역전사는 RNA를 상보적 DNA(cDNA)로 전환하는 과정으로, 역전사효소를 매개로 합니다. 어닐링 프라이머가 있는 경우 역전사효소는 먼저 RNA 템플릿에 결합합니다. 역전사효소의 RNA 의존적 DNA 중합효소 활동은 반응 혼합물에서 dNTP를 통합하여 cDNA를 합성합니다. 이 과정은 cDNA:RNA 하이브리드 스트랜드를 형성하는데, 이를 첫 번째 스트랜드 cDNA 합성이라고 합니다.

Moloney Murine Leukemia Virus(M-MLV) 역전사효소는 분자생물학 실험실 절차에서 일반적으로 사용되는 역전사효소 중 하나입니다. 더 높은 역전사 효율, 더 나은 열 안정성 및 증가된 cDNA 합성 속도를 달성하기 위해 원래 역전사효소는 종종 유전자 조작됩니다. 현재 시중에 판매되는 역전사 시약은 일반적으로 15~30분의 반응 시간이 필요하며, 이는 비교적 깁니다. 반응 샘플 수가 많으면 전체 시간 소모가 극적으로 증가할 수 있습니다. YESSEN의 기존 5분 역전사 시리즈 제품은 단 5분 이내에 역전사 과정을 완료할 수 있어 시간을 절약하고 효율성이 높습니다.
제품 포지셔닝 |
제품 이름 |
고양이# |
빠르고 효율적이며 고수율의 역전사 프리믹스 |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 합성 SuperMix for qPCR |
11156ES |
빠르고 효율적이며 고수율의 역전사 프리믹스(gDNA 제거 포함) |
qPCR을 위한 Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 합성 SuperMix (DNA digester plus) |
11155ES |
gDNA 제거 및 역전사 프리믹스의 신속한 원스텝 완료 |
11151ES |
|
유연한 프라이머 선택 신속한 역전사 키트(gDNA 제거 포함) |
11150ES |
|
유연한 프라이머 선택 신속한 역전사 키트(gDNA 제거 및 추적 염료 포함) |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 합성 키트 |
11149ES |
부티크 추천 1
빠르고 효율적이며 고수율 역전사 프리믹스(gDNA 제거 포함)(Cat #11155ES)
다양한 템플릿에서 높은 역전사 수율
견본 |
293T 세포 |
아라비돕시스 탈리아나 |
생쥐 |
생선 간 |
11155ES |
23.4↓ |
19.6↓ |
24.9↓ |
21.1↓ |
브랜드 A |
24.9 |
21.3 |
27.5 |
21.3 |
브랜드 B |
26.1 |
20.5 |
27.1 |
23.1 |
브랜드 C |
25.7 |
19.8 |
27.3 |
21.9 |
브랜드 D |
24.3 |
21.3 |
28.1 |
24.5 |
그림. 역전사는 인간 293T 세포, 아라비돕시스 탈리아나, 마우스 간, 어류 간의 RNA 템플릿을 사용하여 수행되었습니다. 브랜드 A, B, C, D는 모두 2단계 소화 역전사 시약으로 역전사 시간은 15~20분입니다. 테스트 결과에 따르면 Hifair 11155ES 5분 역전사 키트는 다른 브랜드에 비해 수율이 더 높고 Ct 값이 더 낮습니다.
부티크 추천 2
5분 1단계 소화 및 역전사 프리믹스(Cat #11151ES)
높은 역전사 수율
그림. 인간 293T 세포 RNA를 템플릿으로 사용하여 각각 3개의 유전자를 테스트했습니다. 브랜드 A, B, C는 모두 1단계 gDNA 제거 및 역전사 시약입니다. 테스트 결과에 따르면 1μg과 10ng의 총 RNA를 입력했을 때 11151ES 키트의 역전사 수율은 다른 브랜드보다 우수했으며 Ct 값이 더 작았습니다.
