La trascrittasi inversa del virus della leucemia murina di Moloney (M-MLV) è una delle trascrittasi inverse comunemente utilizzate nelle procedure di laboratorio di biologia molecolare. Per ottenere una maggiore efficienza di trascrizione inversa, una migliore stabilità termica e un tasso aumentato di sintesi di cDNA, la trascrittasi inversa originale è spesso geneticamente modificata. Attualmente, i reagenti di trascrizione inversa disponibili sul mercato richiedono in genere tempi di reazione che vanno da 15 a 30 minuti, il che è relativamente lungo. Quando il numero di campioni di reazione è elevato, il tempo complessivo impiegato può aumentare notevolmente. I prodotti della serie di trascrizione inversa da 5 minuti di YESSEN possono completare il processo di trascrizione inversa in soli 5 minuti, risparmiando tempo ed essendo altamente efficienti.

Pprodotto PPosizionamento	Nome del prodotto	Gatto#
Premiscela di trascrizione inversa rapida, efficiente e ad alta resa	Alta qualità™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix per qPCR	11156ES
Premiscela di trascrizione inversa rapida, efficiente e ad alto rendimento (con rimozione di gDNA)	Alta qualità™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix per qPCR (digestore di DNA più)	11155ES
Completamento rapido in un unico passaggio della rimozione del gDNA e della premiscelazione della trascrizione inversa	Alta qualità™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix per qPCR	11151ES
Kit di trascrizione inversa rapida per la selezione di primer flessibili (con rimozione di gDNA)	Alta qualità™ Kit di sintesi del cDNA AdvanceFast 1st Strand (senza colorante)	11150ES
Kit di trascrizione inversa rapida per la selezione di primer flessibili (con rimozione di gDNA e colorante di tracciamento)	Alta qualità™ Kit di sintesi del cDNA AdvanceFast 1st Strand	11149ES

Raccomandazione boutique uno

Premiscela di trascrizione inversa rapida, efficiente e ad alta resa (con rimozione di gDNA) (Cat. n. 11155ES)

Elevata resa di trascrizione inversa da diversi modelli

Campione	293T Cella	Arabidopsis thaliana	Topo	Fegato di pesce
11155ES	23.4↓	19.6↓	24.9↓	21.1↓
Marchio A	24.9	21.3	27.5	21.3
Marchio B	26.1	20.5	27.1	23.1
Marchio C	25.7	19.8	27.3	21.9
Marchio D	24.3	21.3	28.1	24.5

Figura. La trascrizione inversa è stata eseguita utilizzando modelli di RNA da cellule umane 293T, Arabidopsis thaliana, fegato di topo e fegato di pesce. I marchi A, B, C e D sono tutti reagenti di trascrizione inversa con digestione in due fasi con tempi di trascrizione inversa variabili da 15 a 20 minuti. I risultati del test mostrano che il kit di trascrizione inversa da 5 minuti Hifair 11155ES eccelle con rese più elevate rispetto ad altri marchi e i valori Ct sono inferiori.

Raccomandazione boutique due

Digestione in un unico passaggio in 5 minuti e premiscela di trascrizione inversa (Cat. n. 11151ES)

Elevata resa di trascrizione inversa

Figura. Utilizzando l'RNA delle cellule umane 293T come modello, sono stati testati rispettivamente tre geni. I marchi A, B e C sono tutti reagenti di rimozione gDNA e trascrizione inversa in un unico passaggio. I risultati del test mostrano che con un input di 1 μg e 10 ng di RNA totale, la resa della trascrizione inversa con il kit 11151ES è superiore ad altri marchi, con valori Ct inferiori.

Figura. Utilizzando l'RNA di Arabidopsis thaliana come modello, i marchi A, B e C sono tutti reagenti di rimozione gDNA e trascrizione inversa in un unico passaggio. I risultati del test mostrano che con un input di 1 μg e 10 ng di RNA totale, la resa della trascrizione inversa con il kit 11151ES è superiore ad altri marchi, con valori Ct inferiori.

