Bakteri E.coli Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (2G)
Ringkasan Kualifikasi (Nomor Kategori: 4)tahun 1308Bahasa Inggris ES60
- Latar belakang
Data yang dirangkum dalam laporan ini dilakukan oleh
- Bahan dan metode percobaan
2.1 Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang E.coli (2G), Vendor:
2.2 Kit Persiapan Sampel DNA Residu Magnetik MolPure®, Vendor:
2.3 Standar nasional untuk kandungan DNA E.coli: Cat. 270027, Lot No.: 201101, konsentrasi: 96,2 μg/mL, kondisi penyimpanan: -70℃, dibeli dari: National Institutes for Food and Drug Control.
2.4 Data asli: versi elektronik dicatat dalam 'Laporan Eksperimental' subfile dari file induk 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G)'.
2.5 Metode: Bahan dan metode operasi yang digunakan untuk percobaan pada dasarnya diproduksi atau ditetapkan oleh
- Isi dan hasil kualifikasi
3.1 Jangkauan deteksi
Kisaran linier kit adalah 30 fg/μL~300 pg/μL dengan R2=1, dan efisiensi amplifikasi adalah 101,74% dengan CV<15% untuk setiap uji konsentrasi.
Gambar 1 Kurva Standar qPCR DNA E.coli (2G)
3.2 Akurasi
3.2.1 Penyimpangan dari Standar nasional untuk kandungan DNA E.coli
Bahan referensi DNA E.coli dalam setiap batch kit dikalibrasi menggunakan standar nasional untuk kandungan DNA E.coli.
3.2.2 Rlingkungan
3.2.2.1 Percobaan Pemulihan Spiking Sampel Kosong
Sampel standar DNA E.coli pada konsentrasi tinggi dan rendah: 300 pg/μL, 3 pg/μL, dan 30 fg/μL masing-masing disiapkan dan diuji setelah ekstraksi menggunakan Metode Manik Magnetik untuk Kit Pra-perlakuan Sampel DNA Residu (2 replikasi ekstraksi dilakukan untuk setiap sampel, dan 3 replikasi pengujian dilakukan untuk setiap ekstraksi), dan pemulihan sampel dan CV dianalisis.
Untuk berbagai konsentrasi sampel DNA, pemulihan berkisar antara 70% hingga 130%, dan CV semuanya <20%.
| Jenis sampel | Konsentrasi Teoritis | Ekstrak 1 rata-rata | Ekstrak 2 rata-rata | Konsentrasi rata-rata | Riwayat Hidup | Pemulihan |
| Sampel Kosong | / | / | / | / | / | / |
| Sampel pemulihan 1 | 300 pg/μL | 250.56 pg/μL | Nomor 262.11 pg/μL | 256.33 pg/μL | 4,41% | 85,44% |
| Sampel pemulihan 2 | 3 pg/μL | 2.29 pg/μL | 2.56 pg/μL | 2.42 pg/μL | 7,09% | 80,77% |
| Sampel pemulihan 3 | 30 fg/μL | 33.62 fg/μL | 32.61 fg/μL | 33.12 fg/μL | 14,28% | 110,39% |
Tabel 1 Pemulihan Spiking Sampel Kosong
3.2.2.2 Simulasi Percobaan Pemulihan Spiking Sampel
Sampel dengan konsentrasi yang sama (3 pg/μL DNA E.coli) diekstraksi (2 replikasi ekstraksi dilakukan untuk setiap sampel dan 3 replikasi pengujian dilakukan untuk setiap ekstraksi) dengan 5 larutan latar belakang yang berbeda (protein tinggi, asam nukleat tinggi, pH tinggi dan rendah, garam tinggi) dan pemulihan sampel dan CV dianalisis.
Pemulihan sampel DNA untuk berbagai larutan latar belakang berkisar antara 70% hingga 130%, dengan semua CV <20%.
| Jenis sampel | Konsentrasi Teoritis | Ekstrak 1 rata-rata | Ekstrak 2 rata-rata | Konsentrasi rata-rata | Riwayat Hidup | Pemulihan |
| Sampel Dasar | / | / | / | / | / | / |
| Protein Tinggi | 3 pg/μL | 2.25 | 2.23 | 2.24 | 1,09% | 74,74% |
| Asam Nuklir Tinggi | 3.93 | 3.96 | 3.95 | 1,56% | 131,52% | |
| kadar garam tinggi | 2.69 | 2.67 | 2.68 | 2.63 | 89,20% | |
| pH tinggi | 2.90 | 3.67 | 3.29 | 13,82% | 109,55% | |
| pH rendah | 2.77 | 2.87 | 2.82 | 3,41% | 94,01% |
Tabel 2 Pemulihan Spiking Sampel Dasar
3.3 Presisi
3.3.1 Kemampuan mengulang
Ulangi pengujian 10 kali untuk standar DNA E.coli pada konsentrasi 3 pg/μL dengan CV <15%.
| Pengulangan | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Berarti | Riwayat Hidup |
| Nilai Deteksi (fg/μL) | 3.16 | 2.87 | 2.97 | 2.86 | 2.81 | 2.97 | 3.14 | 3.21 | 3.14 | 3.1 | 3.02 | 4,78% |
Tabel 3 Hasil Pengulangan
3.3.2 Presisi menengah
Tiga peneliti secara independen menguji sampel standar DNA E.coli pada konsentrasi tinggi dan rendah: 300 pg/μL, 3 pg/μL, dan 30 fg/μL, dan tiga kali ulangan dilakukan untuk setiap konsentrasi, dan CV dari kesembilan data yang diperoleh adalah <15%.
