ภาพรวม

DNA ที่เหลือจากเซลล์โฮสต์เป็นสิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการซึ่งเกี่ยวข้องกับการผลิตสารชีวภาพ ซึ่งไม่เพียงแต่ลดประสิทธิภาพของสารชีวภาพเท่านั้น แต่ยังอาจก่อให้เกิดปัญหาความปลอดภัย เช่น การติดเชื้อหรือการก่อมะเร็ง ดังนั้น หน่วยงานกำกับดูแลในหลายประเทศจึงได้กำหนดขีดจำกัดปริมาณ DNA ที่เหลือในสารชีวภาพ

แนวทางปัจจุบันของ WHO และ FDA แนะนำให้ใช้ DNA ที่เหลืออยู่ในผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปไม่เกิน 10 นาโนกรัมต่อโดส และ FDA ยังระบุด้วยว่า DNA ที่เหลืออยู่ใน DNA ของเซลล์โฮสต์ของผลิตภัณฑ์ชีวภาพไม่ควรเกิน 100 พิกกะกรัมต่อโดส หลักการทั่วไปของตำรายาแห่งยุโรประบุว่าขีดจำกัดของ DNA ที่เหลืออยู่ส่วนใหญ่ในผลิตภัณฑ์ชีวภาพไม่ควรเกิน 10 นาโนกรัมต่อโดส แต่ขีดจำกัดของ DNA ที่เหลืออยู่ในวัคซีนแต่ละชนิดนั้นเข้มงวดกว่า เช่น DNA ที่เหลืออยู่ในวัคซีนที่ทำให้ไม่ทำงานเพื่อป้องกันโรคตับอักเสบเอไม่ควรเกิน 100 พิกกะกรัมต่อโดส และ DNA ที่เหลืออยู่ในวัคซีนป้องกันโรคตับอักเสบบีไม่ควรเกิน 10 พิกกะกรัมต่อโดส ตำรายาจีนฉบับปี 2020 ตอนที่ 3 กำหนดว่าปริมาณตกค้างของ DNA ในการเตรียมสารชีวภาพที่ผลิตบนเมทริกซ์เซลล์ไม่ควรเกิน 100 pg ต่อโดส และปริมาณตกค้างของ DNA ในวัคซีนที่ผลิตบนเมทริกซ์แบคทีเรียหรือเชื้อราไม่ควรเกิน 10 ng ต่อโดส

นอกจากนี้ สำหรับวิธีการตรวจสอบสารตกค้างของ DNA จากภายนอก ตำรายาแห่งชาติยังให้คำแนะนำอีกด้วย ตำรายาสหรัฐอเมริกาฉบับปี 2017 ของ USP40-NF35 General Provision 1130 อธิบายวิธีการ 3 วิธีสำหรับการตรวจสอบสารตกค้างของ DNA จากภายนอก ได้แก่ การผสมพันธุ์ของ DNA โพรบ วิธีเกณฑ์ และวิธีการ PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ ตำรายายุโรปเสนอ PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์และวิธีการอิมมูโนเอ็นไซม์ ซึ่งเป็นวิธีการวิเคราะห์ที่ละเอียดอ่อน 2 วิธีสำหรับการวัดปริมาณ DNA ที่เหลือในเซลล์โฮสต์ ตำรายาจีนฉบับปี 2020 ของกฎทั่วไป 3 ประการ 3407 ยังกำหนดด้วยว่าวิธีการตรวจจับสารตกค้างของ DNA ของเซลล์โฮสต์ ได้แก่ การผสมพันธุ์ของ DNA โพรบ การย้อมฟลูออเรสเซนต์ และ PCR เชิงปริมาณ

ในบรรดาวิธีเหล่านี้ วิธี qPCR มีความไว ความจำเพาะของลำดับ และความแม่นยำสูงมาก ซึ่งสามารถให้วิธีการตรวจจับที่เชื่อถือได้สำหรับอุตสาหกรรมเภสัชชีวภาพในการวิจัยกระบวนการและการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป และได้กลายเป็นวิธีการตรวจจับที่ผู้ผลิตผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพแต่ละรายต้องการในปัจจุบัน

Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพ ชุดตรวจหาสารตกค้างใน DNA

อาศัยหลักการของโพรบเรืองแสง qPCR Yeasen ได้พัฒนาชุดตรวจจับ DNA ตกค้างของเซลล์โฮสต์แบบรวดเร็วและเฉพาะทาง ได้แก่ CHO, HEK293, E.coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris และอื่นๆ ชุดตรวจจับเหล่านี้ให้การตรวจจับ DNA ตกค้างแบบเฉพาะทางและรวดเร็วในผลิตภัณฑ์ขั้นกลาง กึ่งสำเร็จรูป และสำเร็จรูประหว่างการพัฒนาและการผลิตผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพ เช่น ยาแอนติบอดี ผลิตภัณฑ์บำบัดเซลล์และยีน ยาโปรตีนรีคอมบิแนนท์ และวัคซีน

