ÇÖP Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G)
Nitelik Özeti (Kat No.: 41332(ES60)
- Arka plan
Bu raporda özetlenen veriler Yeasen Biotechnology tarafından CHO için gerçekleştirilmiştir. Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G) ürünü. Özet veriler yalnızca kullanıcının referansı içindir ve kullanıcının konak hücre kalıntısını doğrulaması gerekir DNA yöntemi, kullanıcının gereksinimlerini karşılayabildiğini doğrulamak için kendi örneklerini kullanarak. Bu kiti kullanan tüm laboratuvarların aşağıdaki parametreleri doğrulamaları önerilir: Doğrusallık, Aralık, Doğruluk, Hassasiyet, Kantitasyon Sınırı, Özgüllük ve Sağlamlık.
Yeasen Biotechnology bu kit için detaylı yeterlilik raporu sağlayabilir. Kullanıcı bu raporu kullanırsa, yalnızca uygunluk (Hassasiyet dahil) Kesinlik ve Özgüllük) doğrulanmalıdır.
- Deneysel materyaller ve yöntemler
2.1 ÇÖP Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G), Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 41332ES60.
2.2 MolPure Manyetik Kalıntı DNA Örnek Hazırlama Kiti, Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 18461ES60.
2.3 Orijinal veriler: Elektronik versiyon 'Deney Raporu'nda kaydedildi ana dosyanın alt dosyası ÇÖP Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G).
2.4 Yöntemler: Deneyde kullanılan malzemeler ve çalışma yöntemleri temel olarak Yeasen Biotechnology tarafından üretilmiş veya belirlenmiş olup, uzun süredir değerlendirilmiş ve doğrulanmıştır, kit geliştirme ve üretimi ISO 13485 sistemini takip etmektedir.
- Nitelik içerikleri ve sonuçları
3.1 Algılama aralığı
Kitin doğrusal aralığı R ile 3 fg/μL~300 pg/μL idi2=1 ve her konsantrasyon testi için amplifikasyon verimliliği CV<%15 ile %99,09 idi.
Şekil 1 CHO DNA (3G) qPCR Standart Eğrisi
3.2 Doğruluk
3.2.1 Rgeri kazanım
3.2.1.1 Boş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi
CHO örnekleri Yüksek ve düşük konsantrasyonlarda DNA standartları: 30 pg/μL, 300 fg/μL ve 3 fg/μL sırasıyla hazırlandı ve Kalan DNA Örneği Ön İşlem Kiti (3) için Manyetik Boncuk Yöntemi kullanılarak çıkarıldıktan sonra analiz edildi Her numune için ekstraksiyon tekrarları yapıldı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı ve numune geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.
Farklı DNA örnek konsantrasyonları için geri kazanımlar %70 ile %130 arasında değişirken, CV'lerin hepsi %20'nin altındaydı.
| Örnek türü | Teorik Konsantrasyon | 1 ortalamasını çıkar | 2. ortalamayı çıkar | 3. ortalamayı çıkar | Ortalama konsantrasyon | Özgeçmiş | İyileşmek |
| Boş Örnek | / | / | / |
| / | / | / |
| Kurtarma örneği 1 | 30 pg/μL | 27.07 | 27.51 | 28.27 | 27.62 | 2.20% | %92,06 |
| Kurtarma örneği 2 | 300 fg/μL | 285,53 | 301.25 | 295,71 | 294.16 | 2,71% | %98,05 |
| Kurtarma örneği 3 | 3 fg/μL | 3.50 | 3.54 | 3.31 | 3.45 | 3.56% | 115,00% |
Tablo1 Boş Örnek Spiking Kurtarma
3.2.1.2 Simüle Edilmiş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi
Aynı konsantrasyondaki (300 fg/μL CHO DNA) örnekler, 5 farklı arka plan solüsyonuyla (yüksek protein, yüksek nükleik asit, yüksek ve düşük pH, yüksek tuz) çıkarıldı (her örnek için 3 ekstraksiyon tekrarı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı) ve örnek geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.
Farklı arka plan çözümleri için DNA örneği kurtarma oranları %70 ile %130 arasında değişirken, tüm CV'ler %20'nin altındaydı.
