PEI linear 40000, um reagente de transfecção mais eficiente
Geralmente, a transfecção é o processo de introdução artificial de ácidos nucleicos (DNA ou RNA) em células eucarióticas. Os reagentes de transfecção, como o próprio nome indica, são uma série de reagentes envolvidos na transfecção. Durante o processo de transfecção, muitas vezes somos incomodados pela baixa eficiência de transfecção, faixa de aplicação estreita, forte toxicidade, operação incômoda e preço caro dos reagentes de transfecção. Então, existe um reagente de transfecção que pode resolver esses problemas? Sim, o PEI linear é a melhor escolha para resolver esses problemas.
Nota:
1. Quais são os tipos de transfecção celular?
2. O que é PEI MW 40000 linear?
3. Como funciona o PEI MW 40000 linear?
4. Quais são as características do PEI MW 40000?
5. Outros reagentes de transfecção de
6. Considere a leitura
1. Quais são os tipos de transfecção celular?
Antes de introduzir o PEI MW 40000 linear, vamos primeiro entender brevemente os tipos de transfecção celular. A transfecção celular é de grande importância para a pesquisa genética, pesquisa de proteínas e pesquisa de citologia, que se refere ao processo de introdução artificial de ácidos nucleicos (DNA ou RNA) em células utilizando meios de infecção não virais. O principal objetivo da transfecção é estudar a função de genes ou produtos genéticos, aumentando ou inibindo a expressão genética específica em células, ou para produzir proteínas recombinantes. A introdução de ácido nucleico exógeno mudará as características das células, de modo a atingir o objetivo da transfecção, que é útil para o estudo da regulação genética e expressão proteica, bem como a síntese e produção de proteínas.
As transfecções celulares podem ser divididas por métodos químicos, biológicos e físicos, ou pelo tempo de residência de um gene estranho na célula. Na transfecção transitória, o ácido nucleico introduzido pode existir na célula por um tempo limitado sem replicar, enquanto na transfecção estável, o ácido nucleico introduzido é integrado ao genoma do hospedeiro e pode ser expresso na progênie da célula transfectada.
Com tantos métodos diferentes de transfecção de células, como escolher o método certo?
Nenhum método de transfecção é adequado para todos os tipos de células e atende a todas as necessidades experimentais. O método de transfecção ideal deve ser selecionado de acordo com os requisitos do tipo de célula e condições experimentais.
Atualmente, os reagentes químicos de transfecção ainda são os principais métodos de transfecção celular devido à sua facilidade de operação e compatibilidade com uma variedade de linhagens celulares.
2. O que é PEI MW 40000 linear?
Polietilenimina Linear (PEI) MW40000 (lise rápida) é um reagente de transfecção transitória baseado em polietilenoimina com um peso molecular de 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 é um polímero catiônico altamente carregado que pode facilmente ligar moléculas de ácido nucleico carregadas negativamente para formar complexos, introduzindo assim complexos nas células.
Comparado com o reagente de transfecção PEI 25000, o PEI 40000 é fácil de dissolver e pode ser dissolvido diretamente em água. Além disso, o PEI 25000 contém 4-11% de resíduos de propionil, que impedem que a estrutura do polímero se ligue ao DNA.Mas o PEI 40000 é uma construção de galpão completa, então seu desempenho é consistentemente eficiente.
3. Como funciona o PEI MW 40000 linear?
A polietilenimina (PEI) é um excelente vetor não viral multifuncional com boa adesão celular e pode ser usada para transfectar células independentemente de inibidores lisossômicos. PEI e DNA são ligados por forças eletrostáticas, fazendo com que o DNA colapse da estrutura solta em forma de espiral em complexos de partículas esféricas. Os complexos PEI-DNA são geralmente carregados positivamente para interagir eletrostaticamente com a membrana celular externa e absorvidos por endocitose. Os complexos PEI-DNA endocitados são então capturados por endossomos para transferência para lisossomos para degradação. A pressão iônica interna sempre crescente faz com que o endossomo inche e se rompa, liberando DNA estranho no citoplasma. Esse mecanismo de transfecção é chamado de efeito "esponja de prótons".
Estudos mostraram que moléculas de PEI podem revestir a superfície dos complexos PEI-DNA para proteger suficientemente o DNA de ser degradado por nucleases no citoplasma, garantindo o trânsito do DNA estranho do citoplasma para o núcleo. Além disso, moléculas de PEI podem se inserir nas membranas de fosfolipídios e criar canais estáveis para transferir DNA para o núcleo da célula. Moléculas de PEI não entram no núcleo da célula e desempenham um papel importante como um vetor de DNA.
