Быстрое развитие биотехнологий оказало глубокое влияние на борьбу с инфекционными заболеваниями, такими как COVID-19, посредством создания вакцин мРНК, полученных с помощью технологии синтеза РНК in vitro. Многочисленные компании, включая Moderna в США, CureVac в Германии и BioNTech в Германии, не только разработали терапевтические вакцины мРНК, но и методы лечения таких состояний, как опухоли, инфекционные заболевания и хронические заболевания.
Исследование и формулирование вакцин мРНК требуют разнообразного спектра сырья для обеспечения их успешной разработки. Будучи пионером в отрасли молекулярных ферментов, Йесен добился успеха в создании различных молекулярных ферментов и реагентов с помощью передовой биотехнологии молекулярных ферментов и крупномасштабных методов ферментации и очистки белков.
Чтобы гарантировать как качество продукции, так и производственные мощности, Yeasen создала производственный объект уровня GMP в Ухане, способный полностью удовлетворить требования промышленного производства с годовой мощностью более 5 миллиардов единиц. Кроме того, Yeasen является первой китайской компанией, получившей сертификацию ISO 13485 для исследований, разработок, производства и дистрибуции молекулярных ферментов. Эта сертификация гарантирует качество, последовательность и прослеживаемость всех их реагентов.
1. Преимущество GMP
2. Yeasen может поставлять продукцию, соответствующую стандартам GMP
3. Йесен приобрел номера DMF для многих продуктов
4. Сценарии применения продукции Yeasen
5. Сырье для приготовления мРНК-вакцины предоставлено Yeasen
6. Информация о заказе
1. Преимущество GMP
«GMP-grade» — это фирменный термин, который Yeasen использует для описания реагентов, произведенных на сертифицированных по ISO 13485 предприятиях. Реагенты GMP-grade от Yeasen производятся в соответствии со стандартами системы менеджмента качества ISO 13485 и с более строгим контролем процесса и полной документацией. Yeasen может не только предложить высококачественные реагенты, но и предоставить документы, аудиты площадок и другую поддержку для наших клиентов.
Таблица 1. Преимущество GMP
| Контроль качества | Уровень исследования | GMP-класса |
| Без животных | Могут быть использованы материалы животного происхождения. | При необходимости могут быть предоставлены сертификаты об отсутствии животных. |
| Характеристика банка клеток | Менее строгие | Строгий (соответствует правилам GMP) |
| Информация о прослеживаемости сырья и готовой продукции | Менее строгие | Строгий (соответствует правилам GMP) |
| Контроль уровня эндотоксина | / | Строгий |
| Стерильный контроль | / | Строгий |
| Записи партий для производства и испытаний | Менее строгие | Строгий (при необходимости могут быть предоставлены записи партии) |
| Отчет о проверке процесса | / | При необходимости отчет может быть предоставлен. |
| Система контроля изменений | Самооценка | Строгий (соответствует правилам GMP) |
| Система управления качеством | Самооценка | Сертификация ISO 13485 |
| Номер ДМФ | / | Да (отчетность) |
2. Yeasen может поставлять продукцию, соответствующую стандартам GMP
Используя обширный опыт и техническое совершенство в разработке ферментов и промышленном производстве, Yeasen создала передовое предприятие, известное как «mRNAtools». Это предприятие, занимающее площадь 50 000 квадратных футов, соответствует нормам GMP и может похвастаться передовыми функциями, включая 2 автоматизированных ферментационных установки объемом 1500 л, крупномасштабное очистное оборудование и возможности лиофилизации. mRNAtools занимается поставкой строгих реагентов, которые соответствуют производственным и нормативным требованиям клиентов.
Молекулярный завод по производству ферментов Yeasen, специально построенный для продуктов класса GMP, гарантирует качество продукции как на аппаратном, так и на программном уровне. Он состоит из высококвалифицированной команды из 70 специалистов, каждый из которых обладает обширным опытом производства GMP. Складские и логистические операции имеют модульную структуру, что обеспечивает безопасное хранение и эффективную транспортировку продукции. Многоцентровая дистрибьюторская сеть по всей стране дополнительно гарантирует надежный цикл поставок.
3. Йесен приобрел номера DMF для многих продуктов
Файлы лекарственных препаратов (DMF) — это конфиденциальные документы, добровольно предоставленные в Управление по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Они содержат подробную информацию об объектах, процессах или изделиях, используемых при производстве, обработке, упаковке и хранении лекарственных препаратов для человека.
FDA тщательно изучает техническое содержание DMF, когда производитель активного фармацевтического ингредиента (API) ссылается на него для поддержки своей исследовательской заявки на новый препарат (IND), заявки на новый препарат (NDA), сокращенной заявки на новый препарат (ANDA) или экспортной заявки. DMF играют ключевую роль в этих заявках.Когда производители подают DMF на конкретные материалы, процесс одобрения FDA может быть значительно ускорен.
Yeasen располагает файлами DMF, которые могут оптимизировать сроки проекта. При желании вы можете запросить справочную авторизацию наших DMF для поддержки вашего заявления FDA. Чтобы инициировать справочную авторизацию наших DMF, любезно отправьте запрос на Письмо-авторизацию Yeasen, попросив предоставить Письмо-авторизацию DMF для конкретного центра FDA.
4. Сценарии применения продукции Yeasen
4.1 Генерация шаблона
Линеаризация плазмиды является обязательным этапом во время генерации шаблонов, когда плазмидные векторы используются в качестве шаблонов транскрипции. По мере того, как транскрипция доходит до конца шаблонов ДНК, линеаризация плазмиды обеспечивает генерацию транскриптов РНК определенной длины и последовательности. Yeasen предоставляет различные рестрикционные ферменты для удовлетворения ваших потребностей. Мы рекомендуем выбирать рестрикционные ферменты, которые генерируют тупые концы или 5´-выступы.
