第1章 PCR技術
1.1 PCRの原理
PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）またはポリメラーゼ連鎖反応は、 DNAの親鎖をテンプレートとして特定のプライマーを用いてDNAポリメラーゼが触媒する反応を指します。 出発点の延長のために、dNTP、Mg 2+および 拡張因子、増幅増強 因子。変性、アニーリング、伸長のステップを通じて、 娘鎖の in vitro 複製は親鎖テンプレート DNA と相補的であり、in vitro で任意の標的 DNA を迅速かつ特異的に増幅できます。
1.2 DNAポリメラーゼの分類
DNAポリメラーゼは、 DNAの細胞複製に重要な酵素です。熱安定性、合成能力、速度、忠実度、特異性に応じて、Taq DNAポリメラーゼ、高忠実度DNAポリメラーゼ、ホットスタートDNAポリメラーゼ、直接拡張DNAポリメラーゼ、長断片化DNAポリメラーゼに分類できます。 酵素、高速 DNA ポリメラーゼ、多重 DNA ポリメラーゼなど。
最も一般的なのはTaq DNAポリメラーゼであり、5'→3'末端にポリメラーゼ活性を持ち、 5'→3'末端にエキソヌクレアーゼ活性を持つが、 3'→5'末端修正活性。Taqの最も重要な特徴は耐熱性に優れていることで、 PCRの熱変性段階に耐えることができ、プロセスの途中で酵素を追加する必要がありません。ただし、Taqは校正活性がないため、忠実度は低いです。忠実度は主にマグネシウムイオンとdNTPの濃度と比率によって達成されます。
高忠実度 DNA ポリメラーゼには重合中心と切断中心が含まれており、重合中心には 5'→3' DNA ポリメラーゼ活性があり、 5'→3' 方向に沿ってDNA の合成を触媒できます。切断中心には 3'→5' エキソヌクレアーゼ活性があり、塩基の不一致の修復を実行できます。したがって、Taq DNA ポリメラーゼの特性に加えて、高忠実度 DNA ポリメラーゼには修正活性もあり、不一致のヌクレオチドを除去する役割を果たし、製品の精度を保証します。
上の図はDNAポリメラーゼがどのように働くかを示しています[1] 。
ダイレクトPCR（Direct PCR）は、 PCR増幅に未精製サンプルを使用し、直接増幅に動物または植物組織を使用する反応です。現在、
上の図はダイレクトPCR技術を示しています。
A.直接法: 少量のサンプルを採取し、 PCR 識別のために PCR マスター ミックスに直接追加します。
B. 溶解法：サンプルを採取した後、それを溶解溶液に加えてゲノムを放出し、溶解上清を少量採取してPCRマスターミックスに加えてPCR識別を行います。
1.3 よくある質問と解決策
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トラブル |
理由 |
解決 |
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増幅バンドなし |
電気泳動システムの問題 |
核酸色素、ゲル濃度、電気泳動バッファーのトラブルシューティングを行います。 |
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不正確な変性温度 |
PCR 装置の表示温度は実際の温度と一致していますか? 温度が高すぎると、酵素は最初の数サイクルで急速に反応し、温度が低すぎると、テンプレートの変性が完了しません。 |
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反応系におけるプロテアーゼおよびヌクレアーゼの汚染 |
Taq 酵素を添加する前に、反応システムを 95°C で 5 ～ 10 分間加熱する必要があります。 |
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プライマーエラー |
プライマーの特異性をチェックするか、BLAST を使用してプライマーを再設計します。 |
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テンプレートに不純物が含まれています |
特に、ホルムアルデヒド固定およびパラフィン包埋組織にはギ酸が含まれていることが多く、DNA の脱プリン化を引き起こし、PCR の結果に影響を与えます。 |
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プライマーの劣化と故障 |
合成プライマーが正しいか、精製されているか、または不適切な保管条件により不活性化されていないかを確認します。 |
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PCR産物の量が少ない |
不適切なアニール温度 |
2 度の勾配でアニーリング温度を最適化するために、グラジエント PCR 反応が設計されました。 |
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DNAテンプレート内の阻害剤の存在 |
DNA テンプレートがクリーンであることを確認してください。 |
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長期にわたる変性 |
変性が長引くと DNA ポリメラーゼが不活性化されます。 |
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延長が短すぎます |
延長時間が短すぎます。1kb/分を原則として延長時間を設定してください。 |
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DNAテンプレートの量が少なすぎる |
DNAテンプレートの量を増やします。 |
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プライマーの量が不足している |
