——Mer genotypning, mindre tid och färre reagenser
PCR-baserad genotypning och andra experiment kräver ofta rening av genomiskt DNA från prover. När det finns många prover som ska testas är processen att rena genomiskt DNA tidskrävande, repetitiv och kostsam. YEASEN Biology har utvecklat en serie Direct PCR Kit-produkter genom att modifiera Taq DNA-polymeras och optimera PCR-reaktionssystemet, vilket eliminerar behovet av genomisk rening.
Smart PCR: Direkt PCR
YEASENs Direct PCR Kit startar direkt från provet, med minimala mängder råprov (Figur 1-A) eller deras lysatprodukter (Figur 1-B) utan genomisk rening som mallar för PCR-baserad genotypning (Figur 1). Jämfört med konventionell PCR-baserad genotypning, använder Direct PCR Kit mindre prov, är lätt att använda, har en låg experimentell kostnad och möjliggör detektering av prov med hög genomströmning.
Fig.1 Arbetsflöde för direkt PCR-förstärkning
A.Direct metod: Ta en liten mängd av provet och tillsätt det direkt till PCR Master Mix för PCR-identifiering.Tekniska fördelar
Direkt: Inget behov av tidskrävande och dyr DNA-rening.
Snabbt: Mallberedning slutförd på 10 minuter och PCR-reaktion slutförd på så lite som 30 minuter.
Enkelt: Prover kan lyseras utan att de behöver skäras eller malas, och PCR-blandningen är i förblandad form, vilket minskar antalet pipetteringssteg.
Spara: Liten mängd material som används.
Hög genomströmning: Lysreaktioner kan slutföras i en 96-brunnars platta.
Hämningsbeständig: Tolerant mot olika djur- och växtprover.
Experimentell process för direkt PCR Kit
Denna serie av produkter använder ett unikt proteaslyseringssystem för att lysa prover. Lyslösningen kan användas direkt som mall och paras ihop med PCR Master Mix som medföljer i kitet för genamplifiering.
Fig. 2 Direkt PCR-experimentprocess av musvävnader
Fikon.3 Process för direkt PCR-experiment på växtvävnad
Direkt PCR-produktvalstabell
| Produktserie | Mouse Direct PCR andra generationen | |||
| Produktnummer | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Specifikationer | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T |
| Drag | ||||
| Amplikonlängd | ≤5 kb | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb |
| Förlängningstid (s/kb) | 3-20 s | 30 s | ≤2 kb: 3-5 s ≤8 kb: 10 s | 60 s |
| Tillämpliga organismer | Möss, råttor | Möss, råttor | Människor, möss, getter, höns, grisar, etc. | Ris, majs, tobak, raps, vete, sojabönor, etc. |
| Tillämpliga vävnader/materialtyper | Mussvans, musöra, tår (med muskler) och andra organ | Mussvans, musöra, tår (med muskler) och andra organ | Färskt blod som innehåller vanliga antikoagulantia som EDTA, heparin, citrat, kylt (fryst) blod och kommersiella torkade blodfläckar som Whatman903® och FTA® | Möra löv, Gamla löv, Fröplantor, Mjuka stjälkar |
| Exempel på användning | Vävnad: 5 mg Mussvans: 1-5 mm | Vävnad: 5-10 mg Mussvans: 1-5 mm | Helblod: 0.5%-20% Whatman® torkade blodfläckar: 1 mm2 | Blad: 1-10 mm Frö: 1-3 mm |
| Genomic Release Time | 5-10 min | 15 min | 0-3 min | 0-10 min |
| Produktens slutstruktur | Trubbiga ändar | Trubbiga ändar | Trubbiga ändar | Trubbiga ändar |
| Glödgningstemperatur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC Clipping Range | 29-70 % | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % |
| 5'-3' exonukleasaktivitet | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Ansökningar | ||||
| Genotypning | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Multiplex PCR | Upp till 5x |
| Upp till 3-4x |
|
| Direkt provförstärkning | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Andra funktioner | ||||
| Elektroforesindikator | Färglös | Blå | Färglös | Blå |
| Hot Start | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Förblandat/Kit | Kit (med mix) | Kit (med mix) | Kit (med Mix+buffert) | Kit (med mix) |
Produktfördelar
Det modifierade Taq DNA-polymeraset är garantin för Direct PCR: Det har supertolerans mot inhibitorer.