4.2 В пробирке Транскрипция (IVT)
На транскрипцию in vitro влияют различные факторы. Ферменты, буферы и модифицированные субстраты оказывают большое влияние на эффективность транскрипции.
На основе платформы ZymeEditor компания YEASEN Biotech разработала новые РНК-полимеразы T7, которые значительно снижают образование дцРНК в процессе транскрипции in vitro (IVT) (РНК-полимераза Т7, низкодисперсная РНК, 250 ед./мкл). Он значительно снижает иммуногенность мРНК и, в определенной степени, повышает целостность мРНК. Ожидается, что эта разработка сыграет решающую роль в продвижении разработки вакцин мРНК и противораковых препаратов.
Оптимизировав буфер и отрегулировав солевой тип нуклеотидного субстрата, мы значительно повысили эффективность транскрипции и снизили продукцию дцРНК.
Рисунок 2. Трис-НТФ может значительно повысить эффективность lVT и снизить продукцию дцРНК.
4.3 Кэпирование мРНК
Поскольку 5'-кэп-структура снижает иммуногенность и необходима для эффективной трансляции мРНК, необходимо добавление кэп-структур к 5'-концам мРНК, образующимся в результате транскрипции.
Рисунок 3. Результаты определения скорости захвата (ЖХ-МС-детекция)
4.4 Очистка мРНК
Очистка является необходимым шагом на пути к получению мРНК высокой чистоты.
5. Сырье для приготовления мРНК-вакцины предоставлено Yeasen
В настоящее время Yeasen может предоставить полный набор продуктов в процессе производства исходного раствора мРНК. Продукция строго контролируется производством GMP и полностью соответствует требованиям производства вакцин мРНК.
Таблица 2.Сырье для приготовления мРНК-вакцины предоставлено Yeasen
| Подготовка шаблона | Транскрипция in vitro | ||
| 10164ES | 10623ES | ||
| 10122ES | 10625ES | ||
| 10922ES | 10672ES | ||
| 10300ES | 10621ES | ||
|
| 10611ES | ||
| 10661ES | 10133ES | ||
| РНКаза R (20U/мкл) | 14615ES | 10650ES | |
| Ксба I | 10662ES | 10651ES | |
| Укупорка |
| Очищение |
|
| Фермент кэппинга мРНК вируса коровьей оспы, соответствующий требованиям GMP | 10614ES | 12602ES | |
| 10612ES | Стойка магнитной сепарации | 80460ES | |
| 10619ES | 36717ES | ||
| 10681ES |
| ||
6. Информация о заказе
Ниже приведены репрезентативные продукты, предлагаемые Yeasen. Доступны дополнительные размеры.Наши продукты в высокой степени оптимизированы для совместной работы, чтобы помочь обеспечить превосходную производительность и воспроизводимость. Мы также можем предоставить индивидуальные услуги. Если вас интересует продукт, который не показан, свяжитесь с нами, и мы поработаем с вами, чтобы удовлетворить ваши потребности.
Таблица 3. Информация для заказа
По поводу чтения:
Реагенты GMP-класса для синтеза мРНК in vitro
ДНКаза I и ее применение в биомедицине
Ссылки:
[1] Чаудхари, Н., Вайсман, Д. и Уайтхед, К.А. (2021). мРНК-вакцины против инфекционных заболеваний: принципы, доставка и клиническое применение. Обзоры природы. Открытие лекарств, 20(11), 817–838.
[2] Фогель, А. Б. и др. Самоамплифицирующиеся РНК-вакцины обеспечивают эквивалентную защиту от гриппа вакцинам мРНК, но
в гораздо меньших дозах. Молекулярная терапия: журнал Американского общества генной терапии 26, 446-455,
[3] Фукс, А.Л., Ной, А. и Шпрангерс, Р. Общий метод быстрого и экономически эффективного крупномасштабного производства 5'
Кэпированная РНК. РНК (Нью-Йорк, Нью-Йорк) 22, 1454-1466, doi:10.1261/rna.056614.116 (2016).
[4] Шмид, А.Соображения по производству вакцин мРНК для клинических испытаний. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси) 1499, 237-251,
[5] Банерджи, А. и др. Вакцины мРНК для профилактики заболевания COVID-19 и зарегистрированных аллергических реакций: текущие доказательства и предлагаемый подход. Журнал аллергии и клинической иммунологии. На практике 9, 1423-1437,
[6] Ричнер, Дж. М. и др. Модифицированные вакцины мРНК защищают от заражения вирусом Зика. Cell 168, 1114-1125.e1110,
[7] Корбетт, К. С. и др. Разработка вакцины против мРНК SARS-CoV-2 стала возможной благодаря готовности прототипа патогена. Nature 586,567-571,
[8] Корбетт, К.С. и др. мРНК-1273 защищает от инфекции SARS-CoV-2 бета у нечеловекообразных приматов. Nature immunityy 22, 1306-1315,
[9] Кич, К. и др. Фаза 1-2 испытания вакцины на основе рекомбинантного шиповидного белка SARS-CoV-2. Медицинский журнал Новой Англии 383, 2320-2332,
[10] Крампс, Т. и Элберс, К. Введение в РНК-вакцины. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси) 1499, 1-11,
[11] Линарес-Фернандес, С., Лакруа, К., Экспозито, Дж. Й. и Верье, Б. Адаптация вакцины мРНК для баланса врожденного/адаптивного иммунного ответа. Тенденции в молекулярной медицине 26, 311-323,