CHO Host Cell DNA Residu Detection Kit (3G) Laporan Validasi

MEMILIH Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (3G)

Ringkasan Kualifikasi (Nomor Katalog: 41332Bahasa Inggris ES60

  1. Latar belakang

Data yang dirangkum dalam laporan ini dilakukan oleh Yeasen Bioteknologi untuk CHO Produk Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (3G). Data ringkasan hanya untuk referensi pengguna, dan pengguna perlu memverifikasi residu sel inang. Metode DNA dengan menggunakan sampel mereka sendiri untuk memastikan bahwa metode tersebut dapat memenuhi persyaratan pengguna. Semua laboratorium yang menggunakan kit ini disarankan untuk memverifikasi parameter berikut: Linearitas, Jangkauan, Akurasi, Presisi, Batas Kuantisasi, Spesifisitas, dan Ketahanan.

Yeasen Bioteknologi dapat memberikan laporan kualifikasi terperinci untuk kit ini. Jika pengguna menggunakan laporan ini, maka hanya kesesuaian (yang mencakup Presisi, Ketepatan dan Spesifisitas) harus diverifikasi.

  1. Bahan dan metode percobaan

2.1 MEMILIH Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (3G), Vendor: Yeasen, Nomor Kucing: 41332ES60.

2.2 Kit Persiapan Sampel DNA Residu Magnetik MolPure, Vendor: Yeasen, Nomor Kucing: 18461ES60.

2.3 Data asli: versi elektronik dicatat dalam 'Laporan Eksperimen' subfile dari file induk MEMILIH Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (3G).

2.4 Metode: Bahan dan metode operasi yang digunakan untuk percobaan pada dasarnya diproduksi atau ditetapkan oleh Yeasen Bioteknologi yang telah dinilai dan diverifikasi dalam jangka waktu lama, pengembangan dan pembuatan kit mengikuti sistem ISO 13485.

  1. Isi dan hasil kualifikasi

3.1 Jangkauan deteksi

Kisaran linier kit adalah 3 fg/μL~300 pg/μL dengan R2=1, dan efisiensi amplifikasi adalah 99,09% dengan CV<15% untuk setiap uji konsentrasi.

Gambar 1 Kurva Standar qPCR DNA CHO (3G)

3.2 Akurasi

3.2.1 Rlingkungan

3.2.1.1 Percobaan Pemulihan Spiking Sampel Kosong

Sampel CHO Standar DNA pada konsentrasi tinggi dan rendah: 30 pg/μL, 300 fg/μL, dan 3 fg/μL masing-masing disiapkan dan diuji setelah ekstraksi menggunakan Metode Manik Magnetik untuk Kit Pra-perlakuan Sampel DNA Residu (3 Replikasi ekstraksi dilakukan untuk setiap sampel, dan 3 replikasi pengujian dilakukan untuk setiap ekstraksi), dan pemulihan sampel dan CV dianalisis.

Untuk berbagai konsentrasi sampel DNA, pemulihan berkisar antara 70% hingga 130%, dan CV semuanya <20%.

Jenis sampel

Konsentrasi Teoritis

Ekstrak 1 rata-rata

Ekstrak 2 rata-rata

Ekstrak 3 rata-rata

Konsentrasi rata-rata

Riwayat Hidup

Pemulihan

Sampel Kosong

/

/

/

/

/

/

Sampel pemulihan 1

30 pg/μL

tanggal 27.07

27.51

28.27

27.62

2,20%

92,06%

Sampel pemulihan 2

300 fg/μL

285.53

301.25

295.71

294.16

2,71%

98,05%

Sampel pemulihan 3

3 fg/μL

3.50

3.54

3.31

3.45

3,56%

115,00%

Tabel 1 Pemulihan Spiking Sampel Kosong

3.2.1.2 Simulasi Percobaan Pemulihan Spiking Sampel

Sampel dengan konsentrasi yang sama (300 fg/μL DNA CHO) diekstraksi (3 replikasi ekstraksi dilakukan untuk setiap sampel dan 3 replikasi pengujian dilakukan untuk setiap ekstraksi) dengan 5 larutan latar belakang yang berbeda (protein tinggi, asam nukleat tinggi, pH tinggi dan rendah, garam tinggi) dan pemulihan sampel dan CV dianalisis.

Pemulihan sampel DNA untuk berbagai larutan latar belakang berkisar antara 70% hingga 130%, dengan semua CV <20%.

