अवलोकन
मेजबान कोशिका अवशिष्ट डीएनए बायोलॉजिक्स के उत्पादन में शामिल एक प्रक्रिया-संबंधित अशुद्धता है, जो न केवल बायोलॉजिक्स की प्रभावशीलता को कम करता है, बल्कि संक्रामकता या ट्यूमरजन्यता जैसी सुरक्षा संबंधी चिंताएँ भी पैदा कर सकता है। इसलिए, विभिन्न देशों में नियामक एजेंसियों ने बायोलॉजिक्स में अवशिष्ट डीएनए की मात्रा पर सीमाएँ लगाई हैं।
वर्तमान WHO और FDA दिशा-निर्देश तैयार उत्पादों में अवशिष्ट DNA की मात्रा 10 ng/खुराक से अधिक नहीं होने की सलाह देते हैं, और FDA यह भी बताता है कि बायोलॉजिक्स के होस्ट सेल DNA में अवशिष्ट DNA 100 pg/खुराक से अधिक नहीं होना चाहिए। यूरोपीय फार्माकोपिया के सामान्य सिद्धांत यह निर्धारित करते हैं कि जैविक उत्पादों की अधिकांश अवशिष्ट DNA सीमाएँ 10 ng/खुराक से अधिक नहीं होनी चाहिए, लेकिन व्यक्तिगत टीकों की अवशिष्ट DNA सीमाएँ अधिक कठोर हैं, उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस A के विरुद्ध निष्क्रिय टीके में अवशिष्ट DNA 100 pg/खुराक से अधिक नहीं होना चाहिए, और हेपेटाइटिस B के विरुद्ध टीके में अवशिष्ट DNA 10 pg/खुराक से अधिक नहीं होना चाहिए। चीनी फार्माकोपिया, भाग III के 2020 संस्करण में यह निर्धारित किया गया है कि सेलुलर मैट्रिक्स पर उत्पादित जैविक तैयारियों में डीएनए अवशेष 100 पीजी/खुराक से अधिक नहीं होना चाहिए, और बैक्टीरिया या फंगल मैट्रिक्स पर उत्पादित टीकों में डीएनए अवशेष 10 एनजी/खुराक से अधिक नहीं होना चाहिए।
इसके अलावा, बहिर्जात डीएनए अवशेषों के निर्धारण के तरीकों के लिए, राष्ट्रीय फार्माकोपिया भी मार्गदर्शन सिफारिशें देते हैं। यूएस फार्माकोपिया के यूएसपी40-एनएफ35 जनरल प्रोविजन 1130 के 2017 संस्करण में बहिर्जात डीएनए अवशेषों के निर्धारण के लिए 3 तरीकों का वर्णन किया गया है, जो डीएनए जांच संकरण, थ्रेशोल्ड विधि और वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर विधि हैं। यूरोपीय फार्माकोपिया वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर और इम्यूनोएंजाइमेटिक तरीकों का प्रस्ताव करता है, जो मेजबान कोशिकाओं में अवशिष्ट डीएनए की मात्रा निर्धारित करने के लिए 2 संवेदनशील विश्लेषणात्मक तरीके हैं। तीन सामान्य नियमों 3407 के चीनी फार्माकोपिया 2020 संस्करण में यह भी निर्धारित किया गया है कि मेजबान सेल डीएनए अवशेषों का पता लगाने के तरीके डीएनए जांच संकरण, प्रतिदीप्ति धुंधलापन और मात्रात्मक पीसीआर हैं।
उनमें से, qPCR विधि में बहुत उच्च संवेदनशीलता, अनुक्रम विशिष्टता और सटीकता है, जो प्रक्रिया अनुसंधान और तैयार उत्पादों के गुणवत्ता नियंत्रण में बायोफर्मासिटिकल उद्योग के लिए एक विश्वसनीय पता लगाने का साधन प्रदान कर सकती है, और अब प्रत्येक जैविक उत्पाद निर्माता के लिए पसंदीदा पता लगाने की विधि बन गई है।
येसेन बायोटेक्नोलॉजी अवशिष्ट डीएनए जांच किट