システム内のプライマー含有量を増やします。 |
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PCRサイクル数が不十分 |
反応サイクルの数を増やします。 |
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複数のバンド |
プライマーの特異性が低い |
プライマーの特異性を確認したりプライマーを再設計したりするために、BLAST や Primer などのプライマー設計ソフトウェアが利用されました。 |
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ループ数が多すぎる |
テンプレートの量を適切に増やし、サイクル数を減らします。 |
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外因性DNA汚染 |
クリーンな操作を保証します。 |
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テンプレートが多すぎる |
プラスミド DNA の量は 50 ng 未満、ゲノム DNA の量は 200 ng 未満である必要があります。 |
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プライマーが多すぎる |
反応システム内のプライマーの量を減らします。 |
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反応溶液が十分に混合されていない |
反応バッファーが完全に溶けて、よく混ざっていることを確認してください。 |
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Mg高濃度 |
使用するMgの濃度を適切に調整してください。 |
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酵素の投与量が多い、または酵素の品質が悪い |
酵素の量を減らすか、別の酵素に置き換えてください。 |
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低いアニール温度、長いアニールおよび延長時間 |
アニーリング温度を上げて変性時間と伸長時間を短縮するか、アニーリング温度を最適化するためにグラジエント PCR 反応を設計します。 |
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PCRミックス自体の問題 |
PCR プレミックスの場合は、試薬自体の品質に問題がある可能性がありますので、ロットまたは他のブランドに変更することをお勧めします。 |
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サイズが間違っています |
汚染 |
新しい試薬とチップを使用してベンチを清掃します。 |
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テンプレートやプライマーの誤った使用 |
プライマーとテンプレートを交換します。 |
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遺伝子型 |
研究対象の遺伝子に対して配列解析と BLAST 研究が行われた。 |
第2章 核酸電気泳動
2.1 核酸電気泳動の原理
電界の作用下で荷電粒子が電気的性質と反対の電極に向かって移動する現象を電気泳動といいます。電界内の荷電粒子を利用して 異なる速度で移動し、分離を達成する技術は電気泳動と呼ばれます。核酸電気泳動は、核酸研究のための重要なツールであり、核酸プローブ、核酸増幅、配列分析などの技術に不可欠な部分です。核酸電気泳動は通常、アガロースゲルまたはポリアクリルアミドゲルで行われます。 アガロースとポリアクリルアミドは、異なる分子ふるいメッシュサイズのゲルを形成でき、これを使用して異なる分子量の核酸断片を分離できます。
2.2 アガロースゲル電気泳動
アガロースは海藻から抽出された線状ポリマーです。アガロースは緩衝液で加熱され、透明なゾルに溶解します。その後、ゼラチンの型に注がれ、固まってゲルと呼ばれる固体マトリックスを形成します。ゲルの密度はアガロースの濃度によって異なります。
アガロース ゲル電気泳動は、アガロースを支持媒体として使用する電気泳動法の一種であり、分析原理と他の支持電気泳動との主な違いは、二重の役割を果たすことです。 「分子ふるい」と「電気泳動」の ジェルは 電界、 下 の行動 電界により、荷電核酸は ポジティブ ポール を通して メッシュ の の ジェル。 の割合 移住は、 核酸分子、アガロース濃度、印加電圧、電界、電気泳動緩衝液、および埋め込まれた色素の量。適切な時間の電気泳動が行われた後、 異なる条件では、異なるサイズと構造を持つ核酸断片がゲル上の異なる位置に配置され、分離の目的が達成されます。アガロースゲルの分離 範囲が広く、DNA切断ゲルの回収、DNA分離によく使用され、DNAが組み換え、プラスミドなどであるかどうかを確認するために使用されます。プラスミドが切断されているかどうかに関係なく、異なる濃度のアガロースゲルから200bpから50kbの長さのDNA断片を分離できます。
2.3 実験方法
制作 のり
1%濃度を例にとると、アガロース1gを量り、250mlの三角フラスコに注ぎ、0.5×TBE電気泳動緩衝液100mlを加えてよく混ぜ、電子レンジで沸騰させてから60℃程度まで風乾し、適量の核酸染料を加えてよく振ってから、用意しておいた清潔なゲルプレートに注ぎ、両手でコームを取り、ゲル溶液に垂直に挿入し、 ジェルが完全に固まるまで自然に冷却します（25〜30分）。
接着剤を作るための櫛を外す
