——더 많은 유전자형 분석, 더 적은 시간 및 더 적은 시약
PCR 기반 유전자형 분석 및 기타 실험은 종종 샘플에서 게놈 DNA를 정제해야 합니다. 테스트할 샘플이 많을 때 게놈 DNA를 정제하는 과정은 시간이 많이 걸리고 반복적이며 비용이 많이 듭니다. YEASEN Biology는 Taq DNA 중합효소를 수정하고 PCR 반응 시스템을 최적화하여 게놈 정제의 필요성을 없앰으로써 일련의 Direct PCR Kit 제품을 개발했습니다.
Clever PCR: 직접 PCR
YEASEN의 Direct PCR 키트는 샘플에서 직접 시작하여 최소한의 양의 원시 샘플(그림 1-A) 또는 게놈 정제 없이 용해물 제품(그림 1-B)을 PCR 기반 유전자형 분석(그림 1)을 위한 템플릿으로 사용합니다. 기존의 PCR 기반 유전자형 분석과 비교했을 때 Direct PCR 키트는 샘플을 덜 사용하고 작동이 쉽고 실험 비용이 낮으며 처리량이 높은 샘플 검출이 가능합니다.
그림 1 직접 PCR 증폭 워크플로
A. 직접 방법: 소량의 샘플을 채취하여 PCR 마스터 믹스에 직접 첨가하여 PCR을 식별합니다.기술적 장점
직접적: 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 드는 DNA 정제가 필요 없습니다.
빠름: 템플릿 준비가 10분 안에 완료되고, PCR 반응은 단 30분 만에 완료됩니다.
간단합니다. 절단이나 분쇄가 필요 없이 샘플을 분해할 수 있으며, PCR 혼합물은 미리 혼합된 형태로 제공되어 피펫팅 단계가 줄어듭니다.
절약: 적은 양의 재료 사용.
높은 처리량: 용해 반응은 96웰 플레이트에서 완료될 수 있습니다.
저해 저항성: 다양한 동물 및 식물 샘플에 대한 내성이 있음.
직접 PCR 키트 실험 과정
이 제품 시리즈는 샘플을 용해하기 위해 독특한 프로테아제 용해 시스템을 사용합니다. 용해 용액은 템플릿으로 직접 사용할 수 있으며 키트에 제공된 PCR 마스터 믹스와 함께 사용하여 유전자 증폭을 할 수 있습니다.
그림2 마우스 조직의 직접 PCR 실험 과정
그림 3 식물조직에 대한 직접 PCR 실험 과정
직접 PCR 제품 선택 표
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제품 시리즈 |
마우스 직접 PCR 2세대 |
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제품 번호 |
10189ES |
10185ES |
10188ES |
10187ES |
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명세서 |
20톤/50톤/200톤/500톤 |
50톤/200톤 |
20톤/50톤/200톤/500톤 |
50톤/200톤 |
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특징 |
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앰플리콘 길이 |
≤5킬로바이트 |
≤1킬로바이트 |
≤8킬로바이트 |
≤1킬로바이트 |
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확장 시간(s/kb) |
3~20초 |
30초 |
≤2kb: 3~5초 ≤8kb: 10초 |
60초 |
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적용 가능한 생물 |
쥐, 래트 |
쥐, 래트 |
사람, 쥐, 염소, 닭, 돼지 등 |
쌀, 옥수수, 담배, 유채, 밀, 대두 등 |
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적용 가능한 조직/소재 유형 |
쥐의 꼬리, 쥐의 귀, 발가락(근육 포함), 기타 기관 |
쥐의 꼬리, 쥐의 귀, 발가락(근육 포함), 기타 기관 |
EDTA, 헤파린, 시트르산과 같은 일반적인 항응고제를 함유한 신선한 혈액, 냉장(냉동) 혈액 및 Whatman903® 및 FTA® 와 같은 상업용 건조 혈액 반점 |
부드러운 잎, 오래된 잎, 묘목, 부드러운 줄기 |
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샘플 사용 |
조직 : 5 mg 마우스 꼬리 : 1-5 mm |
조직 : 5-10 mg 마우스 꼬리 : 1-5 mm |
전혈 : 0.5%-20% Whatman® 건조혈반 : 1 mm2 |
잎 : 1-10 mm 씨앗 : 1-3 mm |
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게놈 릴리스 시간 |
5-10분 |
15분 |
0-3분 |
0-10분 |
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제품 최종 구조 |
끝이 뭉툭하다 |
끝이 뭉툭하다 |
끝이 뭉툭하다 |
끝이 뭉툭하다 |
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어닐링 온도 |
온도-(2~5)℃ |
온도-(2~5)℃ |
온도-(1~2)℃ |
온도-(2~5)℃ |
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GC 클리핑 범위 |
29-70% |
30-70% |
30-75% |
40-65% |
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5'-3' 엑소뉴클레아제 활성 |
예 |
예 |
예 |
예 |
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응용 프로그램 |
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유전자형 분석 |
예 |
예 |
예 |
예 |
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멀티플렉스 PCR |
최대 5배 |
최대 3-4배 |
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직접 샘플 증폭 |
예 |
예 |
예 |
예 |
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기타 기능 |
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전기영동 지시약 |
무색 |
파란색 |
무색 |
파란색 |
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핫 스타트 |
예 |
예 |
예 |
예 |
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사전 혼합/키트 |
키트(믹스 포함) |
키트(믹스 포함) |
키트(믹스+버퍼 포함) |
키트(믹스 포함) |
제품의 장점
변형된 Taq DNA 중합효소는 직접 PCR을 보장합니다. 억제제에 대한 내성이 매우 뛰어납니다.
