Panoramica
Il DNA residuo delle cellule ospiti è un'impurità correlata al processo coinvolta nella produzione di prodotti biologici, che non solo riduce l'efficacia dei prodotti biologici, ma può anche porre problemi di sicurezza come infettività o tumorigenicità. Pertanto, le agenzie di regolamentazione in vari paesi hanno imposto limiti alla quantità di DNA residuo nei prodotti biologici.
Le attuali linee guida dell'OMS e della FDA raccomandano un DNA residuo nei prodotti finiti non superiore a 10 ng/dose, e la FDA afferma inoltre che il DNA residuo nel DNA delle cellule ospiti dei biologici non dovrebbe essere superiore a 100 pg/dose. I principi generali della Farmacopea europea stabiliscono che la maggior parte dei limiti del DNA residuo dei prodotti biologici non dovrebbe essere superiore a 10 ng/dose, ma i limiti del DNA residuo dei singoli vaccini sono più rigorosi, ad esempio, il DNA residuo nel vaccino inattivato contro l'epatite A non dovrebbe essere superiore a 100 pg/dose e che il DNA residuo nel vaccino contro l'epatite B non dovrebbe essere superiore a 10 pg/dose. L'edizione del 2020 della Farmacopea cinese, Parte III, stabilisce che il residuo di DNA nei preparati biologici prodotti su una matrice cellulare non deve superare i 100 pg/dose e che il residuo di DNA nei vaccini prodotti su una matrice batterica o fungina non deve superare i 10 ng/dose.
Inoltre, per i metodi di determinazione dei residui di DNA esogeno, le farmacopee nazionali forniscono anche raccomandazioni di orientamento. L'edizione 2017 della disposizione generale 1130 USP40-NF35 della farmacopea statunitense descrive 3 metodi per la determinazione dei residui di DNA esogeno, che sono l'ibridazione della sonda di DNA, il metodo soglia e il metodo PCR quantitativo in tempo reale. La farmacopea europea propone metodi PCR quantitativo in tempo reale e immunoenzimatici, che sono 2 metodi analitici sensibili per quantificare il DNA residuo nelle cellule ospiti. La versione 2020 della farmacopea cinese delle tre regole generali 3407 stabilisce inoltre che i metodi di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti sono l'ibridazione della sonda di DNA, la colorazione a fluorescenza e la PCR quantitativa.
Tra questi, il metodo qPCR presenta un'elevata sensibilità, specificità di sequenza e accuratezza, che può fornire un mezzo di rilevamento affidabile per l'industria biofarmaceutica nella ricerca di processo e nel controllo di qualità dei prodotti finiti, ed è ormai diventato il metodo di rilevamento preferito da ogni produttore di prodotti biologici.
Biotecnologia Yeasen Kit di rilevamento del DNA residuo
Basandosi sul principio della sonda fluorescente qPCR, Yeasen ha sviluppato una serie di kit rapidi e specializzati per la rilevazione del DNA residuo delle cellule ospiti, tra cui CHO, HEK293, E.coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris e così via. Questi kit forniscono una rilevazione specializzata e rapida dei residui di DNA in prodotti intermedi, semilavorati e finiti durante lo sviluppo e la produzione di prodotti biologici come farmaci anticorpali, prodotti per terapia cellulare e genica, farmaci proteici ricombinanti e vaccini.
Caratteristica
Alta sensibilità: sviluppato sulla base del metodo qPCR con sonda fluorescente con LLOD basso pari a 0.0,5 fg/µL;
Alta precisione: recuperi di picchi di campione nell'intervallo 70%~130%;
Elevata specificità: nessuna reattività crociata con DNA irrilevante, riducendo i falsi positivi nel rilevamento;
Conformità alle normative: completamente convalidato in conformità con Chp, USP, ICHQ2(R1) e altri requisiti, prestazioni conformi agli standard normativi cinesi e stranieri;
Collaborare con l'audit: la produzione del prodotto è conforme agli standard del sistema di qualità ISO13485, con documenti di audit perfetti.
Garantire la qualità: le materie prime dei kit sono tutte sviluppate in modo indipendente e il mix qPCR e gli altri prodotti enzimatici sono realizzati in una fabbrica enzimatica ultra-pulita.