ゲルを慎重に電気泳動タンクに移し（ゲルトレイごと、またはゲルのみ）、サンプルウェル側を負極に置き、ゲルが約1 mm下になるまで0.5×TBE電気泳動バッファーを加えます。
サンプルを追加
DNAサンプルに10×ローディングバッファー（ローディングバッファー）を加え、よく混ぜ合わせた後、ピペットガンでサンプル混合物をサブマージしたゲルウェルにゆっくりと加え、ウェルあたり5～10μLのサンプルを加えます（40μL以下）。通常、最初のウェルにはDNAマーカーを入れ、2番目のウェルには陽性コントロール（定義されたDNA ）を入れ、 3番目は陰性対照（試薬または水）で、サンプルの順序を記録する必要があります。
電気泳動
カバーする 電気泳動タンクに配線を接続し、電源を入れ、電気泳動電圧、電流を設定します。 そして時間 パラメータ。一般的に、電圧は5 V/cm（長さは電気泳動タンクの正極と負極の間の距離を指します）を超えてはなりません。 電気泳動時間は通常15〜30分です。
電気泳動の終了
取り除く の ゲル（ゲルトレイなし）をUVイメージングシステムで撮影して鮮明な電気泳動画像を取得し、その後電気泳動画像を編集します。 画像編集ソフトウェアを使用して、サンプル情報、日付、オペレーターをラベル付けします。
2.4 よくある質問と解決策
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トラブル |
理由 |
解決 |
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ターゲットバンドがありません |
小さなDNAがゲルからなくなる |
電気泳動時間を短くし、電圧を下げ、ゲル濃度を上げます。 |
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分子量が類似したサイズのDNAバンドは簡単には区別できない |
最適なゲル濃度に合わせて電気泳動時間を長くします。 |
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ターゲットフラグメントは従来の電気泳動には大きすぎます。 |
パルスゲル電気泳動で分析しました。 |
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目的のないクリップ |
PCR プロセスに欠陥があり、目的の産物が増幅されませんでした。 |
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ぼやけたDNAバンド |
古くなった電気泳動バッファー |
電気泳動バッファーを何度も使用すると、イオン強度が低下し、PH値がゆっくりと上昇し、洗浄力が弱まり、電気泳動効果に影響を与えるため、電気泳動バッファーを頻繁に交換することをお勧めします。 |
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DNAの劣化 |
ヌクレアーゼの汚染を避けてください。 |
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使用された電気泳動条件は電気泳動に適していない |
電気泳動電圧は 20V/cm を超えてはならず、温度は 30°C 未満である必要があります。巨大な DNA 鎖の電気泳動温度は 15°C 未満である必要があります。使用する電気泳動バッファーに十分な緩衝能力があるかどうかを確認してください。 |
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過剰なDNAサンプル |
ゲルにアップサンプリングする DNA の量を減らします。 |
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DNAサンプルは塩辛すぎる |
電気泳動の前にエタノール沈殿によって余分な塩を除去しました。 |
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タンパク質汚染 |
電気泳動前のフェノール抽出によりタンパク質を除去します。 |
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サンプル濃度が高すぎる |
上部サンプルの濃度は 500 ng/ウェル未満である必要があります。濃度が高すぎると、電気泳動の速度や流れに影響し、引きずりやぼやけが生じます。 |
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バンドが弱い、またはバンドがない |
DNAのサンプルサイズが不十分 |
DNAの取り込み量の増加 |
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DNAの劣化 |
DNAのヌクレアーゼ汚染を避ける |
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核酸色素に適さない光源 |
核酸染料の説明書に従って適切な波長の光源を選択してください。 |
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バンドが分離されていない |
時間が足りない |
電気泳動時間を延長する |
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ゲル濃度が正しくありません |
接着剤の濃度が高すぎるため、分離に対する抵抗が大きくなりすぎます。 |
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サンプル中の塩イオン濃度が高すぎる |
塩イオンの濃度が高いと電気泳動抵抗が増加し、バンドの分離が妨げられます（例：エンドヌクレアーゼ緩衝液を含む消化サンプル）。 |