फ्लोरोसेंट जांच qPCR के सिद्धांत के आधार पर, येसेन ने CHO, HEK293, E.coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris इत्यादि सहित तेज़ और विशेष होस्ट सेल अवशेष DNA पहचान किट की एक श्रृंखला विकसित की है। ये किट एंटीबॉडी दवाओं, सेल और जीन थेरेपी उत्पादों, पुनः संयोजक प्रोटीन दवाओं और टीकों जैसे जैविक पदार्थों के विकास और उत्पादन के दौरान मध्यवर्ती, अर्ध-तैयार और तैयार उत्पादों में DNA अवशेषों का विशेष और तेज़ पता लगाने की सुविधा प्रदान करते हैं।
विशेषता
उच्च संवेदनशीलता: फ्लोरोसेंट जांच qPCR विधि के आधार पर विकसित एलएलओडी 0 जितना कम है।05एफजी/µएल;
उच्च सटीकता: नमूना स्पाइकिंग रिकवरी 70% ~ 130% की सीमा में;
उच्च विशिष्टता: अप्रासंगिक डीएनए के साथ कोई क्रॉस-रिएक्टिविटी नहीं, जिससे पता लगाने में झूठी सकारात्मकता कम हो जाती है;
विनियमों का अनुपालन: Chp, USP, ICHQ2(R1) और अन्य आवश्यकताओं के अनुसार पूर्णतः मान्य, चीनी और विदेशी नियामक मानकों के अनुसार प्रदर्शन;
लेखापरीक्षा में सहयोग करें: उत्पाद उत्पादन ISO13485 गुणवत्ता प्रणाली मानकों के अनुरूप है, जिसमें उत्तम लेखापरीक्षा दस्तावेज हैं।
गुणवत्ता की गारंटी: किटों के सभी कच्चे माल स्वतंत्र रूप से विकसित किए गए हैं, और qPCR मिक्स और अन्य एंजाइम उत्पादों का उत्पादन एक अति-स्वच्छ एंजाइम कारखाने में किया जाता है।
आवेदन
एंटीबॉडी ड्रग्सहोस्ट सेल अवशिष्ट अशुद्धता का पता लगानाटीकेमेजबान कोशिका अवशिष्ट अशुद्धता का पता लगाना
पुनः संयोजक प्रोटीन औषधियाँमेजबान कोशिका अवशिष्ट अशुद्धता का पता लगाना
विनिर्देश
| परीक्षण और सत्यापन कार्यक्रम | संदर्भ मानक या आवश्यकताएँ | एनओटे | |
| 1. किट मानक (संदर्भ मानक) | राष्ट्रीय मानकों के अनुरूप बेंचमार्किंग या तैयार मानक |
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| 2. एलइनियर आरएंज | मानक वक्र का दायरा | मैनुअल या वास्तविक स्थिति का संदर्भ लें (उदाहरणार्थ 30fg/μL~300pg/μL) |
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| आर2 | ≥0.98 (PsYeasen किट≥0.99） | चीनी फार्माकोपिया 2020 संस्करण 3407 सामान्य प्रावधानों में एचसीडी के लिए आवश्यकताएँ | |
| ढलान | -3.1~-3.8 (PsYeasen किट -3.1~-3.6） | चीनी फार्माकोपिया 2020 संस्करण 3407 सामान्य प्रावधानों में एचसीडी के लिए आवश्यकताएँ | |
| प्रवर्धन दक्षता | 90%~110%（（Psसंगत ढलान -3.1~-3.6, उद्योग के भीतर आवश्यकताएँ） |
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| 3. एशुद्धता | राष्ट्रीय मानक डीएनए से विचलन | <15% |
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| नमूना स्पाइकिंग रिकवरी दर | 50%~150%（उद्योग के भीतर आवश्यकताएं 70~130%） | चीनी फार्माकोपिया 2020 संस्करण 3407 सामान्य प्रावधानों में एचसीडी के लिए आवश्यकताएँ | |
| 4. पीपुनर्निर्णय | repeatable | सीवी＜15% |
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| मध्यवर्ती परिशुद्धता | सीवी＜15% |
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| 5. एसविशेषता | बाह्य डीएनए के साथ कोई हस्तक्षेप नहीं |
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| 6. एलपरिमाणीकरण की नकल | fg/μL स्तर |
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| 7. एसस्थिरता | बार-बार जमाना और पिघलाना | 10 टाइम्स |