Jenis sampel

Konsentrasi Teoritis

Ekstrak 1 rata-rata

Ekstrak 2 rata-rata

Ekstrak 3 rata-rata

Konsentrasi rata-rata

Riwayat Hidup

Pemulihan

Sampel Dasar

/

/

/

/

/

/

Protein Tinggi

300 fg/μL

302.29

332.86

342.76

325.97

6,47%

108,66%

Asam Nuklir Tinggi

284.47

290.66

308.76

294.63

4,28%

98,21%

kadar garam tinggi

272.96

286.25

312.91

290.71

7,00% dari

Nomor 96.90%

pH tinggi

296.04

320.58

324.56

313.72

4,92%

104,57%

pH rendah

314.77

327.89

340.26

327.64

3,89%

109,21%

Tabel 2 Pemulihan Spiking Sampel Dasar

3.3 Presisi

3.3.1 Kemampuan mengulang

Ulangi pengujian 10 kali untuk standar DNA CHO pada konsentrasi 3 fg/μL dengan CV <15%.

Pengulangan

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Berarti

CV%

Nilai Deteksi (fg/μL)

3.13

3.26

2.89

3.16

2.95

2.87

2.88

2.75

2.87

3.15

2,99

5,65% dari

Tabel 3 Hasil Pengulangan

3.3.2 Presisi menengah

Tiga peneliti secara independen menguji sampel standar DNA CHO pada konsentrasi tinggi dan rendah: 300 pg/μL, 3 pg/μL, dan 3 fg/μL, dan tiga replikasi dilakukan untuk setiap konsentrasi, dan CV dari kesembilan data yang diperoleh adalah <15%.

Eksp

Konsentrasi Aktual

Konsentrasi Teoritis

DNA CHO (3G)

300 pg/l

3 pg/l

3 fg/lL

Eksp 1

Penentuan 1

302.63

2.97

3.40

Penentuan 2

294.54

3.01

3.14

Penentuan 3

287.67

2,99

3.01

Eksp2

Penentuan 4

292.27

2.92

3.47

Penentuan 5

299.61

2.90

2.82

Penentuan 6

305.73

2.93

2.90

Eksp 3

Penentuan 7

301.06

3.17

3.15

Penentuan 8

299.17

3.00

3.21

Penentuan 9

290.66

2.90

3.05

/

Berarti

297.04

2.98

3.13

/

CV%

2.03

2.80

6.85

Tabel 4 Presisi Menengah Hasil

3.4 Spesifisitas

Interferensi DNA genomik seluler yang umum digunakan dalam produksi biologik dinilai untuk interferensi dengan reagen deteksi DNA CHO, dan kelompok interferensi tumpang tindih dengan kelompok kontrol dan tidak ada interferensi yang terlihat (gambar di bawah ini menunjukkan, secara berurutan, data interferensi DNA genomik Tikus, MDCK, HEK293 dan E.coli dengan reagen deteksi DNA CHO).

Gambar 2 Hasil percobaan interferensi

3.5 Batasan Kuantisasi

DNA CHO dideteksi pada 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0,5 fg/μL, 0,3fg/uL dan 0,1 fg/μL, dengan 10 kali ulangan untuk setiap konsentrasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa CV <20% pada konsentrasi 0,3 fg/μL dan di atasnya. Artinya, batas kuantifikasi kit deteksi residu DNA sel inang CHO (3G) adalah 0,3 fg/μL.

Pengulangan

Item Uji

DNA CHO (3G) (fg/μL)

Kuantitas

Rasio Perhitungan Ulang%

1

0.28

93,33%

2

0.26

86,67%

3

0.32

106,67%

4

0.30

100,00%

5

0.33

110,00%

6

0.23

76,67%

7

0.29

96,67%

8

0.37

123,33%

9

0.31

Nomor telepon 103.33%

10

0.28

93,33%

Berarti

0.30

/

CV%

13,09%

/

Gambar 3. Hasil Uji qPCR DNA CHO (3G)

3.6 Batas Deteksi

DNA CHO dideteksi pada 0,3 fg/μL, 0,1 fg/μL, 0,05 fg/μL dan 0,01 fg/μL, dengan 20 kali ulangan untuk setiap konsentrasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa laju deteksi adalah ≥19 (yaitu, laju deteksi ≥95%) dalam 20 sumur ulangan pada konsentrasi 0,05 fg/μL dan di atasnya. Artinya, batas deteksi kit deteksi residu DNA sel inang CHO (3G) adalah 0,05 fg/μL.