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非特異的バンド |
RNA汚染 |
サンプルの再準備 |
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サンプル間の汚染 |
充填中にチップを交換し、容量が 40 μl を超えるサンプルのこぼれを防ぎます。 |
2.5 ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ポリアクリルアミドゲルは、アクリルアミドモノマー、連鎖重合触媒 N,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミン (TEMED) および過硫酸アンモニウム、および架橋剤 N,N'-メチレンビスアクリルアミドの化学反応によって形成されます。アクリルアミドモノマーは触媒の存在下で重合して長い鎖を形成し、これが架橋剤によって架橋されてゲルを形成します。ゲルの細孔サイズは鎖長と架橋度によって決まります。細孔サイズは鎖長と架橋度によって決まります。鎖長はアクリルアミドの濃度に依存し、ポリマーの架橋度はアクリルアミドと架橋剤の比率を調整することで変更できます。
ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、電気泳動したサンプルの電荷、分子サイズ、形状の違いに基づいてサンプルを分離するために使用できます。分子ふるいと静電を組み合わせ、アガロースゲル電気泳動よりも高い分解能を備えています。1ヌクレオチドだけ異なるDNA断片を分離できます。
ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、長さが 1 kb 未満の DNA 断片を分析および準備するために使用されます。分離する核酸断片のサイズに応じて、異なるゲルを準備できます。
アクリルアミドと DNA のさまざまな濃度に対する有効な分離範囲を以下の表に示します。
|
濃度 （％） |
有効分離範囲（bp） |
|
3.5 |
100から2000 |
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5 |
80から500 |
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8 |
60から400 |
|
12 |
40から200 |
|
15 |
25から150 |
|
20 |
10から100 |
2.4 関連製品の選択ガイドライン
従来のPCR |
||||
| 仕様 | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| 増幅長 | ≤10 -15 キロバイト | ≤5kb | ≤5kb | ≤4kb |
| 延長時間 | 1～10秒/kb | 30秒/KB | 30秒/KB | 30秒/KB |
| 製品エンド構造 | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| アニーリング温度 | 60℃ | 温度-(2~5)℃ | 温度-(2~5)℃ | 温度-(2~5)℃ |
| GC 互換性範囲 | 30～70% | 40～70% | 40～70% | 30～70% |
| 5'-3' エキソヌクレアーゼ活性 | 現在 | 現在 | 現在 | 現在 |
| コロニーPCR | 適切な | 適切な | 適切な | 適切な |
| 遺伝子同定 | 適切な | 適切な | 適切な | 適切な |
| マルチプレックスPCR | 不適切 | 不適切 | 不適切 | 3-4プレックスPCR |
| 電気泳動インジケーター | 紫赤 | 青 | 無色 | 青 |
| ホットスタート | ホットスタート | ホットスタートではない | ホットスタートではない | ホットスタート |
| プレミックス/キット | プレミックス | プレミックス | プレミックス | プレミックス |
ダイレクトPCR |
||||
| 仕様 | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| 製品タイプ | マウス直接増幅 | 血液直接増幅 | 植物直接増幅 | |
| 増幅長 | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb | |
| 延長時間 | 30秒/kb | ≤2 kbの場合は3-5 s/kb、 | 60秒/kb | |
| ≤8kbの場合は10秒/kb | ||||
| サンプル溶解時間 | 15分 | 0～3分 | 0～10分 | |
| 製品エンド構造 | ブラントエンド | ブラントエンド | ブラントエンド | |
| アニーリング温度 | 温度-(2~5) ℃ | 温度-(1~2) ℃ | 温度-(2~5) ℃ | |
| GC 互換性範囲 | 30～70% | 30～75% | 40～65% | |
| 5'-3' エキソヌクレアーゼ活性 | √ | √ | √ | |
| 遺伝子同定 | √ | √ | √ | |
| マルチプレックスPCR | 3-4 プレックス | |||
| 直接サンプル増幅 | √ | √ | √ | |
| 電気泳動インジケーター | 青 | 無色 | 青 | |
| ホットスタート | √ | √ | √ | |
| プレミックス/キット | キット（ミックス付き） | キット（ミックス＋バッファー付き） | キット（ミックス付き） | |
| 適切な生物 | マウス、ラット | 人間、ネズミ、ヤギ、鶏、豚など。 | 米、トウモロコシ、タバコ、菜種、小麦、大豆など | |
| 適切な組織/材料 | 尾、耳、足指（筋肉を含む）、その他の臓器 | EDTA、ヘパリン、クエン酸などを添加した新鮮血液、冷蔵（冷凍）血液、市販の乾燥血液スポット | 若い葉、古い葉、苗、若い茎 | |