คุณสมบัติ

ความไวสูง: พัฒนาโดยใช้หลักการ qPCR โดยใช้ฟลูออเรสเซนต์โพรบที่มีค่า LLOD ต่ำถึง 005fg/µL;

ความแม่นยำสูง: ตัวอย่างการฟื้นตัวของการเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในช่วง 70%~130%

ความจำเพาะสูง: ไม่มีปฏิกิริยาไขว้กับ DNA ที่ไม่เกี่ยวข้อง จึงลดผลบวกปลอมในการตรวจจับ

การปฏิบัติตามกฎระเบียบ: ผ่านการตรวจสอบอย่างสมบูรณ์ตาม Chp, USP, ICHQ2(R1) และข้อกำหนดอื่นๆ ประสิทธิภาพเป็นไปตามมาตรฐานการกำกับดูแลของจีนและต่างประเทศ

ให้ความร่วมมือกับการตรวจสอบ: การผลิตผลิตภัณฑ์เป็นไปตามมาตรฐานระบบคุณภาพ ISO13485 พร้อมเอกสารตรวจสอบที่สมบูรณ์แบบ

รับประกันคุณภาพ: วัตถุดิบของชุดทั้งหมดได้รับการพัฒนาอย่างอิสระ และ qPCR Mix และผลิตภัณฑ์เอนไซม์อื่นๆ ผลิตในโรงงานผลิตเอนไซม์ที่สะอาดพิเศษ

แอปพลิเคชัน

การตรวจจับสิ่งเจือปนที่เหลือของเซลล์โฮสต์ด้วยแอนติบอดี
วัคซีนการตรวจจับสิ่งเจือปนที่เหลือจากเซลล์โฮสต์
การตรวจจับสิ่งเจือปนที่เหลือของเซลล์โฮสต์จากยาโปรตีนรีคอมบิแนนท์

ยาบำบัดด้วยยีน-เซลล์ การตรวจจับสิ่งเจือปนที่เหลือของเซลล์โฮสต์

ข้อมูลจำเพาะ

โปรแกรมทดสอบและตรวจสอบ		มาตรฐานอ้างอิงหรือข้อกำหนด	เอ็นโอเต
1. มาตรฐานชุดอุปกรณ์ (มาตรฐานอ้างอิง)		การเปรียบเทียบมาตรฐานระดับชาติ หรือมาตรฐานที่เตรียมไว้
2. ลหูหนวก อาร์แองเจ	ขอบเขตของเส้นโค้งมาตรฐาน	อ้างอิงจากคู่มือหรือสถานการณ์จริง (เช่น 30fg/μL~300pg/μL)
	อาร์²	≥0.98 (ปล.Yeasen ชุด≥0.99）	ข้อกำหนดสำหรับ HCD ในตำรายาจีน 2020 ฉบับที่ 3407 บทบัญญัติทั่วไป
	ความลาดชัน	-3.1~-3.8 (ปล.Yeasen ชุด -3.1~-3.6）	ข้อกำหนดสำหรับ HCD ในตำรายาจีน 2020 ฉบับที่ 3407 บทบัญญัติทั่วไป
	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	90%~110%（（Psความลาดชันที่สอดคล้องกัน -3.1~-3.6 ข้อกำหนดภายในอุตสาหกรรม
3. เอความแม่นยำ	การเบี่ยงเบนจากมาตรฐานดีเอ็นเอแห่งชาติ	＜15%
3. เอความแม่นยำ	ตัวอย่างอัตราการฟื้นตัวของการพุ่งสูง	50%~150%（ข้อกำหนดภายในอุตสาหกรรม 70~130%)	ข้อกำหนดสำหรับ HCD ในตำรายาจีน 2020 ฉบับที่ 3407 บทบัญญัติทั่วไป
4. พีการแก้ไข	ทำซ้ำได้	ซีวี <15%
4. พีการแก้ไข	ความแม่นยำระดับกลาง	ซีวี <15%
5. สความพิเศษ		ไม่รบกวนกับดีเอ็นเอจากภายนอก
6. ลการเลียนแบบการวัดปริมาณ		ระดับ fg/μL
7. สความสามารถในการวางตัว	การแช่แข็งและการละลายซ้ำๆ	10 ครั้ง
	เสถียรภาพการเร่งความเร็ว	2~8℃ 30 วัน, 37℃ 14 วัน
	ระยะเวลาใช้งาน	-20°C เก็บรักษาได้ 2 ปี