정제되지 않은 샘플을 템플릿으로 사용하면 PCR 반응을 저해하는 많은 구성 요소가 도입됩니다. 일반적인 PCR 반응 시스템과 Taq DNA 중합효소로는 이상적인 결과를 얻기 어렵거나 PCR 증폭을 수행하는 것이 불가능합니다. 이 키트 시리즈의 PCR 믹스는 변형된 Taq DNA 중합효소를 사용하여 템플릿 DNA에 대한 결합 능력을 높이고 일반적인 PCR 저해제에 대한 내성이 더 높아 더 광범위한 템플릿 적응성을 가진 공식 최적화된 프리믹스입니다.
그림 4 Direct PCR Kit의 PCR Mix는 불순물에 대한 내성이 더 높습니다. 동일한 양의 템플릿이 다른 PCR Mix를 사용한 PCR에 사용되고 다양한 농도의 PCR 반응 억제제가 시스템에 추가됩니다. 다른 조건에서 PCR 산물의 양을 비교합니다.
Y EASEN은 다양한 샘플에 대한 일련의 제품을 개발했습니다.
- I. 설치류 특정 유형: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus(10189ES)
적용 가능한 샘플: 마우스 조직(마우스 꼬리, 마우스 귀, 마우스 발가락 등)
- 높은 증폭 효율(길이, 속도, GC 호환성)
그림 5. Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus는 다양한 조직의 용해물을 증폭합니다. 1: 플라스미드; 2: 마우스 귀; 3: 마우스 꼬리; 4: 간. 용해 조건: 70°C에서 10분 동안 용해, 95°C에서 5분 동안 불활성화. 표적 단편은 1kb, 2kb, 3kb 및 6kb이며, 확장 시간은 각각 3, 5, 10 및 20초/kb로 설정되었습니다. M: 10510ES60(YEASEN).
- 광범위한 템플릿 호환성(10189ES)
그림 6. Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus를 사용하여 인간 293 세포(1), 타액(2), 두피 조직(3)을 직접 용해(70°C에서 10분)하고 증폭했습니다. 모든 샘플에서 명확한 표적 밴드인 M: 10510ES60(YEASEN)이 나타났습니다.
- II. 다종혈액 범용형: 혈액 Advanced Direct PCR Kit (10188ES)
- 증폭 길이 최대 8kb
그림 7 다양한 길이의 DNA 단편은 Blood Advanced Direct PCR Kit를 사용하여 인간 전혈에서 직접 증폭되었습니다. 혈액 샘플은 항응고제로 EDTA와 함께 -20℃에서 보관되었습니다. 혈액 템플릿 농도는 10%이고, 연장 시간은 10초/kb로 설정되었습니다. M: 10510ES60(YEASEN).
- 높은 허용 범위
그림 8 A: Blood Advanced Direct PCR 키트는 인간 EDTA 항응고제 전혈에서 직접 GC 함량이 71%인 2kb DNA 단편을 증폭하는 데 사용됩니다. 혈액 템플릿 농도는 0.5-50%로 기울기 설정되고, 연장 시간은 10초/kb로 설정됩니다. B: Blood Advanced Direct PCR 키트는 마우스 EDTA 항응고제 전혈에서 직접 GC 함량이 67%인 2.2kb DNA 단편을 증폭하는 데 사용됩니다. 혈액 템플릿 농도는 0.5-50%로 설정되고, 연장 시간은 10초/kb입니다. M: 10510ES60(YEASEN).
- III. 식물 특이형: Plant Tissue Direct PCR Kit (10187ES)
- 다양한 종류의 식물 샘플을 통해 검증됨
그림 9. 다양한 유형의 식물 잎 조직에서 직접 증폭된 결과. M: 100 bp DNA 사다리. C: 해당 식물에서 정제된 게놈 DNA를 템플릿으로 사용. 1-2: 잎 조직 용해물을 템플릿으로 사용. 사이클 수: 30사이클.
고객 사례
- I. 마우스 유전자형 식별
광저우의 생물학 회사:
그림 10 Mouse Direct PCR Kit(10189ES)를 이용한 마우스 꼬리 증폭. 타겟 유전자: 500 bp; 용해 시간: 10분; PCR 반응 시스템: 25 μL, 연장 시간: 5초/kb.
- II. 벼 유전자 직접 증폭
XX대학교
그림 11 Plant Direct PCR Kit (10187ES)는 벼 관련 유전자를 증폭하는데 사용됩니다.
관련 제품
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제품 포지셔닝 |
제품 이름 |
제품 번호 |
제품 사양 |
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고품질 아가로스 |
10208ES60/76 |
100g/500g |
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핵산 염색(자외선 조사) |
10202ES76 |
500 μL |
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빠른 PCR 업그레이드, 콜로니 PCR이 가능하며 복잡한 템플릿 증폭에 적합 |
10167ES03/08 |
1ml/5×1ml |