चो मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3)जी)
योग्यता सारांश (श्रेणी सं.: 41332ईएस60)
- पृष्ठभूमि
इस रिपोर्ट में संक्षेपित डेटा CHO के लिए येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा किया गया है होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (3G) उत्पाद। सारांश डेटा केवल उपयोगकर्ता के संदर्भ के लिए है, और उपयोगकर्ता को होस्ट सेल अवशेष को सत्यापित करने की आवश्यकता है डीएनए विधि अपने स्वयं के नमूनों का उपयोग करके पुष्टि करती है कि विधि उपयोगकर्ता की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है। इस किट का उपयोग करने वाली सभी प्रयोगशालाओं को निम्नलिखित मापदंडों को सत्यापित करने की सलाह दी जाती है: रैखिकता, सीमा, सटीकता, परिशुद्धता, परिमाणीकरण सीमा, विशिष्टता और मजबूती।
येसेन बायोटेक्नोलॉजी इस किट के लिए विस्तृत योग्यता रिपोर्ट प्रदान कर सकती है। यदि उपयोगकर्ता इस रिपोर्ट का उपयोग करता है, तो केवल उपयुक्तता (जिसमें परिशुद्धता, शुद्धता और विशिष्टता) को सत्यापित किया जाना चाहिए।
- प्रायोगिक सामग्री और विधियाँ
2.1 चो मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3G), विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 41332ES60.
2.2 मोलप्योर मैग्नेटिक रेजीडुअल डीएनए सैंपल तैयारी किट, विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 18461ES60.
2.3 मूल डेटा: इलेक्ट्रॉनिक संस्करण 'प्रयोग रिपोर्ट' में दर्ज किया गया मूल फ़ाइल की उपफ़ाइल चो मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (3जी)।
2.4 विधियाँ: प्रयोग के लिए प्रयुक्त सामग्री और संचालन विधियाँ मूलतः येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा निर्मित या निर्धारित की गई थीं, जिनका मूल्यांकन और सत्यापन लम्बे समय तक किया गया, किट विकास और विनिर्माण में आईएसओ 13485 प्रणाली का पालन किया गया।
- योग्यता सामग्री और परिणाम
3.1 पता लगाने की सीमा
किट की रैखिक सीमा R के साथ 3 fg/μL~300 pg/μL थी2=1, और प्रत्येक सांद्रता परख के लिए CV<15% के साथ प्रवर्धन दक्षता 99.09% थी।
चित्र 1 CHO डीएनए (3G) qPCR मानक वक्र
3.2 सटीकता
3.2.1 आरईकोवरी
3.2.1.1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग
CHO के नमूने उच्च और निम्न सांद्रता पर डीएनए मानक: 30 पीजी/μएल, 300 fg/μL, और 3 fg/μL क्रमशः तैयार किए गए, और अवशिष्ट डीएनए नमूना पूर्व उपचार किट (3) के लिए चुंबकीय मनका विधि का उपयोग करके निष्कर्षण के बाद परख किया गया प्रत्येक नमूने के लिए 100% निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं, और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं), और नमूना पुनर्प्राप्ति और सी.वी. का विश्लेषण किया गया।
डीएनए नमूनों की विभिन्न सांद्रताओं के लिए, पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, और सभी सी.वी. <20% थे।