| サンプル入力 | 組織: 5-10 mg; 尾: 1-5 mm | 全血: 0.5%-20%、 乾燥血液斑点：1 mm² | 葉：1～10 mm、種子：1～3 mm | |
高忠実度PCR |
||||
| 仕様 | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| 増幅長 | ≤10 kb gDNA、≤10 kb cDNA、≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA、≤10 kb cDNA、≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA、≤10 kb cDNA、≤13 kb λDNA | |
| 延長時間 | 5秒/KB | 30秒/KB | 30秒/KB | |
| フィデリティ（Taq） | 83× | 83× | 83× | |
| 製品エンド構造 | ブラントエンド | ブラントエンド | ブラントエンド | |
| アニーリング温度 | 60 ℃ | 68 ℃ | 68 ℃ | |
| GC 互換性範囲 | 20～80% | 30～60% | 30～60% | |
| 5'-3' エキソヌクレアーゼ活性 | 不在 | 不在 | 不在 | |
| 電気泳動インジケーター | 青 | 無色 | 青 | |
| 単一酵素/プレミックス | プレミックス | 単一酵素 | プレミックス | |
| 許容範囲 | / | / | 血液、マウス組織溶解物 | |
核酸電気泳動 |
||||
| 製品カテゴリー | 猫NO. | 製品名 | 応用 | |
| アガロース | 10208ES | アガロース | 通常の核酸電気泳動 | |
| 10221ES | 高ふるいアガロース（PCRグレード） | 20bp～800bpのDNA断片の分離に適しており、ポリアクリルアミドゲルに匹敵します。 | ||
| 10226ES | アガロース錠（0.5g/錠） | 日常的なアガロースアプリケーションに便利 | ||
| 核酸色素 | 10202ES | YeaRed 核酸ゲル染色液（水中 10,000 倍） | 水溶性で、EBと同様のスペクトル特性を持ち、300 nmの紫外線で励起可能 | |
| DNAマーカー | 10510ES | ゴールドバンド 1 kb DNA ラダー | 250-12000 bp（13バンド） | |
| 10515ES | ゴールドバンド 50 bp DNA ラダー | 50-1000 bp（14バンド） | ||
| 10507ES | ゴールドバンド 100bp DNA ラダー | 100-1500 bp（12バンド） | ||
| 10516ES | ゴールドバンド 100 bp プラス DNA ラダー | 100-3000 bp（14バンド） | ||
| 10517ES | ゴールドバンド 200 bp DNA ラダー | 200-5000 bp（12バンド） | ||
| 10518ES | ゴールドバンド 500 bp DNA ラダー | 500-5000 bp（8バンド） | ||
| 10501ES | GoldBand DL2000 DNAマーカー | 100-2000 bp（6バンド） | ||
| 10504ES | GoldBand DL5000 DNAマーカー | 100-5000 bp（9バンド） | ||
| 10505ES | GoldBand DL10,000 DNAマーカー | 100-10000 bp（10バンド） | ||
| 10511ES | GoldBand フルスケール DNA ラダー | 100-12000 bp（20バンド） | ||
| 10512ES | GoldBand DL15000 DNAマーカー | 250-15000 bp（7バンド） |
2.5 核酸電気泳動製品を使用した出版物（一部）
[1] Luo J、Yang Q、Zhang X、et al. TFPIは、超毒性系統2 C. difficile由来のTcdBに対する結腸陰窩受容体である。Cell . 2022;185(6):980-994 . e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N、Chen H、Gong H、et al。SeHed、ストレス誘発性過酸化水素除去特性と抗老化効果を持つ新規遺伝子発現システム。シグナル伝達と標的療法。2022、7、235。doi： 10.1038 / s41392-022-01047-2。（IF：38.1）
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. マイクロペプチドPACMP阻害はCtIPおよびポリ(ADP-リボシル)化を減少させることにより合成致死効果を誘発する。mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF: 17.970)
[4] Zhu M, DaiX.大腸菌における(p)ppGppレベルの変化による成長抑制は、最適でない資源配分の結果である。Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10. 1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM、Zhimin L、HarsonowatiW、et al。収穫後のパッションフルーツ（Passiflora edulis）の腐敗を制御するための真菌病原体の同定とマルチオミクス比較経路解析により、紫色の品種は黄色の栽培品種よりも病原体に対する耐性が高いことが明らかになりました。j Fungi（Basel）。2021;7（10）：879。2021年10月19日発行。doi：10.3390 / jof 7100879 (IF:5.816)