| Örnek türü | Teorik Konsantrasyon | 1 ortalamasını çıkar | 2. ortalamayı çıkar | 3. ortalamayı çıkar | Ortalama konsantrasyon | Özgeçmiş | İyileşmek |
| Temel Örnek | / | / | / |
| / | / | / |
| Yüksek Protein | 300 fg/μL | 302.29 | 332,86 | 342,76 | 325,97 | 6.47% | 108.66% |
| Yüksek Nükleer Asit | 284.47 | 290.66 | 308,76 | 294.63 | 4.28% | %98,21 | |
| Yüksek tuzlu | 272,96 | 286,25 | 312.91 | 290,71 | 7.00% | 96.%90 | |
| Yüksek pH | 296.04 | 320.58 | 324.56 | 313,72 | 4.92% | 104.57% | |
| Düşük pH | 314,77 | 327,89 | 340.26 | 327.64 | 3.89% | 109.21% |
Tablo2 Temel Örnek Spiking Kurtarma
3.3 Hassasiyet
3.3.1 Tekrarlanabilirlik
CHO DNA standartları için 3 fg/μL konsantrasyonda ve CV < %15 olacak şekilde deneyi 10 kez tekrarlayın.
| Tekrarlar | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Anlam | ÖZGEÇMİŞ% |
| Tespit Değeri (fg/μL) | 3.13 | 3.26 | 2,89 | 3.16 | 2,95 | 2,87 | 2,88 | 2,75 | 2,87 | 3.15 | 2,99 | 5.65% |
Tablo3 Tekrarlanabilirlik Sonuçları
3.3.2 Orta düzey hassasiyet
Üç deneyci, CHO DNA standart örneklerini yüksek ve düşük konsantrasyonlarda (300 pg/μL, 3 pg/μL ve 3 fg/μL) bağımsız olarak test etti ve her konsantrasyon için üç tekrar yapıldı ve elde edilen dokuz verinin CV'leri %15'in altındaydı.
| Deneyim |
Gerçek Konsantrasyon Teorik Konsantrasyon | ÇÖZÜM DNA'SI (3G) | ||
| 300 pg/uL | 3 pg/uL | 3 fg/uL | ||
| Deney 1 | Karar 1 | 302.63 | 2,97 | 3.40 |
| Karar 2 | 294.54 | 3.01 | 3.14 | |
| Karar 3 | 287.67 | 2,99 | 3.01 | |
| Deney2 | Kararlılık 4 | 292.27 | 2,92 | 3.47 |
| Kararlılık 5 | 299,61 | 2.90 | 2,82 | |
| Kararlılık 6 | 305,73 | 2,93 | 2.90 | |
| Deney 3 | Kararlılık 7 | 301.06 | 3.17 | 3.15 |
| Kararlılık 8 | 299,17 | 3.00 | 3.21 | |
| Kararlılık 9 | 290.66 | 2.90 | 3.05 | |
| / | Anlam | 297.04 | 2,98 | 3.13 |
| / | ÖZGEÇMİŞ% | 2.03 | 2.80 | 6.85 |
Tablo4 Ara kesinlik Sonuçları
3.4 Spesifiklik
Biyolojik ürünlerin üretiminde yaygın olarak kullanılan hücresel genomik DNA'nın CHO DNA tespit reaktifleri ile etkileşimi değerlendirilmiş ve etkileşim grubu kontrol grubu ile örtüşmüş olup herhangi bir etkileşim görülmemiştir (aşağıdaki şekil sırasıyla Fare, MDCK, HEK293 ve E. coli genomik DNA'larının CHO DNA tespit reaktifleri ile etkileşim verilerini göstermektedir).
Şekil 2 Girişim deneyi sonuçları
3.5 Miktar Belirleme Sınırı
CHO DNA'sı 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0,5 fg/μL, 0,3fg/uL ve 0,1 fg/μL'de, her konsantrasyon için 10 tekrarla tespit edildi. Sonuçlar, CV'nin 0,3 fg/μL ve üzeri konsantrasyonlarda <%20 olduğunu gösterdi. Yani, CHO konak hücre DNA kalıntısı tespit kitinin (3G) kantifikasyon sınırı 0,3 fg/μL idi.
|
Tekrarlar Test Öğesi | CHO DNA'sı (3G) (fg/μL) | |
| Miktar | Yeniden Hesaplama Oranı% | |
| 1 | 0,28 | %93,33 |
| 2 | 0,26 | 86.67% |
| 3 | 0,32 | 106.67% |
| 4 | 0,30 | 100,00% |
| 5 | 0,33 | 110,00% |
| 6 | 0,23 | 76.67% |
| 7 | 0,29 | %96,67 |
| 8 | 0,37 | 123.33% |
| 9 | 0,31 | 103.%33 |
| 10 | 0,28 | %93,33 |
| Anlam | 0,30 | / |
| ÖZGEÇMİŞ% | 13.09% | / |
Şekil 3. CHO DNA (3G) qPCR Test Sonucu
3.6 Algılama Sınırı
CHO DNA'sı 0,3 fg/μL, 0,1 fg/μL, 0,05 fg/μL ve 0,01 fg/μL'de, her konsantrasyon için 20 tekrarla tespit edildi. Sonuçlar, tespit oranının 0,05 fg/μL ve üzeri konsantrasyonlarda 20 tekrar kuyusunda ≥19 (yani, tespit oranı ≥%95) olduğunu gösterdi. Yani, CHO konak hücre DNA kalıntısı tespit kitinin (3G) tespit sınırı 0,05 fg/μL idi.