그림. Arabidopsis thaliana RNA를 템플릿으로 사용하는 브랜드 A, B, C는 모두 1단계 gDNA 제거 및 역전사 시약입니다. 테스트 결과에 따르면 1μg과 10ng의 총 RNA를 입력했을 때 11151ES 키트의 역전사 수율은 다른 브랜드보다 우수하고 Ct 값이 더 작습니다.
뛰어난 감도
그림. 인간 293T 세포 RNA를 템플릿으로 사용하여 30% GC, 50% GC, 60% GC 및 70% GC 함량의 유전자를 증폭했습니다. 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng 및 1 μg의 총 RNA 입력을 역전사에 사용한 다음 형광 정량 검출을 수행했습니다. 결과에 따르면 11151ES는 100 pg에서 1 μg 범위의 RNA 입력에 대한 역전사를 수용할 수 있습니다.
부티크 추천 3
5분 급속 역전사 키트( Cat #11149/11150ES )
최소 검출 한계가 10 pg까지인 높은 감도
그림. 293T 세포의 총 RNA를 템플릿으로 사용하여 11149ES로 역전사를 수행했고, 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 적용했습니다. 결과에 따르면 11149ES는 10 pg에서 1 μg 범위의 RNA 입력을 성공적으로 역전사하여 정확한 정량 결과를 보장합니다.
14kb 단편의 가장 긴 증폭으로 좋은 증폭 성능
그림. 293T 세포의 총 RNA를 템플릿으로 사용하여 11149ES로 역전사를 수행한 후, 생성된 cDNA를 PCR 검출에 적용했습니다. 결과에 따르면 11149ES는 길이가 1kb에서 14kb에 이르는 cDNA 단편을 합성할 수 있으며, 이후 PCR에는 특정 적용 시나리오가 있습니다. 10kb가 넘는 단편의 직접 역전사가 필요한 경우 최종 단편을 확보하기 위해 역전사 시간을 20~30분으로 늘리는 것이 좋습니다.
역전사 효율 비교
RNA 입력량 |
CT값 |
|
11149ES |
브랜드 A |
|
1μg(마이크로그램) |
15.2 |
15.5 |
100 ng |
18.0 |
18.5 |
10 ng |
21 |
21.7 |
1 ng |
24.5 |
25.1 |
100페이지 |
29.1 |
29.7 |
10페이지 |
32.7 |
34.3 |
그림. 293T 세포의 총 RNA를 템플릿으로 사용하여 11149ES와 Brand A로 역전사를 수행했으며, 11149ES는 gDNA 제거 단계를 거치지 않았습니다. 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 적용했습니다. 결과에 따르면 Brand A의 역전사 시간은 13분이었고 11149ES의 경우 5분이었습니다. 다양한 제품에 대한 정량 분석 결과 11149ES의 Ct 값은 경쟁 브랜드의 Ct 값보다 작거나 비슷하여 11149ES의 5분 역전사 효율이 Brand A보다 우수하거나 거의 동일함을 나타냅니다.
RNA 입력량 |
CT값 |
|
11149ES |
브랜드 B |
|
1μg(마이크로그램) |
16.2 |
17.4 |
100 ng |
19.0 |
20.5 |
10 ng |
22 |
23.8 |
1 ng |
26 |
27.9 |
100페이지 |
31.4 |
33.2 |
10페이지 |
32.9 |
35.6 |
그림. 293T 세포의 총 RNA를 템플릿으로 사용하여 11149ES와 Brand B로 역전사를 수행했으며, 11149ES는 gDNA 제거 단계를 거치지 않았습니다. 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 적용했습니다. 결과에 따르면 Brand B의 역전사 시간은 20분이었고 11149ES의 경우 5분이었습니다. 다양한 기질 양의 정량 분석 결과 11149ES의 Ct 값이 Brand B의 Ct 값보다 작거나 비슷하여 11149ES의 5분 역전사 효율이 Brand B보다 우수하거나 거의 동일함을 나타냅니다.
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