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| त्वरण स्थिरता | 2~8℃ 30 दिन, 37℃ 14 दिन |
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| वैधता अवधि | 2 वर्षों के लिए -20°C भंडारण |
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आंकड़ों
उच्च संवेदनशीलता: LLOQ 0.3 fg/µL जितना कम, LLOD 0.05 fg/µL जितना कम।
1.CHO होस्ट सेल अवशिष्ट डीएनए डिटेक्शन किट (3G) की रैखिक सीमा 3fg/μL~300pg/μL, R थी2=1, प्रवर्धन दक्षता 99.29% थी, और प्रत्येक सांद्रता के पता लगाने के मूल्य का CV <15% था।
चित्र 1. CHO DNA (3G) अंशांकन ग्राफ (बाएं) और प्रवर्धन वक्र रैखिक मानचित्रण (दाएं)
2. मानकीकृत गीत के सबसे कम सांद्रता बिंदु पर 3fg/uL और उससे कम सांद्रता पर CHO DNA (3G) का पता लगाएं, प्रति सांद्रता 10 प्रतिकृतियाँ। परिणामों से पता चला कि 0.3 fg/uL और उससे अधिक की सांद्रता पर, CV <20% था, यानी, CHO होस्ट सेल DNA अवशेष परख किट (3G) की मात्रा निर्धारण की सीमा 0.3 fg/uL थी।
चित्र 3. 0.05fg/μL CHO DNA (3G) qPCR परख परिणाम
उच्च विशिष्टता: अन्य मेजबान कोशिका डीएनए के साथ कोई क्रॉस-रिएक्टिविटी नहीं।
CHO DNA (3G) के प्रति उच्च आकर्षण वाले माउस प्रजातियों के जीनोमिक DNA के साथ-साथ सामान्यतः जैविक पदार्थों के उत्पादन में प्रयुक्त कोशिकाओं के जीनोमिक DNA के CHO DNA पहचान अभिकर्मक में हस्तक्षेप का आकलन करने पर, हस्तक्षेप समूह और नियंत्रण समूह के प्रवर्धन वक्रों में ओवरलैप पाया गया और कोई हस्तक्षेप नहीं देखा गया (निम्नलिखित ग्राफ, क्रमानुसार, माउस, HEK293 और E.coli जीनोमिक DNA के CHO DNA पहचान अभिकर्मक में हस्तक्षेप डेटा को दर्शाते हैं)।
चित्र 4.CHO DNA (3G) किट के साथ हस्तक्षेप प्रयोगों के परिणाम
उत्पाद की जानकारी
| वर्गीकरण | मद संख्या | प्रोडक्ट का नाम | विनिर्देश |
| नमूना पूर्व उपचार | 18461ईएस | 25टी/100टी | |
| 18467ईएस | MolPure® Mag48 नमूना तैयारी किट FN | 3×16टी/6×16टी | |
| न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण उपकरण | 80511ईएस | 48-चैनल स्वचालित न्यूक्लिक एसिड एक्सट्रैक्टर | 48 फ्लक्स |
| अवशिष्ट डीएनए का पता लगाना | 41307ईएस | 50टी/100टी | |
| 41308ईएस | 50टी/100टी | ||
| 41310ईएस | SV40LTA&E1A अवशेष डीएनए डिटेक्शन किट | 50टी/100टी | |
| 41317ईएस | हैन्सेनुला पॉलीमोर्फा होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट | 50टी/100टी | |
| 41319ईएस | एमडीसीके होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41323ईएस | प्लास्मिड डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41324ईएस | एस. सेरेविसिया होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41325ईएस | मानव मेज़बान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41328ईएस | पिचिया पास्टोरिस होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41330ईएस | एसएफ9 और बैकुलोवायरस डीएनए अवशेष जांच किट | 50टी/100टी | |
| 41331ईएस | 50टी/100टी | ||
| 41332ईएस | 50टी/100टी |