- RT-qPCR alimentato da reverse altamente efficiente trascrittasi
La trascrittasi inversa (enzima RT) è un enzima in grado di convertire i modelli di RNA in DNA complementare (cDNA). Nella ricerca in biologia molecolare, la trascrittasi inversa è ampiamente utilizzata, in particolare svolgendo un ruolo indispensabile nel campo della diagnostica molecolare. Attraverso il processo di trascrizione inversa, il genoma di RNA dei virus può essere convertito in cDNA, che può quindi essere amplificato e rilevato utilizzando tecniche come la qPCR. Questa caratteristica consente una diagnosi accurata dei virus a RNA, come l'HIV, l'influenza A e l'influenza B.
Figura 1. Diagramma schematico del processo di trascrizione inversa
La ricerca di reagenti diagnostici molecolari RT-qPCR più rapidi, più sensibili e più facili da usare è diventata l'attuale tendenza principale dello sviluppo. Come una delle materie prime chiave nel processo RT-qPCR, la trascrittasi inversa deve possedere una velocità di trascrizione inversa più rapida, una resa di sintesi più elevata e una migliore resistenza al calore. Per ottenere una trascrittasi inversa più adatta per RT-qPCR, Yeasen ha sviluppato l'HifairTM serie di trascrittasi inverse mediante modifica genetica basata su M-MLV, caratterizzate da una minore attività RNasi H, una maggiore stabilità termica e una maggiore capacità di sintesi continua.
Figura 2. Schema dell'azione di trascrizione inversa
Hifair™Trascrittasi inversa
Yeasen ha una varietà di HifairTM trascrittasi inversa e può fornire una varietà di forme di prodotto, tra cui enzimi e premiscelati, che puoi scegliere in base alle tue effettive esigenze. La seguente tabella elenca le caratteristiche e le applicazioni consigliate delle diverse trascrittasi inverse Yeasen.
Tabella 1 Le linee guida per la selezione di Hifair™ Trascrittasi inversa| Nome del prodotto (numero del prodotto) ) | Caratteristiche del prodotto | Applicazione consigliata |
| Termicamente stabile (fino a 65°C), adatto per modelli complessi | Lampada RT | |
| Forte compatibilità, alta velocità e alta resa di sintesi | Un passo RT-PCR/qPCR |
Nota: tutti gli enzimi sopra menzionati sono disponibili in formulazioni ad alta concentrazione o senza glicerolo.
Evidenziamo ora una trascrittasi inversa utilizzata nei reagenti diagnostici molecolari RT-qPCR: HifairTM V Trascrittasi inversa. Questo enzima si distingue per la sua forte compatibilità, la sua elevata velocità e l'elevata resa di sintesi, in grado di resistere a temperature di reazione fino a 58°C. È particolarmente adatto per lo sviluppo di reagenti diagnostici molecolari RT-qPCR.
Dimostrazione delle prestazioni di Hifair™ V trascrittasi inversa
1. In grado di resistere ad una temperatura di reazione di 58°C, è adatto alla trascrizione inversa di modelli di RNA complessi.
Figura 3. La trascrittasi inversa di HifairTM V Reverse Transcriptase e il brand T* sono stati incubati rispettivamente a 55℃ e 58℃ per 30 minuti per rilevare l'attività enzimatica residua. I risultati hanno mostrato che HifairTM La trascrittasi inversa V è riuscita a mantenere il 70% di attività dopo l'incubazione a 58°C per 30 minuti, una temperatura molto più alta rispetto a quella del marchio T*.
2. Il tasso di rilevamento di RT-qPCR era migliore rispetto a quello di altri marchi,e tL'intervallo di rilevamento era 1 pg-1 μg.
Figura 4. Utilizzando 1 pg-1 μg (7 gradienti) di RNA totale delle cellule 293T come stampo, la trascrizione inversa è stata eseguita utilizzando HifairTM V digestione RT-gDNA in un unico passaggio SuperMix per qPCR (Cat#11142), V*, T*. Il cDNA ottenuto è stato analizzato quantitativamente tramite qPCR. I risultati hanno mostrato che la sensibilità di 11142ES poteva raggiungere 1 pg, il che era migliore di quella di altri marchi.
La biblioteca dei mutanti della trascrittasi inversa di Yeasen
Sììì continua a promuovere l'evoluzione della trascrittasi inversa con il suo ZymeEditorTM piattaforma. Finora abbiamo selezionato una varietà di mutanti della trascrittasi inversa con eccellenti prestazioni in diverse applicazioni, che possono soddisfare pienamente le esigenze di diversi gruppi di clienti in diversi campi di applicazione.Tabella 2. IL Guida alla selezione dei mutanti della trascrittasi inversa di Yeasen
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