[6] LiT、Zhou B、Luo Z、et al。SARS -CoV-2変異体に対して幅広い活性を持つ中和ナノボディの構造特性。Front Microbiol。2022;13:875840。2022年6月2日発行。doi：10.3389 / fmicb.2022。875840 (IF:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1はColletotrichum gloeosporioidesのメラニン生合成と病原性に必須である。pathogens. 2020;9(2) :141. 2020年2月20日発行。doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. 2020年2月20日発行。doi:10. 3390/pathogens9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y、LiX、Zhang H、Zou F、Shen B.デルタメトリン感受性および耐性菌におけるCircRNA発現プロファイル
pipiens Pallen（双翅目：Culicidae）。 Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol。 2022;261:110750。 doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX.大腸菌における(p)ppGppレベルの変化による増殖抑制は非最適な資源配分に起因する[J]。核酸研究、2019、47(9): 4684-4693。(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. セレノシステイン特異的質量分析により組織特異的なセレノプロテオームと候補セレノプロテインが明らかに[J ]. Cell chemical biology, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 PCR産物を使用した出版物（一部）
[1] 王勇、 フー Z、 リックス、 ら その他。 細胞質 DNAセンシング による く 複雑な で 老齢 CD4+T 細胞 増強する T 細胞 アクティバ tion そして 老化に関連する 自己免疫 炎症。 免疫. 2021;54(4):632-647.e9. 土井:10.1016/j.immu
2021.02.003(IF:31.745) 日付:
[2] ヤン・X、 ガオ F、 張 W、 ら その他。 "星" miR-34a そして CXCR4 敵対者 ベース ナノプレックス バイナリy 協力的な 移民扱い に対して 転移性 胸 がん。J コントロール リリース。2020;326:615-627。 doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] チャオ・イー デュ J、 ゲ R、 ら アル.A サンプル そして 検出 マイクロニードル パッチ のために 乾癬 マイクロRNA バイオマーカー
分析 で インタースティシャル 液体。アナル 化学2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] リン Q、イェX、 黄 Z、 ら その他。 グラフェン 酸化物ベース 抑制 の 非特異性 で ループ媒介 等位 増幅不良 敏感な人を可能にする 検出 シクロオキシゲナーゼ-2 mRNA で 大腸 がん. 肛門化学. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/ acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] リン Q、 黄 Z、イェX、 ら その他。 ラボ で 1つの チューブ： 分離、 抽出、 そして 外的である 増幅 検出 の エクソソーム 長さ 非コーディング RNA 胃の 癌。タランタ。 2021;225:122090。
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] 劉 C、 ゾウ G、 ら 5-ホルミルウラシル として 1つの 多機能 建物 ブロック で バイオセンサー デザイン[J]. Angew 化学 中級 エド Engl. 2018年7月26日;57(31):9689-9693.（IF （11.992）
[7] 王 M、 張 S、 鄭 G、 ら その他。 機能獲得 突然変異 カード14 導く 自発的 乾癬のような 肌 炎症は 強化 ケラチノサイト への応答 IL-17A。 免疫. 2018;49(1):66-79.e5.
土井:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19 .734)
[8] 張勇、 ディン H、王X、 ら その他。 MK2 促進する Tfcp2l1 劣化 経由 β-TrCP ユビキチン ligase に 規制する ねずみ 胚幹 細胞の自己再生。 細胞 報告2021;37(5):109949. 土井:10.1016/j.cellrep.202 1.109949 (IF:9.423)
[9] リン Q、イェX、ヤン B、 ら その他。 リアルタイム 蛍光 ループ媒介 等温 増幅 分析 のために 急速な そして センシティブ 検出 連鎖球菌 gallolyticus 亜種。 ガロライトicus 関連する 大腸 癌[J]。
分析的 そして バイオ分析 化学、 2019、411(26): 6877-6887.（IF6.35）
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引用:
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