| नमूना प्रकार | सैद्धांतिक एकाग्रता | 1 मतलब निकालें | 2 मतलब निकालें | 3 मतलब निकालें | औसत सांद्रता | सीवी | वसूली |
| रिक्त नमूना | / | / | / |
| / | / | / |
| रिकवरी नमूना 1 | 30 पीजी/μएल | 27.07 | 27.51 | 28.27 | 27.62 | 2.20% | 92.06% |
| रिकवरी नमूना 2 | 300 एफजी/μएल | 285.53 | 301.25 | 295.71 | 294.16 | 2.71% | 98.05% |
| रिकवरी नमूना 3 | 3 एफजी/μएल | 3.50 | 3.54 | 3.31 | 3.45 | 3.56% | 115.00% |
तालिका1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी
3.2.1.2 सिम्युलेटेड सैंपल स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग
समान सांद्रता (300 fg/μL CHO DNA) के नमूने 5 विभिन्न पृष्ठभूमि विलयनों (उच्च प्रोटीन, उच्च न्यूक्लिक अम्ल, उच्च और निम्न pH, उच्च लवण) के साथ निकाले गए (प्रत्येक नमूने के लिए 3 निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं) और नमूना पुनःप्राप्ति और CV का विश्लेषण किया गया।
विभिन्न पृष्ठभूमि समाधानों के लिए डीएनए नमूना पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, सभी CVs <20% थे।
| नमूना प्रकार | सैद्धांतिक एकाग्रता | 1 मतलब निकालें | 2 मतलब निकालें | 3 मतलब निकालें | औसत सांद्रता | सीवी | वसूली |
| मूल नमूना | / | / | / |
| / | / | / |
| उच्च प्रोटीन | 300 एफजी/μएल | 302.29 | 332.86 | 342.76 | 325.97 | 6.47% | 108.66% |
| उच्च परमाणु अम्ल | 284.47 | 290.66 | 308.76 | 294.63 | 4.28% | 98.21% | |
| उच्च नमक | 272.96 | 286.25 | 312.91 | 290.71 | 7.00% | 96.90% | |
| उच्च पीएच | 296.04 | 320.58 | 324.56 | 313.72 | 4.92% | 104.57% | |
| कम पीएच | 314.77 | 327.89 | 340.26 | 327.64 | 3.89% | 109.21% |
तालिका2 बुनियादी नमूना स्पाइकिंग रिकवरी
3.3 परिशुद्धता
3.3.1 repeatability
CHO DNA मानकों के लिए 3 fg/μL की सांद्रता पर CV <15% के साथ परख को 10 बार दोहराएं।
| repetitions | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | अर्थ | सीवी% |
| पता लगाने का मान (fg/μL) | 3.13 | 3.26 | 2.89 | 3.16 | 2.95 | 2.87 | 2.88 | 2.75 | 2.87 | 3.15 | 2.99 | 5.65% |
तालिका3 पुनरावृत्ति परिणाम
3.3.2 मध्यवर्ती परिशुद्धता
तीन प्रयोगकर्ताओं ने स्वतंत्र रूप से उच्च और निम्न सांद्रता पर CHO DNA मानक नमूनों का परीक्षण किया: 300 pg/μL, 3 pg/μL, और 3 fg/μL, और प्रत्येक सांद्रता के लिए तीन प्रतिकृतियां की गईं, और प्राप्त सभी नौ आंकड़ों का CV <15% था।
| ऍक्स्प |
वास्तविक सांद्रता सैद्धांतिक एकाग्रता | सीएचओ डीएनए (3जी) | ||
| 300 पीजी/यूएल | 3 पीजी/यूएल | 3 एफजी/यूएल | ||
| एक्सप 1 | निर्धारण 1 | 302.63 | 2.97 | 3.40 |
| निश्चय 2 | 294.54 | 3.01 | 3.14 | |
| निश्चय 3 | 287.67 | 2.99 | 3.01 | |
| एक्सप2 | निश्चय 4 | 292.27 | 2.92 | 3.47 |
| निश्चय 5 | 299.61 | 2.90 | 2.82 | |
| निश्चय 6 | 305.73 | 2.93 | 2.90 | |