När icke-renade prover används som mallar, introduceras många komponenter som hämmar PCR-reaktioner. Det är svårt att uppnå idealiska resultat, eller till och med omöjligt att utföra PCR-amplifiering, med vanliga PCR-reaktionssystem och Taq DNA-polymeras. PCR-mixen i denna serie av kit är en formeloptimerad premix, som använder ett modifierat Taq DNA-polymeras, vilket ökar bindningsförmågan till mall-DNA och har högre tolerans mot vanliga PCR-hämmare, vilket har en bredare mallanpassningsförmåga.
Fig.4 PCR-blandningen i Direct PCR-kitet har en högre tolerans mot föroreningar. Samma mängd mall används för PCR med olika PCR-blandningar, och olika koncentrationer av PCR-reaktionshämmare tillsätts till systemet. Mängden PCR-produkter under olika förhållanden jämförs.
YLÄTTA har utvecklat en serie produkter för olika prover:
- I. Gnagarspecifik typ: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)
Tillämpliga prover: Musvävnader (som mussvans, musöra, mustå, etc.)
- Hög förstärkningseffektivitet (längd, hastighet, GC-kompatibilitet)
Fig.5 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus amplifierar lysat från olika vävnader. 1: Plasmid; 2: Musöra; 3: Mussvans; 4: Lever. Lysförhållanden: 70°C lys i 10 min, 95°C inaktivering i 5 min. Målfragmenten är 1 kb, 2 kb, 3 kb och 6 kb, med förlängningstider inställda på 3, 5, 10 respektive 20 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Bred mallkompatibilitet (10189ES)
Fig. 6 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus användes för att direkt lysera (70°C i 10 minuter) och amplifiera humana 293-celler (1), saliv (2) och hårbottenvävnad (3). Alla prover visade tydliga målband, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Multi-species Blood Universal Type: Blood Advanced Direct PCR Kit (10188ES)
- Förstärkningslängd upp till 8 kb
Fig. 7 DNA-fragment av varierande längd amplifierades direkt från humant helblod med användning av Blood Advanced Direct PCR Kit. Blodproverna lagrades vid -20 ℃ med EDTA som antikoagulant. Blodmallens koncentration var 10 % och förlängningstiden sattes till 10 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Hög tolerans
Fig. 8 A: Blood Advanced Direct PCR Kit används för att amplifiera ett 2 kb DNA-fragment med en GC-halt på 71 % direkt från humant EDTA-antikoagulerat helblod. Blodmallens koncentration är gradientinställd från 0,5-50 %, och förlängningstiden är inställd på 10 sek/kb. B: Blood Advanced Direct PCR Kit används för att amplifiera ett 2,2 kb DNA-fragment med ett GC-innehåll på 67 % direkt från mus EDTA-antikoagulerat helblod. Blodmallens koncentration är inställd från 0,5-50 %, och förlängningstiden är 10 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Växtspecifik typ: Plant Tissue Direct PCR Kit (10187ES)
- Verifierad med flera typer av växtprover
Fig. 9 Direkt amplifiering resulterar från bladvävnader från olika typer av växter. M: 100 bp DNA-stege. C: Renat genomiskt DNA från motsvarande växter som mall. 1-2: Lövvävnadslysat som mall. Antal cykler: 30 cykler.
Kundcase
- I. Identifiering av musgenotyp
Ett biologiskt företag i Guangzhou:
Fig. 10 Amplifiering av mussvans med användning av Mouse Direct PCR Kit (10189ES). Målgen: 500 bp; Lyseringstid: 10 min; PCR-reaktionssystem: 25 μL, förlängningstid: 5 sek/kb.
- II.Rice Gene Direct Amplifiering
XX Universitet
Fig.11 Plant Direct PCR Kit (10187ES) används för att amplifiera gener relaterade till ris.
Rupprymd Pprodukter
| Produktpositionering | Produktnamn | Produktnummer | Produktspecifikation |
| Högkvalitativ agaros | 10208ES60/76 | 100 g/500 g | |
| Nukleinsyrafläckar (Under UV-ljus) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Snabb PCR-uppgradering, kan vara koloni-PCR och lämplig för komplex mallförstärkning | 10167ES03/08 | 1 ml/5×1 ml |