ตัวเลข

ความไวสูง: LLOQ ต่ำถึง 0.3 fg/µL, LLOD ต่ำถึง 0.05 fg/µL

1.ช่วงเชิงเส้นของชุดตรวจจับ DNA ที่เหลือของเซลล์โฮสต์ CHO (3G) คือ 3fg/μL~300pg/μL, R²=1 ประสิทธิภาพการขยายคือ 99.29% และ CV ของค่าการตรวจจับของแต่ละความเข้มข้นคือ <15%

รูปที่ 1 กราฟการสอบเทียบ DNA ของ CHO (3G) (ซ้าย) และการทำแผนที่เชิงเส้นของเส้นโค้งการขยาย (ขวา)

2. ตรวจจับ CHO DNA (3G) ที่จุดความเข้มข้นต่ำสุดของเพลงมาตรฐานที่ความเข้มข้น 3fg/uL และต่ำกว่า โดยทำซ้ำ 10 ครั้งต่อความเข้มข้น ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าที่ความเข้มข้น 0.3 fg/uL ขึ้นไป CV น้อยกว่า 20% กล่าวคือ ขีดจำกัดของการวัดปริมาณของ CHO Host Cell DNA Residue Assay Kit (3G) อยู่ที่ 0.3 fg/uL

3. ตรวจจับ CHO DNA (3G) ที่ความเข้มข้น 0.3 fg/μL และต่ำกว่าที่ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (LOQ) 20 ซ้ำต่อความเข้มข้น ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าอัตราการตรวจจับของหลุมจำลอง 20 หลุมที่ความเข้มข้น 0.05fg/μL ขึ้นไปอยู่ที่ ≥19 (กล่าวคือ อัตราการตรวจจับอยู่ที่ ≥95%) กล่าวคือ ขีดจำกัดการตรวจจับของชุดตรวจจับ CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) สามารถไปถึง 0.05fg/μL ได้

รูปที่ 3 ผลการทดสอบ qPCR ของ CHO DNA (3G) 0.05fg/μL

ความจำเพาะสูง: ไม่มีปฏิกิริยาร่วมกับดีเอ็นเอของเซลล์โฮสต์อื่น

การประเมินการรบกวนของดีเอ็นเอจีโนมของสปีชีส์หนูที่มีความสัมพันธ์สูงกับดีเอ็นเอของ CHO (3G) เช่นเดียวกับดีเอ็นเอจีโนมของเซลล์ที่มักใช้ในการผลิตยาชีวภาพกับรีเอเจนต์ตรวจจับดีเอ็นเอของ CHO พบว่ากราฟการขยายของกลุ่มรบกวนและกลุ่มควบคุมทับซ้อนกันและไม่พบการรบกวน (กราฟต่อไปนี้แสดงข้อมูลการรบกวนของดีเอ็นเอจีโนมของหนู HEK293 และดีเอ็นเอของ E.coli กับรีเอเจนต์ตรวจจับดีเอ็นเอของ CHO ตามลำดับ)

รูปที่ 4.ผลการทดลองการรบกวนด้วยชุด CHO DNA (3G)

ข้อมูลสินค้า

การแบ่งประเภท	หมายเลขสินค้า	ชื่อสินค้า	ข้อมูลจำเพาะ
ตัวอย่างการเตรียมการก่อนการผลิต	18461ES	ชุดเตรียมตัวอย่าง DNA ตกค้างแม่เหล็ก MolPure®	25ตัน/100ตัน
ตัวอย่างการเตรียมการก่อนการผลิต	18467ES	ชุดเตรียมตัวอย่าง MolPure® Mag48 FN	3×16ตัน/6×16ตัน
เครื่องมือสกัดกรดนิวคลีอิก	80511ES	เครื่องสกัดกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติ 48 ช่อง	48 ฟลักซ์
การตรวจจับดีเอ็นเอที่ตกค้าง	41307ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ Vero (2G)	50ตัน/100ตัน
	41308ES	ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ E.coli (2G)	50ตัน/100ตัน
	41310ES	ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA SV40LTA&E1A	50ตัน/100ตัน
	41317ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ Hansenula polymorpha	50ตัน/100ตัน
	41319ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ MDCK	50ตัน/100ตัน
	41323ES	ชุดตรวจหาสารตกค้างของพลาสมิด DNA	50ตัน/100ตัน
	41324ES	ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ S. cerevisiae	50ตัน/100ตัน
	41325ES	ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ของมนุษย์	50ตัน/100ตัน
	41328ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ Pichia pastoris	50ตัน/100ตัน
	41330ES	ชุดตรวจหาสารตกค้างใน DNA ของ SF9 และแบคูโลไวรัส	50ตัน/100ตัน
	41331ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ HEK293（3G）	50ตัน/100ตัน
	41332ES	ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ CHO（3G）	50ตัน/100ตัน

บทความก่อนหน้า บทความถัดไป

ชุดตรวจจับ DNA ที่มีความไวสูงระดับ FG และส่วนที่เหลือสำหรับการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์ชีวภาพ