Översikt
Värdcellsresterande DNA är en processrelaterad orenhet som är involverad i produktionen av biologiska läkemedel, vilket inte bara minskar effektiviteten av biologiska läkemedel, utan också kan utgöra säkerhetsproblem såsom smittsamhet eller tumörframkallande egenskaper. Därför har tillsynsmyndigheter i olika länder infört gränser för mängden kvarvarande DNA i biologiska läkemedel.
Nuvarande WHO- och FDA-riktlinjer rekommenderar rest-DNA i färdiga produkter på högst 10 ng/dos, och FDA anger också att rest-DNA i värdcell-DNA från biologiska läkemedel inte bör vara mer än 100 pg/dos. De allmänna principerna för den europeiska farmakopén föreskriver att de flesta rest-DNA-gränsvärden för biologiska produkter inte bör vara mer än 10 ng/dos, men rest-DNA-gränserna för enskilda vacciner är strängare, t.ex. bör rest-DNA i det inaktiverade vaccinet mot hepatit A inte vara mer än 100 pg/dos i vaccinet B1, och att det resterande DNA-värdet i det inaktiverade vaccinet mot hepatit A inte bör vara mer än 100 pg/dos i vaccinet B1. pg/dos. 2020-utgåvan av den kinesiska farmakopén, del III, föreskriver att DNA-resterna i biologiska preparat som produceras på en cellulär matris inte får överstiga 100 pg/dos, och DNA-resterna i vacciner producerade på en bakterie- eller svampmatris inte får överstiga 10 ng/dos.
Dessutom ger nationella farmakopéer vägledande rekommendationer för metoderna för bestämning av exogena DNA-rester. 2017 års upplaga av USP40-NF35 General Provision 1130 i US Pharmacopoeia beskriver 3 metoder för bestämning av exogena DNA-rester, vilka är DNA-probhybridisering, tröskelmetod och realtidskvantitativ PCR-metod. Europeiska farmakopén föreslår kvantitativ PCR och immunoenzymatiska metoder i realtid, vilka är två känsliga analysmetoder för att kvantifiera kvarvarande DNA i värdceller. Den kinesiska farmakopén 2020-versionen av de tre allmänna reglerna 3407 föreskriver också att värdcells-DNA-rester detektionsmetoder är DNA-sondhybridisering, fluorescensfärgning och kvantitativ PCR.
Bland dem har qPCR-metoden mycket hög känslighet, sekvensspecificitet och noggrannhet, vilket kan ge ett tillförlitligt detektionsmedel för den biofarmaceutiska industrin i processforskning och kvalitetskontroll av färdiga produkter, och har nu blivit den föredragna detektionsmetoden för varje biologisk produkttillverkare.
Yeasen Bioteknik Detektionssatser för resterande DNA
Baserat på principen om fluorescerande sond qPCR, har Yeasen utvecklat en serie snabba och specialiserade värdcellsrester-DNA-detektionskit, inklusive CHO, HEK293, E.coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris och så vidare. Dessa kit tillhandahåller specialiserad och snabb upptäckt av DNA-rester i mellanprodukter, halvfabrikat och färdiga produkter under utveckling och produktion av biologiska läkemedel såsom antikroppsläkemedel, cell- och genterapiprodukter, rekombinanta proteinläkemedel och vacciner.
Särdrag
Hög känslighet: utvecklad baserat på fluorescerande sond qPCR-metod med LLOD så låg som 0.05fg/µL;
Hög noggrannhet: återhämtningar av prover i intervallet 70%~130%;
Hög specificitet: ingen korsreaktivitet med irrelevant DNA, vilket minskar falska positiva vid detektion;
Överensstämmelse med föreskrifter: fullständigt validerad i enlighet med Chp, USP, ICHQ2(R1) och andra krav, prestanda i enlighet med kinesiska och utländska regulatoriska standarder;
Samarbeta med revision: Produktproduktionen överensstämmer med ISO13485 kvalitetssystemstandarder, med perfekta revisionsdokument.
Garantikvalitet: råvarorna i kiten är alla oberoende utvecklade, och qPCR Mix och andra enzymprodukter tillverkas i en ultraren enzymfabrik.
