배경 – ROS란 무엇인가
반응성 산소종(ROS)은 과산화물, 초과산화물, 히드록실 라디칼, 싱글렛 산소, α-산소 등을 포함한 산소 함유 생리활성 분자로 세포 대사의 정상적인 산물입니다. 세포 신호 전달 경로와 전사, 예를 들어 세포 사멸, 자가포식, 노화, 암 등에 중요한 조절 역할을 합니다.
세포에 대한 ROS 농도의 영향 - 왜 ROS를 감지하는가?
낮은 수준의 활성산소종에서 ROS는 "산화환원 전달자"로서 세포 내 신호 전달 및 조절에 관여합니다. 그러나 환경적 스트레스(예: 이온화 방사선, 열 노출, 자외선, 저산소증 등) 하에서는 ROS 수치가 극적으로 증가하여 DNA 손상을 일으키고, 유전자 발현을 억제하고, 단백질 오접힘을 일으키고, 심지어 단백질 합성에 영향을 미쳐 세포 구조에 심각한 손상을 일으킬 수 있으며, 이를 산화 스트레스라고 합니다.
ROS 수치가 내인성 항산화 방어력을 초과하면 산화환원 균형이 깨지고 DNA, 지질, 단백질의 구조적 또는 형태적 변화가 일어나고 궁극적으로 세포가 죽게 됩니다.
ROS 수준은 정상적인 생리적 기능과 환경적 요인에 의해 발생하는 세포 손상의 중요한 신호이며, 세포 내 ROS 수준의 검출은 일부 약물의 신호 전달 경로와 잠재적 작용 메커니즘을 이해하는 데 매우 중요합니다. 따라서 ROS 검출을 위한 적절한 프로브의 선택은 질병 메커니즘 연구 및 약물 스크리닝에서 중요한 역할을 합니다.
ROS 감지는 어떻게 작동하나요?
반응성 산소종 검정 키트 (CAT# 50101ES01)는 형광염료 DCFH-DA(2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate)의 형광 강도 변화를 기반으로 세포 내 반응성 산소종 수준을 정량화하는 데 가장 일반적으로 사용되는 방법입니다.
DCFH-DA 자체는 형광이 없고 세포막을 자유롭게 통과할 수 있으며, 세포에 들어간 후 세포 내 에스테라제에 의해 가수분해되어 DCFH를 생성할 수 있습니다. 그러나 DCFH는 세포막을 통과할 수 없으므로 프로브가 세포 내에서 표지되고 응집되기 쉽습니다. 세포 내 활성 산소종은 비형광 DCFH를 산화시켜 형광 DCF를 형성할 수 있습니다. DCF 녹색 형광의 강도는 세포 내 활성 산소종의 수준에 직접 비례하며, 세포 내 활성 산소종의 수준은 DCF의 형광을 감지하여 알 수 있습니다.
여기 파장 488 nm, 방출 파장 525 nm의 조건에서 DCF 형광을 형광현미경, 레이저 공초점 현미경, 형광 분광기, 형광 마이크로플레이트 리더, 유세포 분석기 등을 이용하여 검출하여 세포 내 활성 산소종의 수준을 확인하였다.
본 제품을 사용하는 고객이 게시한 문헌(일부 예시)
2022년 9월 현재, ROS 반응성 산소종 검출 키트(50101ES01)에 총 164편의 논문이 게재되었으며, 총 영향 인자는 913.72입니다.
ROS 생성이 대식세포 분극 및 종양 세포 사멸에 미치는 영향 （PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
자주 묻는 질문
Q1: ROS 테스트에 적합한 샘플은 무엇입니까?
A1: 일반적으로 포유류 세포의 검출에 사용되며 살아있는 세포나 생체 내에서 활성 산소종을 검출하는 데만 적합합니다.
질문 2: ROS 검사 키트는 혈청이나 혈장에서 검출하는 데 적합합니까?
A2: 혈청이나 조직 균질물에서 ROS를 검출하는 데 적합하지 않습니다. 신선한 조직으로 준비한 단일 세포 현탁액을 시도할 수 있습니다.
Q3: 식물이나 박테리아를 감지할 수 있나요?
A3: 산소의 하이드록실 라디칼과 슈퍼옥사이드 라디칼의 반감기가 매우 짧기 때문에 살아있는 세포나 생체 내에서 활성 산소 종을 검출하는 데만 적합하며, 살아있는 세포만 검출하는 데 적합합니다. 원형질체를 제조한 후 검출에 사용할 수 있는 식물이나 박테리아는 이 키트로 생체 내에서 ROS를 검출할 수 없습니다.
Q4: 과도한 형광 배경을 어떻게 피할 수 있나요?
A4: 프로브 배양 후, 세포에 들어가지 않은 남아 있는 프로브를 모두 씻어내세요.
Q5: 정상 세포에서 ROS의 양을 감지할 수 있나요?
A5: 정상세포에는 활성산소의 함량이 매우 낮아 검출효과가 그다지 좋지 않을 수 있습니다.
Q6: 음성 및 양성 형광 값이 같은데, 무슨 일인가요?
A6: 프로브 농도가 너무 높으면 발생할 수 있습니다. 프로브 농도를 5~7.5 μM까지 낮추고 배양 시간을 15~20분으로 줄이는 것이 좋습니다.
Q7: 양성 대조군의 형광이 약한데, 무슨 문제인가요?
A7: 양성 대조군인 Rosup은 일반적으로 100 μM으로 농축되었으며, 자극 후 30분-4시간 후에 활성 산소종이 유의하게 증가하는 것이 관찰되었습니다. 활성 산소종 양성 대조군의 효과는 세포마다 크게 다를 수 있습니다. 자극 후 30분 이내에 ROS 증가가 관찰되지 않으면 유도 시간을 연장하거나 Rosup의 농도를 적절히 증가시킬 수 있습니다.
A8: 같은 탐침인데, 나누지 않았는데, 처음 5번은 효과가 아주 좋았는데, 이번에는 염색하지 않았는데, 무슨 문제인가요?
Q8: 1. 세포 상태가 좋지 않아 염색 효율이 낮음; 2. 양성 약물의 유도 시간이 너무 짧고, 37°C에서 어둠 속에서 30분-4시간 동안 배양하면 활성 산소종 수준이 상당히 증가할 수 있음; 3. 프로브를 4회 이상 동결 및 해동하여 염색 효율이 감소하고 형광 신호가 불안정함(때로는 강하고, 때로는 약하고, 쉽게 꺼짐). 프로브를 분주하여 빛으로부터 보호된 -20°C 냉동고에 보관하여 반복적인 동결-해동 주기를 피하는 것이 좋습니다.
Q9: 테스트에 어떤 장비를 사용할 수 있나요?
A9: 형광현미경, 레이저 공초점 현미경, 형광 분광기, 형광 마이크로플레이트 리더, 유세포 분석기 등을 이용하여 형광값을 검출할 수 있습니다.
이 제품을 사용하는 고객이 발행한 과학 연구 출판물(일부)
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[20] Sun C, et al. 셀렌산화물 제거는 산화 스트레스를 조작하여 항종양 효능을 개선합니다. 생체재료. 2019년 12월; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019년 9월 24일. PMID: 31569018. IF: 10.273
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50101ES01 |
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