Gambar 4. Hasil Uji qPCR DNA CHO (3G)

3.7 Ketahanan

Kit ini telah diuji dan cocok untuk, namun tidak terbatas pada, instrumen berikut:

Penjual

Model Instrumen

Efisiensi Amplifikasi

R2

Batasan kuantifikasi

Riwayat Hidup

Batas Deteksi

Tingkat Deteksi

Termo

ABI 7500

99,69%

1

0,3 fg/μL

12,40%

0,05 fg/μL

95,65%

Termo

Studio Kuantitatif ABI 5

99,26%

1

0,3 fg/μL

15,30%

0,05 fg/μL

100,00%

Bahasa Indonesia: Roche

Sepeda Ringan480

2,05% dari

0,978 tahun

0,3 fg/μL

/

0,05 fg/μL

/

Shanghai Hongshi

Bahasa SLAN

101,14%

0,999

0,3 fg/μL

14,41%

0,05 fg/μL

95,65%

Tabel 5 Hasil Uji Kesesuaian Instrumen

3.8 Stabilitas

3.8.1 Stabilitas beku-cair

Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang CHO (3G) diuji melalui pembekuan dan pencairan berulang sebanyak 10 kali, dan kinerja kit tidak terpengaruh.

Menguji Indikator

Waktu Beku-Cair

Parameter

Waktu T0

Bekukan-cairkan 10 kali

Parameter Kurva Standar

Efisiensi Amplifikasi

95,70%

98,62%

R2

1

1

Batas Kuantifikasi (0,3 fg/μL)

Riwayat Hidup

15,31%

17,16%

Batas Deteksi (0,05 fg/μL)

Tingkat Deteksi

95,65%

100%

Tabel 6 Analisis hasil stabilitas beku-cair

3.7.2 Stabilitas yang Dipercepat

Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang CHO (3G) disimpan pada suhu 2~8°C selama 30 hari dan 37°C selama 14 hari. Tidak ada kinerja kit yang terpengaruh.

Menguji Indikator

Suhu dan Waktu Akselerasi

Parameter

Percobaan 1

Percobaan 2

Waktu T0

2~8℃ 30 Hari

Waktu T0

37℃ 14 Hari

Parameter Kurva Standar

Efisiensi Amplifikasi

100,53%

102,61%

101,76%

101,84%

R2

1

1

1

1

Batas Kuantifikasi (0,3 fg/μL)

Riwayat Hidup

17,16%

12,63%

16,27%

12.49

Batas Deteksi (0,05 fg/μL)

Tingkat Deteksi

95,65%

100%

95,57%

100%

Tabel 7 Analisis hasil stabilitas yang dipercepat

3.9 Batas Kosong

3.9.1 Tidak Ada Kontrol Template (NTC)

Tidak ada kontrol templat (NTC) yaitu pengenceran DNA dengan 96 pengulangan untuk melakukan uji kuantitatif qPCR, semua nilai CT di atas 96 sumur replikasi yang diuji adalah >40.


Gambar 5 Hasil percobaan NTC

3.9.2 Sampel Kontrol Ekstraksi Negatif (NCS)

Sampel Kontrol Ekstraksi Negatif (NCS) adalah pengenceran DNA, dan pertama kali diekstraksi melalui pra-perlakuan sampel, kemudian dilakukan qPCR, semua nilai CT di atas 48 sumur replikasi yang diuji adalah >40.

Gambar 6 Bahasa Indonesia: NCS hasil percobaan

  1. 4.Referensi

4.1 Komisi Farmakope Tiongkok (ChPC). Farmakope Republik Rakyat Tiongkok (Vol Ⅲ) [S]. Beijing：China Medical Science and Technology Press，hal.542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: Prinsip Umum untuk Tinjauan Teknis Validasi Metode Analisis untuk Pengendalian Mutu Produk Biologi.

4.3 ICH(2022)《Validasi metode analisis Q2》, versi draf.

Informasi Pemesanan

Keterangan

Nomor Bagian

Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang CHO (3G)

41332ES

Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang HEK293 (3G)

41331ES

Benar Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (2G)

41307ES

Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang E.coli (2G)

41308ES

Kit Persiapan Sampel DNA Residu Magnetik MolPure®

18461ES
Kit Deteksi qPCR MycAway™ Mycoplasma (2G) 40619ES

Pertanyaan