Şekil 4. CHO DNA (3G) qPCR Test Sonucu
3.7 Sağlamlık
Bu kit aşağıdaki aletler için test edilmiş olup, bunlarla sınırlı olmamak üzere uygundur:
| Satıcı | Enstrüman Modelleri | Amplifikasyon Verimlilikleri | R2 | Nicelleştirme sınırı | Özgeçmiş | Tespit Sınırı | Tespit Oranı |
| Termo | ABİ 7500 | %99,69 | 1 | 0,3 fg/μL | 12.40% | 0,05 fg/μL | %95,65 |
| Termo | ABI QuantStudio5 | %99,26 | 1 | 0,3 fg/μL | 15.30% | 0,05 fg/μL | 100,00% |
| Roche | Işık Döngüsü480 | 2,05% | 0,978 | 0,3 fg/μL | / | 0,05 fg/μL | / |
| Şanghay Hongshi | SLAN | 101.14% | 0,999 | 0,3 fg/μL | 14.41% | 0,05 fg/μL | %95,65 |
Tablo 5 Enstrüman uygunluk test sonuçları
3.8 Kararlılık
3.8.1 Donma-çözülme kararlılığı
CHO Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G), 10 kez tekrarlanan dondurma ve çözme işlemiyle test edildi ve kitin performansı etkilenmedi.
|
Test Göstergeleri Donma-çözülme Süreleri | Parametre | T0 zamanı | 10 kez dondurup çözün |
| Standart Eğri Parametresi | Amplifikasyon Verimlilikleri | %95,70 | %98,62 |
| R2 | 1 | 1 | |
| Miktar Belirleme Sınırı (0,3 fg/μL) | Özgeçmiş | 15.31% | 17.16% |
| Tespit Sınırı (0,05 fg/μL) | Tespit Oranı | %95,65 | %100 |
Tablo 6 Donma-çözülme kararlılığı sonuç analizi
3.7.2 Hızlandırılmış Stabilite
CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) sırasıyla 30 gün boyunca 2~8°C'de ve 14 gün boyunca 37°C'de saklandı. Kitin performansından hiçbiri etkilenmedi.
|
Test Göstergeleri İvme Sıcaklık ve Zaman | Parametre | Deney 1 | Deney 2 | ||
| T0 zamanı | 2~8℃ 30 Günler | T0 zamanı | 37℃ 14 Gün | ||
| Standart Eğri Parametresi | Amplifikasyon Verimlilikleri | 100,53% | 102.61% | 101,76% | 101.84% |
| R2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| Miktar Belirleme Sınırı (0,3 fg/μL) | Özgeçmiş | 17.16% | 12.63% | 16.27% | 12.49 |
| Tespit Sınırı (0,05 fg/μL) | Tespit Oranı | %95,65 | %100 | %95,57 | %100 |
Tablo 7 Hızlandırılmış kararlılık sonuç analizi
3.9 Boşluğun Sınırı
3.9.1 Şablon Kontrolü Yok (NTC)
Şablon kontrolü (NTC) yapılmadan 96 tekrarlı DNA dilüsyonu yapılarak qPCR kantitatif analizi yapıldı, test edilen 96 tekrarlı kuyunun üzerindeki tüm CT değerleri >40 idi.
Şekil 5 NTC deney sonuçları
3.9.2 Negatif Ekstraksiyon Kontrol Örneği (NCS)
Negatif Ekstraksiyon Kontrol Örneği (NCS) DNA seyreltmesiydi ve önce numune ön işlemiyle ekstrakte edildi, ardından qPCR yapıldı, test edilen 48 tekrar kuyusunun üzerindeki tüm CT değerleri >40 idi.
Şekil 6 NCS deney sonuçları
- 4.Referans
4.1 Çin Farmakopesi Komisyonu (ChPC). Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi (Cilt Ⅲ) [S]. Pekin：Çin Tıbbi Bilim ve Teknoloji Basını，s.542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Biyolojik Ürünlerin Kalite Kontrolü için Analitik Yöntem Doğrulamasının Teknik İncelemesine İlişkin Genel İlkeler.
4.3 ICH(2022)《Analitik yöntem doğrulaması Q2》, taslak sürüm.
Sipariş Bilgileri
| Tanım | Parça Numarası |
| 41332ES | |
| 41331ES | |
| 41307ES | |
| 41308ES | |
| 18461ES | |
| MycAway™ Mikoplazma qPCR Tespit Kiti (2G) | 40619ES |