Ansökan
Antibody Drugs Detektion av kvarvarande orenheter i värdcellerVacciner Detektering av kvarvarande orenheter hos värdceller
Rekombinanta proteinläkemedel Detektion av resterande orenheter i värdceller
Specifikation
| Test- och valideringsprogram | Referensstandarder eller krav | Nanmärkning | |
| 1. Kitstandarder (referensstandarder) | Benchmarking till nationella standarder eller Förberedda standarder |
| |
| 2. Linöra Rångest | Standardkurvans omfattning | Se manualen eller den faktiska situationen (t.ex. 30fg/μL~300pg/μL) |
|
| R2 | ≥0,98 (PsYeasen Kits≥0,99） | Krav för HCD i Chinese Pharmacopoeia 2020 Edition 3407 Allmänna bestämmelser | |
| Sluttning | -3,1~-3,8 (PsYeasen Kits -3.1~-3.6） | Krav för HCD i Chinese Pharmacopoeia 2020 Edition 3407 Allmänna bestämmelser | |
| Förstärkningseffektivitet | 90%~110%（（PsMotsvarande lutning -3.1~-3.6, Krav inom branschen） |
| |
| 3. Anoggrannhet | Avvikelse från nationell standard DNA | ＜15 % |
|
| Återvinningshastighet för provspik | 50%~150%（Krav inom branschen 70~130%） | Krav för HCD i Chinese Pharmacopoeia 2020 Edition 3407 Allmänna bestämmelser | |
| 4. Precision | Repeterbar | CV ＜15 % |
|
| Mellanprecision | CV ＜15 % |
| |
| 5. Sspecialitet | Ingen interferens med exogent DNA |
| |
| 6. Limitation av kvantifiering | fg/μL nivå |
| |
| 7. Stabell | Upprepad frysning och upptining | 10 gånger |
|
| Accelerationsstabilitet | 2~8℃ 30 dagar, 37℃ 14 dagar |
| |
| Giltighetstid | -20°C förvaring i 2 år |
| |
Siffror
Hög känslighet: LLOQ så låg som 0,3 fg/µL, LLOD så låg som 0,05 fg/µL.
1. Det linjära området för CHO-värdcellsresidual-DNA-detektionskit (3G) var 3fg/μL~300pg/μL, R2=1, amplifieringseffektiviteten var 99,29 % och CV för detektionsvärdet för varje koncentration var <15 %.
Figur 1. CHO DNA (3G) kalibreringsgraf (vänster) och linjär kartläggning av amplifieringskurvan (höger)
2. Detektera CHO-DNA (3G) vid den lägsta koncentrationspunkten för den standardiserade sången vid 3fg/uL och under koncentrationer, 10 replikat per koncentration. Resultaten visade att vid koncentrationer på 0,3 fg/uL och däröver var CV <20 %, dvs gränsen för kvantifiering av CHO Host Cell DNA Residue Assay Kit (3G) var 0,3 fg/uL.
Figur 3. 0,05fg/μL CHO DNA (3G) qPCR-analysresultat
Hög specificitet: ingen korsreaktivitet med annat värdcells-DNA.
Bedömning av interferensen av genomiskt DNA från musarter med hög affinitet till CHO-DNA (3G) såväl som genomiskt DNA från celler som vanligtvis används i produktionen av biologiska läkemedel till CHO-DNA-detektionsreagenset, överlappade amplifieringskurvorna för interferensgruppen och kontrollgruppen och ingen interferens sågs (följande grafer visar, i ordning, interferensdata för Moli, HEK2, genomic och DNA till Moli39. CHO DNA-detektionsreagens).
Figur. 4.Resultat av interferensexperiment med CHO DNA (3G) kit
Produktinformation
| Kategorisering | Art.nr | Produktnamn | Specifikation |
| Provförbehandling | 18461ES | 25T/100T | |
| 18467ES | MolPure® Mag48 provberedningssats FN | 3×16T/6×16T | |
| Nukleinsyraextraktionsinstrument | 80511ES | 48-kanals automatisk nukleinsyraextraktor | 48 Fluxer |
| Detektion av kvarvarande DNA | 41307ES | 50T/100T | |
| 41308ES | 50T/100T | ||
| 41310ES | SV40LTA&E1A Residue DNA Detection Kit | 50T/100T | |
| 41317ES | Hansenula polymorpha värdcells-DNA-restdetektionskit | 50T/100T | |
| 41319ES | MDCK-värdcells-DNA-restdetektionskit | 50T/100T | |
| 41323ES | Plasmid DNA-restdetektionskit | 50T/100T | |
| 41324ES | S. cerevisiae värdcells-DNA-restdetektionskit | 50T/100T | |
| 41325ES | Human Host Cell DNA Residue Detection Kit | 50T/100T | |
| 41328ES | Pichia pastoris värdcells-DNA-restdetektionskit | 50T/100T | |
| 41330ES | Sf9 och Baculovirus DNA Residue Detection Kit | 50T/100T | |
| 41331ES | 50T/100T | ||
| 41332ES | 50T/100T |