A expressão gênica pode ser detectada de 1 a 4 dias após o gene exógeno ser introduzido em células de mamíferos. Essa expressão se deve ao fato de que uma parte do DNA introduzido é transcrita em mRNA após entrar no núcleo e, então, traduzida para o citoplasma. Como esse método é relativamente simples e fácil de implementar, ao selecionar um bom vetor de expressão e método de transfecção, a quantidade de expressão de proteína pode atingir um nível mais alto. Os reagentes de transfecção PEI têm sido amplamente utilizados em pesquisas científicas e aplicações industriais como um método de transfecção comum para estudar a estrutura e a função de proteínas.
4. Quais são as características do PEI MW 40000?
Como um reagente de transfecção transitório com baixa citotoxicidade, o PEI 40000 tem alta eficiência de transfecção e alta eficiência de expressão gênica em células como HEK293 e CHO. O reagente de transfecção PEI linear foi validado para uma ampla gama de linhas celulares, incluindo células HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 e Hela. A eficiência de transfecção é tão alta quanto 80%~90%. Continue a visualizar os dados de desempenho:
- Alta eficiência de transfecção, adequada para células aderentes e em suspensão
É adequado para uma variedade de linhas celulares, incluindo células HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 e Hela, etc., a eficiência de transfecção é tão alta quanto 80%~90%.
Tabela 1.Lista de linhas celulares validadas
| Células aderentes (1 μg de DNA) | Eficiência | Células em suspensão (2 μg de DNA) | Eficiência |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| Sf9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Olá | 80%-90% |
| |
Figura 2. Plasmídeo GFP transfetado com PEI 40000 em células aderentes HEK-293, a eficiência de transfecção atingiu 90% após 72 h (esquerda); O plasmídeo GFP transfetado com PEI 40000 em células de suspensão CHO-K1, e a eficiência de transfecção atingiu 80% após 72 h (direita)
- Baixa toxicidade
Garante a viabilidade celular e melhora a eficiência da transfecção.
Figura 3. O PEI 40000 fornecido pela YEASEN tem citotoxicidade muito menor do que o poli** concorrente
- A eficiência de transfecção é maior que a do PEI 25000, podendo substituir completamente o PEI 25000
O PEI 25000 contém 4-11% de resíduos de propionil, impedindo que a estrutura do polímero se ligue ao DNA. Comparado ao PEI 25000, o PEI 40000 é uma construção de galpão completo, então seu desempenho é consistentemente eficiente.
Figura 4. As células HEK-293 foram transfetadas transitoriamente com plasmídeo GFP usando reagentes de transfecção PEI 25000 e PEI 40000, e a fluorescência foi observada após 72 h. Resultados experimentais: a eficiência de transfecção do PEI 40000 é melhor que a do PEI25000.
- Configuração simples e tempo de transfecção curto
Este produto é um tipo instantâneo, que pode ser dissolvido diretamente em água sem ajuste de pH. E compatível com soro e antibióticos, sem necessidade de trocar o meio.
- Custo-efetivo, adequado para transfecção transitória em larga escala
Comparado com produtos importados, o reagente de transfecção
5. Outros reagentes de transfecção de Yeasen
A
Tabela 2.Lista de reagentes de transfecção de
| Gato# | Nome do produto | Tipo de ácido nucleico | Tipo de célula |
| 40823ES | ADN | Aderente e Células de suspensão | |
| 40816ES | ADN | Aderente e Células de suspensão | |
| 40820ES | ADN | Aderente e Células de suspensão | |
| 40821ES | ADN | Aderente e Células de suspensão | |
| 40802ES | ADN (<10kb), shRNA | UMcélulas adjacentes | |
| 40805ES | Suspensão Hieff Trans™ sem células Reagente de transfecção lipossomal (Inquirir) | ADN (<10kb) | Células de suspensão (para células sanguíneas suspensas ou imunes células, a eficiência da transfecção dos reagentes químicos atuais é não alto. Método de eletroporação ou vírus são recomendados.) |
| 40806ES | Reagente de transfecção de siRNA/miRNA in vitro Hieff Trans™ | siRNA、miRNA、pré-miRNA, miRNA mimetizador, antimiRNA | Células aderentes e em suspensão |
6. Considere a leitura
Reagente de transfecção – Hieff Trans™ e PEI
Guia de seleção de produtos reagentes para transfecção celular in vitro
Referência:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Formação e comportamento de agregação de complexos de polietilenoimina-DNA. Departamento de Farmacêutica, Nanquim 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Novos insights sobre o mecanismo de transfecção de polietilenimina e suas implicações na terapia genética e vacinas de DNA. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Transfecção transitória de células de mamíferos com polietilenimina (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