| Eksp |
Konsentrasi Aktual Konsentrasi Teoritis | DNA E.coli (2G) | ||
| 300 pg/l | 3 pg/l | 30 fg/l dosis tunggal | ||
| Eksp 1 | Penentuan 1 | 295.65 | 3.22 | 26.90 |
| Penentuan 2 | 287.71 | 3.24 | 32.00 | |
| Penentuan 3 | 300.23 | 3.17 | 27.50 | |
| Eksp 2 | Penentuan 4 | 306.06 | 3.13 | pukul 37.30 |
| Penentuan 5 | 299.76 | 3.02 | 32.70 | |
| Penentuan 6 | 299.63 | 3.02 | 34.00 | |
| Eksp 3 | Penentuan 7 | 266.70 | 3.01 | 35.90 |
| Penentuan 8 | 272.89 | 3.09 | 40.70 | |
| Penentuan 9 | 276.51 | 3.01 | 35.20 | |
| / | Berarti | 289.46 | 3.10 | 33.60 |
| / | Riwayat Hidup | 4,89% | 3,02% | 13,18% |
Tabel 4 Presisi Menengah Hasil
3.4 Spesifisitas
Interferensi DNA genomik seluler yang umum digunakan dalam produksi biologik dinilai untuk interferensi dengan reagen deteksi DNA E.coli, dan kelompok interferensi tumpang tindih dengan kelompok kontrol dan tidak ada interferensi yang terlihat (gambar di bawah ini menunjukkan, secara berurutan, data interferensi DNA genomik HEK293, Vero, dan CHO dengan reagen deteksi DNA E.coli).
Gambar 2 Hasil percobaan interferensi
3.5 Batasan Kuantisasi
DNA E.coli terdeteksi pada 50 fg/μL, 40 fg/μL, 30 fg/μL, 10 fg/μL, dan 5 fg/μL, dengan 10 kali ulangan untuk setiap konsentrasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa CV <20% pada konsentrasi 30 fg/μL dan di atasnya. Artinya, batas kuantifikasi kit deteksi residu DNA sel inang E.coli (2G) adalah 30 fg/μL.
|
Pengulangan Item Uji | DNA E.coli (2G) (fg/μL) | |
| Kuantitas | Rasio Perhitungan Ulang | |
| 1 | 29.43 | 98,09% |
| 2 | 29.51 | 98,35% |
| 3 | tanggal 32.04 | 106,79% |
| 4 | tanggal 26.07 | 86,89% |
| 5 | tanggal 34.06 | 113,53% |
| 6 | 33.54 | 111,79% |
| 7 | 26.95 | 89,82% |
| 8 | 27.38 | 91,26% |
| 9 | tanggal 27.04 | 90,13% |
| 10 | Tanggal 26.10 | 87,02% |
| Berarti | 29.21 | / |
| Riwayat Hidup | 10,40% | / |
Gambar 3 Hasil Uji qPCR DNA E.coli 30fg/μL (2G)
3.6 Ketahanan
Kit ini telah diuji dan cocok untuk, namun tidak terbatas pada, instrumen berikut:
| Penjual | Model Instrumen | Efisiensi Amplifikasi | R2 | Batas kuantifikasi (fg/μL) | Riwayat Hidup |
| Termo | ABI 7500 | 101,74% | 1 | 30 | 13,30% |
| Termo | Studio Kuantitatif ABI 5 | 100,46% | 1 | 30 | 12,40% |
| Bio-Rad | CFX96 | 99,20% | 0,999 | 30 | 13,76% |
| Shanghai Hongshi | Bahasa SLAN | 100,40% | 0,999 | 30 | 11,67% |
Tabel 5 Hasil Uji Kesesuaian Instrumen
3.7 Stabilitas
3.7.1 Stabilitas beku-cair
Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang E.coli (2G) diuji melalui pembekuan dan pencairan berulang sebanyak 10 kali, dan kinerja kit tidak terpengaruh.
|
Menguji Indikator Waktu Beku-Cair | Parameter | Waktu T0 | Bekukan-cairkan 10 kali |
| Parameter Kurva Standar | Efisiensi Amplifikasi | 98,23% | 100,20% |
| R2 | 1 | 0,999 | |
| Batas kuantifikasi (30 fg/μL) | Riwayat Hidup | 15,07% | 9,66% |
Tabel 6 Analisis hasil stabilitas beku-cair
3.7.2 Stabilitas yang Dipercepat
Bahasa Indonesia: E.Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang (2G) disimpan pada suhu 2~8°C selama 30 hari dan 37°C selama 14 hari. Tidak ada kinerja kit yang terpengaruh.
|
Menguji Indikator Suhu dan Waktu Akselerasi | Parameter | Percobaan 1 | Percobaan 2 | ||
| Waktu T0 | 2~8℃ 30 Hari | Waktu T0 | 37℃ 14 Hari | ||
| Parameter Kurva Standar | Efisiensi Amplifikasi | 97,77% | 99,81% | 98,39% | 98,65% |
| R2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| Batas kuantifikasi (30 fg/μL) | Riwayat Hidup | 11,04% | 13,79% | 9,55% | 14,55% |
Tabel 7 Analisis hasil stabilitas yang dipercepat
- 4.Referensi
4.1 Komisi Farmakope Tiongkok (ChPC). Farmakope Republik Rakyat Tiongkok (Vol Ⅲ) [S]. Beijing：China Medical Science and Technology Press，hal.542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Prinsip Umum untuk Tinjauan Teknis Validasi Metode Analisis untuk Pengendalian Mutu Produk Biologi.
4.3 ICH(2022)《Validasi metode analisis Q2》, versi draf.
Informasi Pemesanan
| Keterangan | Nomor Bagian |
| 41332ES | |
| 41331ES | |
| 41307ES | |
| 41308ES | |
| 18461ES | |
| Kit Deteksi qPCR MycAway™ Mycoplasma (2G) | 40619ES |