| एक्सप 3 | निश्चय 7 | 301.06 | 3.17 | 3.15 |
| निश्चय 8 | 299.17 | 3.00 | 3.21 | |
| निश्चय 9 | 290.66 | 2.90 | 3.05 | |
| / | अर्थ | 297.04 | 2.98 | 3.13 |
| / | सीवी% | 2.03 | 2.80 | 6.85 |
तालिका4 मध्यवर्ती परिशुद्धता परिणाम
3.4 विशिष्टता
बायोलॉजिक्स के उत्पादन में सामान्यतः प्रयुक्त होने वाले कोशिकीय जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप का मूल्यांकन CHO डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ हस्तक्षेप के लिए किया गया, तथा हस्तक्षेप समूह नियंत्रण समूह के साथ ओवरलैप हो गया तथा कोई हस्तक्षेप नहीं देखा गया (नीचे दिया गया चित्र, क्रमानुसार, CHO डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ माउस, MDCK, HEK293 तथा E.coli जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप डेटा को दर्शाता है)।
चित्र 2 हस्तक्षेप प्रयोग के परिणाम
3.5 परिमाणीकरण सीमा
CHO DNA का पता 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0.5 fg/μL, 0.3fg/uL और 0.1 fg/μL पर लगाया गया, जिसमें प्रत्येक सांद्रता के लिए 10 प्रतिकृतियाँ थीं। परिणामों से पता चला कि 0.3 fg/μL और उससे अधिक की सांद्रता पर CV <20% था। यानी, CHO होस्ट सेल DNA अवशेष पहचान किट (3G) की मात्रा निर्धारण की सीमा 0.3 fg/μL थी।
|
repetitions परीक्षण आइटम | CHO डीएनए (3G) (fg/μL) | |
| मात्रा | पुनर्गणना अनुपात% | |
| 1 | 0.28 | 93.33% |
| 2 | 0.26 | 86.67% |
| 3 | 0.32 | 106.67% |
| 4 | 0.30 | 100.00% |
| 5 | 0.33 | 110.00% |
| 6 | 0.23 | 76.67% |
| 7 | 0.29 | 96.67% |
| 8 | 0.37 | 123.33% |
| 9 | 0.31 | 103.33% |
| 10 | 0.28 | 93.33% |
| अर्थ | 0.30 | / |
| सीवी% | 13.09% | / |
चित्र तीन। CHO DNA (3G) qPCR परीक्षण परिणाम
3.6 पता लगाने की सीमा
CHO DNA का पता 0.3 fg/μL, 0.1 fg/μL, 0.05 fg/μL और 0.01 fg/μL पर लगाया गया, जिसमें प्रत्येक सांद्रता के लिए 20 प्रतिकृतियाँ थीं। परिणामों से पता चला कि 0.05 fg/μL और उससे अधिक की सांद्रता पर 20 प्रतिकृति कुओं में पता लगाने की दर ≥19 (यानी, पता लगाने की दर ≥95%) थी। यानी, CHO होस्ट सेल डीएनए अवशेष पहचान किट (3G) की पहचान की सीमा 0.05 fg/μL थी।
चित्र 4. CHO DNA (3G) qPCR परीक्षण परिणाम
3.7 मजबूती
इस किट का परीक्षण किया जा चुका है और यह निम्नलिखित उपकरणों के लिए उपयुक्त है, लेकिन इन्हीं तक सीमित नहीं है:
| विक्रेता | उपकरण मॉडल | प्रवर्धन क्षमताएं | आर2 | परिमाणीकरण की सीमा | सीवी | पता लगाने की सीमा | पता लगाने की दर |
| थर्मामीटरों | एबीआई 7500 | 99.69% | 1 | 0.3 एफजी/μएल | 12.40% | 0.05 एफजी/μएल | 95.65% |
| थर्मामीटरों | एबीआई क्वांटस्टूडियो5 | 99.26% | 1 | 0.3 एफजी/μएल | 15.30% | 0.05 एफजी/μएल | 100.00% |
| रॉश | लाइटसाइक्लर480 | 2.05% | 0.978 | 0.3 एफजी/μएल | / | 0.05 एफजी/μएल | / |
| शंघाई होंगशी | स्लैन | 101.14% | 0.999 | 0.3 एफजी/μएल | 14.41% | 0.05 एफजी/μएल | 95.65% |