Applicazione
Farmaci anticorpaliRilevamento delle impurità residue nelle cellule ospitiVacciniRilevamento delle impurità residue nelle cellule ospiti
Farmaci proteici ricombinantiRilevamento delle impurità residue delle cellule ospiti
Specificazione
| Programma di test e convalida | Norme o requisiti di riferimento | Nnota | |
| 1. Standard del kit (standard di riferimento) | Benchmarking rispetto agli standard nazionali o Standard preparati |
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| 2. Lnell'orecchio Rangelo | Ambito della curva standard | Fare riferimento al manuale o alla situazione reale (ad esempio 30fg/μL~300pg/μL) |
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| R2 | ≥0,98 (Kit PsYeasen≥0,99) | Requisiti per HCD nella Farmacopea Cinese Edizione 2020 3407 Disposizioni Generali | |
| Pendenza | -3,1~-3,8 (Kit PsYeasen -3.1~-3.6) | Requisiti per HCD nella Farmacopea Cinese Edizione 2020 3407 Disposizioni Generali | |
| Efficienza di amplificazione | 90%~110%（（PsPendenza corrispondente -3.1~-3.6, Requisiti all'interno del settore） |
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| 3. UNprecisione | Deviazione dallo standard nazionale del DNA | <15% |
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| Tasso di recupero del picco del campione | 50%~150% (Requisiti del settore) 70~130%） | Requisiti per HCD nella Farmacopea Cinese Edizione 2020 3407 Disposizioni Generali | |
| 4. Pprecisione | Ripetibile | Valore CV<15% |
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| Precisione intermedia | Valore CV<15% |
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| 5. Sspecialità | Nessuna interferenza con il DNA esogeno |
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| 6. Limitazione della quantificazione | livello fg/μL |
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| 7. Sstabilità | Congelamento e scongelamento ripetuti | 10 volte |
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| Stabilità in accelerazione | 2~8℃ 30 giorni, 37℃ 14 giorni |
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| Periodo di validità | -20°C conservazione per 2 anni |
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Cifre
Elevata sensibilità: LLOQ fino a 0,3 fg/µL, LLOD fino a 0,05 fg/µL.
1. L'intervallo lineare del kit di rilevamento del DNA residuo delle cellule ospiti CHO (3G) era 3fg/μL~300pg/μL, R2=1, l'efficienza di amplificazione era del 99,29% e il CV del valore di rilevamento di ciascuna concentrazione era <15%.
Figura 1. Grafico di calibrazione del DNA CHO (3G) (sinistra) e mappatura lineare della curva di amplificazione (destra)
2. Rilevare il DNA CHO (3G) al punto di concentrazione più basso del brano standardizzato a concentrazioni pari a 3fg/uL e inferiori, 10 repliche per concentrazione. I risultati hanno mostrato che a concentrazioni pari a 0,3 fg/uL e superiori, il CV era <20%, ovvero il limite di quantificazione del kit di analisi dei residui di DNA delle cellule ospiti CHO (3G) era pari a 0,3 fg/uL.
Figura 3. Risultati del test qPCR del DNA CHO (3G) da 0,05 fg/μL
Elevata specificità: nessuna reattività crociata con il DNA di altre cellule ospiti.
Valutando l'interferenza del DNA genomico di specie di topo con elevata affinità per il DNA CHO (3G) e del DNA genomico di cellule comunemente utilizzate nella produzione di prodotti biologici con il reagente di rilevamento del DNA CHO, le curve di amplificazione del gruppo di interferenza e del gruppo di controllo si sovrapponevano e non si osservava alcuna interferenza (i grafici seguenti mostrano, in ordine, i dati di interferenza del DNA genomico di topo, HEK293 ed E. coli con il reagente di rilevamento del DNA CHO).
Figura. 4.Risultati degli esperimenti di interferenza con il kit CHO DNA (3G)
Informazioni sul prodotto
| Categorizzazione | Articolo n. | Nome del prodotto | Specificazione |
| Pretrattamento del campione | 18461ES | Kit di preparazione del campione di DNA residuo magnetico MolPure® | 25T/100T |
| 18467ES | Kit di preparazione del campione MolPure® Mag48 FN | 3×16T/6×16T | |
| Strumento per l'estrazione degli acidi nucleici | 80511ES | Estrattore automatico di acidi nucleici a 48 canali | 48 Flussi |
| Rilevamento del DNA residuo | 41307ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti Vero (2G) | 50T/100T |
| 41308ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti di E. coli (2G) | 50T/100T | |
| 41310ES | Kit di rilevamento del DNA residuo SV40LTA&E1A | 50T/100T | |
| 41317ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti Hansenula polymorpha | 50T/100T | |
| 41319ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti MDCK | 50T/100T | |
| 41323ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA plasmidico | 50T/100T | |
| 41324ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti di S. cerevisiae | 50T/100T | |
| 41325ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti umane | 50T/100T | |
| 41328ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti di Pichia pastoris | 50T/100T | |
| 41330ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA di Sf9 e Baculovirus | 50T/100T | |
| 41331ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti HEK293 (3G) | 50T/100T | |
| 41332ES | Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti CHO (3G) | 50T/100T |