर फ़्लिप करता है, और एनेक्सिन V नेक्रोटिक कोशिकाओं की सतह पर PS को भी पहचानता है, इसलिए एनेक्सिन V नेक्रोटिक और एपोप्टोटिक कोशिकाओं के बीच अंतर करने में असमर्थ है। इसके विपरीत, PI डाई इंट्रासेल्युलर DNA से बंधने और नेक्रोटिक कोशिकाओं और जीवित कोशिकाओं के बीच अंतर करने में सक्षम थी। प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाओं और जीवित कोशिकाओं की कोशिका झिल्ली अभी भी बरकरार है, और PI डाई कोशिका में प्रवेश करने और DNA से बंधने के लिए कोशिका झिल्ली से स्वतंत्र रूप से नहीं गुजर सकती है, इसलिए PI डाई एपोप्टोटिक कोशिकाओं और जीवित कोशिकाओं को लेबल नहीं कर सकती है, जबकि PI डाई नेक्रोटिक कोशिकाओं की कोशिका झिल्ली से गुजरने और कोशिका के अंदर DNA से बंधने में सक्षम है, और नेक्रोटिक कोशिकाओं में PI डाई 488 nm लेजर द्वारा उत्तेजित होने के बाद लाल प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करेगी, जिसे संबंधित चैनल द्वारा प्राप्त किया जाएगा। इसलिए एनेक्सिन वी और पीआई का उपयोग जीवित कोशिकाओं, प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाओं और बाद में एपोप्टोटिक या नेक्रोटिक कोशिकाओं के बीच अंतर करने के लिए एक साथ किया जा सकता है।
चित्र 2 एनेक्सिन वी / पीआई का पता लगाने का सिद्धांत
फ्लो साइटोमेट्री डिटेक्शन
एफआईटीसी की अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 488 एनएम है, अधिकतम उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य 525 एनएम है, और एफआईटीसी की हरी प्रतिदीप्ति एफएल 1 चैनल में पाई जाती है। पीआई-डीएनए कॉम्प्लेक्स की अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 535 एनएम है, अधिकतम उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य 615 एनएम है, और पीआई की लाल प्रतिदीप्ति FL2 या FL3 चैनल में पाई जाती है। विश्लेषण सेलक्वेस्ट जैसे सॉफ़्टवेयर के साथ किया गया था, और क्षैतिज निर्देशांक के रूप में FITC और ऊर्ध्वाधर निर्देशांक के रूप में PI के साथ एक दो-रंग स्कैटर प्लॉट तैयार किया गया था। सामान्य प्रयोगों में, कोशिकाओं को तीन उप-आबादी में विभाजित किया जा सकता है, जिसमें जीवित कोशिकाओं में केवल बहुत कम तीव्रता वाली पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति होती है, प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाओं में केवल मजबूत हरा प्रतिदीप्ति होती है, और देर से एपोप्टोटिक कोशिकाओं में हरे और लाल प्रतिदीप्ति के साथ दोहरा धुंधलापन होता है।
चित्र.3 फ्लो साइटोमेट्री डिटेक्शन
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्नों
प्रश्न: क्या एनेक्सिन वी एपोप्टोसिस परख को पौधों या बैक्टीरिया (प्रोकैरियोट्स) पर लागू किया जा सकता है?
उत्तर: हां, लेकिन प्रोटोप्लास्ट तैयार करना आवश्यक है क्योंकि पौधों की कोशिकाओं या बैक्टीरिया (प्रोकैरियोट्स) में कोशिका भित्ति होती है। धुंधलापन समाधान की विशिष्ट खुराक केवल कोशिकाओं को डुबाने की आवश्यकता होती है, और अलग-अलग कोशिकाओं के लिए धुंधलापन का समय कुछ हद तक अलग होता है।
प्रश्न: प्रयोग के परिणाम का आकलन कैसे करें?
उत्तर: जीवित कोशिकाएं (एनेक्सिन वी-/पीआई-), प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाएं (एनेक्सिन वी+/पीआई-), विलंबित एपोप्टोटिक कोशिकाएं और परिगलित कोशिकाएं दोहरी सकारात्मकता (एनेक्सिन वी+/पीआई+), नग्न नाभिक (एनेक्सिन वी-/पीआई+) दर्शाती हैं।
प्रश्न: एनेक्सिन वी और ट्यूनल में क्या अंतर है?
उत्तर: टर्मिनल डिऑक्सीन्यूक्लियोटाइडिल ट्रांस्फरेज डीयूटीपी निक एंड लेबलिंग (ट्यूनल) एक अभिरंजन विधि है, जिसका उपयोग अंतरकोशिकीय डीएनए विखंडन स्थलों की पहचान करने के लिए किया जाता है - जो विलंबित एपोप्टोसिस की एक विशिष्ट विशेषता है।
एनेक्सिन वी अभिरंजन, कोशिका झिल्ली विषमता की क्षति के कारण कोशिका के बाहर उजागर हुए पीएस अवशेषों से बंध कर एपोप्टोसिस के प्रारंभिक चरणों को पहचानता है।
प्रश्न: क्या पीआई का पता लगाए बिना केवल एनेक्सिन वी-एफआईटीसी का उपयोग करके परख करना संभव है?
उत्तर: हां, यह संभव है। विशेष परीक्षण नमूनों के लिए, जैसे कि नाभिक रहित लाल रक्त कोशिकाएं, या डोक्सोरूबिसिन (एड्रियामाइसिन) दवा का उपयोग जो पीआई का पता लगाने में बाधा डालता है, दोनों मामलों में केवल एनेक्सिन वी-एफआईटीसी का उपयोग करके परख करना संभव है।
उत्पाद विवरण
| प्रोडक्ट का नाम | मद संख्या। | विनिर्देश |
| एनेक्सिन वी-एफआईटीसी/7-एएडी एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट | 40311ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी |
| 40302ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| एनेक्सिन वी-पीई/7-एएडी एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट | 40310ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी |
| 40303ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| एनेक्सिन वी-वाईएसफ्लोर™ 488/7-एएडी एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट | 40313ES60 | 100टी |
| 40305ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| 40304ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| एनेक्सिन V-YSFluor™ 647/7-AAD एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट | 40312ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी |
| 40306ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| 40307ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी | |
| 40308ईएस20/50/60 | 20टी/50टी/100टी |