तालिका5 उपकरण उपयुक्तता परीक्षण परिणाम
3.8 स्थिरता
3.8.1 हिमीकरण-विगलन स्थिरता
सीएचओ होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (3जी) का परीक्षण 10 बार बार-बार ठंडा करके और पिघलाकर किया गया, और किट के प्रदर्शन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।
|
परीक्षण संकेतक जमने-पिघलने का समय | पैरामीटर | T0 समय | 10 बार जमाएं-पिघलाएं |
| मानक वक्र पैरामीटर | प्रवर्धन क्षमताएं | 95.70% | 98.62% |
| आर2 | 1 | 1 | |
| परिमाणीकरण की सीमा (0.3 fg/μL) | सीवी | 15.31% | 17.16% |
| पता लगाने की सीमा (0.05 fg/μL) | पता लगाने की दर | 95.65% | 100% |
तालिका6 हिमीकरण-पिघलना स्थिरता परिणाम विश्लेषण
3.7.2 त्वरित स्थिरता
CHO होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (3G) को क्रमशः 30 दिनों के लिए 2~8°C और 14 दिनों के लिए 37°C पर संग्रहीत किया गया। किट के प्रदर्शन पर कोई असर नहीं पड़ा।
|
परीक्षण संकेतक त्वरण तापमान और समय | पैरामीटर | प्रयोग 1 | प्रयोग 2 | ||
| T0 समय | 2~8℃ 30 दिन | T0 समय | 37℃ 14 दिन | ||
| मानक वक्र पैरामीटर | प्रवर्धन क्षमताएं | 100.53% | 102.61% | 101.76% | 101.84% |
| आर2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| परिमाणीकरण की सीमा (0.3 fg/μL) | सीवी | 17.16% | 12.63% | 16.27% | 12.49 |
| पता लगाने की सीमा (0.05 fg/μL) | पता लगाने की दर | 95.65% | 100% | 95.57% | 100% |
तालिका7 त्वरित स्थिरता परिणाम विश्लेषण
3.9 रिक्त स्थान की सीमा
3.9.1 कोई टेम्पलेट नियंत्रण (NTC) नहीं
क्यूपीसीआर मात्रात्मक परख करने के लिए 96 पुनरावृत्तियों के साथ डीएनए कमजोरीकरण में कोई टेम्पलेट नियंत्रण (एनटीसी) नहीं था, परीक्षण किए गए 96 प्रतिकृति कुओं के ऊपर सभी सीटी मान >40 थे।
चित्र 5 एनटीसी प्रयोग के परिणाम
3.9.2 नकारात्मक निष्कर्षण नियंत्रण नमूना (एनसीएस)
नकारात्मक निष्कर्षण नियंत्रण नमूना (एनसीएस) डीएनए कमजोरीकरण था, और इसे पहले नमूना पूर्व-उपचार द्वारा निकाला गया था, फिर क्यूपीसीआर किया गया था, परीक्षण किए गए 48 प्रतिकृति कुओं के ऊपर सभी सीटी मान > 40 थे।
चित्र 6 एनसीएस प्रयोग के परिणाम
- 4.संदर्भ
4.1 चीनी फार्माकोपिया आयोग (ChPC)। पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया (वॉल्यूम 2) [एस]। बीजिंग: चाइना मेडिकल साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, पृ.542-543, 2020।
4.2 एनएमपीए, 2007: जैविक उत्पादों के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन की तकनीकी समीक्षा के लिए सामान्य सिद्धांत।
4.3 आईसीएच (2022)《विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन Q2》, मसौदा संस्करण।
आदेश की जानकारी
| विवरण | भाग संख्या |
| 41332ईएस | |
| 41331ईएस | |
| 41307ईएस | |
| 41308ईएस | |
| 18461ईएस | |
| MycAway™ माइकोप्लाज्मा qPCR डिटेक्शन किट (2G) | 40619ईएस |