Ottima sensibilità

Figura. Utilizzando l'RNA delle cellule umane 293T come stampo, sono stati amplificati geni con contenuto di GC al 30%, GC al 50%, GC al 60% e GC al 70%. Sono stati utilizzati input di RNA totali di 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng e 1 μg per la trascrizione inversa seguita da rilevamento quantitativo fluorescente. I risultati mostrano che 11151ES può ospitare la trascrizione inversa per input di RNA che vanno da 100 pg a 1 μg.

Raccomandazione boutique Ttre

Kit di trascrizione inversa rapida in 5 minuti (Gatto n. 11149/11150ES)

Elevata sensibilità, con un limite minimo di rilevamento fino a 10 pg

Figura. Utilizzando l'RNA totale delle cellule 293T come modello, è stata eseguita la trascrizione inversa con 11149ES e il cDNA risultante è stato sottoposto ad analisi quantitativa qPCR. I risultati mostrano che 11149ES può trascrivere inversamente con successo input di RNA che vanno da 10 pg a 1 μg, garantendo risultati quantitativi accurati.

Buone prestazioni di amplificazione, con l'amplificazione più lunga di un frammento di 14 kb

Figura.Utilizzando l'RNA totale delle cellule 293T come stampo, è stata eseguita la trascrizione inversa con 11149ES e il cDNA risultante è stato sottoposto a rilevamento tramite PCR. I risultati indicano che 11149ES è in grado di sintetizzare frammenti di cDNA di lunghezza compresa tra 1 kb e 14 kb, con PCR successiva che presenta determinati scenari applicabili. Se è richiesta la trascrizione inversa diretta di frammenti di lunghezza superiore a 10 kb, si consiglia di estendere il tempo di trascrizione inversa a 20-30 minuti per garantire l'acquisizione dei frammenti finali.

Confronto dell'efficienza della trascrizione inversa

Quantità di input di RNA	Valore Ct
	11149ES	Marchio A
1 μg	15.2	15.5
100 ng	18.0	18.5
10 ng	21	21.7
1 ng	24.5	25.1
100 pag.	29.1	29.7
10 pag.	32.7	34.3

Figura. Utilizzando l'RNA totale delle cellule 293T come modello, è stata eseguita la trascrizione inversa con 11149ES e Brand A, con 11149ES che non ha subito la fase di rimozione del gDNA. Il cDNA risultante è stato sottoposto ad analisi quantitativa qPCR. I risultati mostrano che il tempo di trascrizione inversa per Brand A è stato di 13 minuti, mentre per 11149ES è stato di 5 minuti. L'analisi quantitativa di diversi prodotti rivela che i valori Ct per 11149ES sono inferiori o simili a quelli del marchio concorrente, indicando che l'efficienza di trascrizione inversa di 5 minuti di 11149ES è superiore o approssimativamente equivalente a quella di Brand A.

Quantità di input di RNA	Valore Ct
	11149ES	Marchio B
1 μg	16.2	17.4
100 ng	19.0	20.5
10 ng	22	23.8
1 ng	26	27.9
100 pag.	31.4	33.2
10 pag.	32.9	35.6

Figura.Utilizzando l'RNA totale delle cellule 293T come modello, è stata eseguita la trascrizione inversa con 11149ES e Brand B, con 11149ES che non ha subito la fase di rimozione del gDNA. Il cDNA risultante è stato sottoposto ad analisi quantitativa qPCR. I risultati mostrano che il tempo di trascrizione inversa per Brand B è stato di 20 minuti, mentre per 11149ES è stato di 5 minuti. L'analisi quantitativa di diverse quantità di substrato rivela che i valori Ct per 11149ES sono più piccoli o simili a quelli di Brand B, indicando che l'efficienza di trascrizione inversa di 5 minuti di 11149ES è superiore o approssimativamente equivalente a quella di Brand B.

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