HEK293 Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G)
Nitelik Özeti (Kat No.: 4)1331(ES60)
- Arka plan
Bu raporda özetlenen veriler Yeasen Biotechnology tarafından 'HEK293' için gerçekleştirilmiştir. Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G)' Ürün. Özet veriler yalnızca kullanıcının referansı içindir ve kullanıcının konak hücre kalıntısını doğrulaması gerekir DNA yöntemi, kullanıcının gereksinimlerini karşılayabildiğini doğrulamak için kendi örneklerini kullanarak. Bu kiti kullanan tüm laboratuvarların aşağıdaki parametreleri doğrulamaları önerilir: Doğrusallık, Aralık, Doğruluk, Hassasiyet, Kantitasyon Sınırı, Özgüllük ve Sağlamlık.
Yeasen Biotechnology bu kit için detaylı yeterlilik raporu sağlayabilir. Kullanıcı bu raporu kullanırsa, yalnızca uygunluk (Hassasiyet dahil) Kesinlik ve Özgüllük) doğrulanmalıdır.
- Deneysel materyaller ve yöntemler
2.1 HEK293 Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G), Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 41331ES60.
2.2 MolPure® Manyetik Kalıntı DNA Örnek Hazırlama Kiti, Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 18461ES60.
2.3 Orijinal veriler: Elektronik versiyon 'Deneysel Rapor'da kaydedildi 'HEK293' ana dosyasının alt dosyası Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G)'.
2.4 Yöntemler: Deneyde kullanılan malzemeler ve çalışma yöntemleri temel olarak Yeasen Biotechnology tarafından üretilmiş veya belirlenmiş olup, uzun süredir değerlendirilmiş ve doğrulanmıştır, kit geliştirme ve üretimi ISO 13485 sistemini takip etmektedir.
- Nitelik içerikleri ve sonuçları
3.1 Algılama aralığı
Kitin doğrusal aralığı R ile 30 fg/μL~300 pg/μL idi2≥0,998 ve amplifikasyon verimliliği her konsantrasyon testi için CV<%15 ile %90~%110 aralığındaydı.
Şekil 1 HEK293 DNA (3G) qPCR Standart Eğrisi
3.2 Doğruluk
3.2.1 Rgeri kazanım
3.2.1.1 Boş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi
HEK293 örnekleri Yüksek ve düşük konsantrasyonlarda DNA standartları: 300 pg/μL, 3 pg/μL ve 30 fg/μL sırasıyla hazırlandı ve Manyetik Boncuk Yöntemi ile Kalıntı DNA Örneği Ön İşlem Kiti kullanılarak ekstraksiyondan sonra analiz edildi (her örnek için 2 ekstraksiyon tekrarı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı) ve örnek geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.
Farklı DNA örnek konsantrasyonları için geri kazanımlar %70 ile %130 arasında değişirken, CV'lerin hepsi %20'nin altındaydı.
| Örnek türü | Teorik Konsantrasyon | 1 ortalamasını çıkar | 2. ortalamayı çıkar | Ortalama konsantrasyon | Özgeçmiş | İyileşmek |
| Boş Örnek | / | / | / | / | / | / |
| Kurtarma örneği 1 | 300 pg/μL | 306.81 pg/μL | 279,57 pg/μL | 293,82 pg/μL | 6.56% | %97,94 |
| Kurtarma örneği 2 | 3 pg/μL | 3.11 pg/μL | 2,99 pg/μL | 3.09 pg/μL | %2,75 | 103,00% |
| Kurtarma örneği 3 | 30 fg/μL | 31.02 fg/μL | 30.63 fg/μL | 30.83 fg/μL | 0,89% | 102,77% |
Tablo1 Boş Örnek Spiking Kurtarma
3.2.1.2 Simüle Edilmiş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi
Aynı konsantrasyondaki örnekler (3 pg/μL HEK293 DNA) 5 farklı arka plan solüsyonuyla (yüksek protein, yüksek nükleik asit, yüksek ve düşük pH, yüksek tuz) çıkarıldı (her örnek için 2 ekstraksiyon tekrarı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı) ve örnek geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.
Farklı arka plan çözümleri için DNA örneği kurtarma oranları %70 ile %130 arasında değişirken, tüm CV'ler %20'nin altındaydı.
| Örnek türü | Teorik Konsantrasyon | 1 ortalamasını çıkar | 2. ortalamayı çıkar | Ortalama konsantrasyon | Özgeçmiş | İyileşmek |
| Temel Örnek | / | / | / | / | / | / |
| Yüksek Protein | 3 pg/μL | 2.65 | 2.80 | 2,73 | 3.80% | %90,87 |
| Yüksek Nükleer Asit | 2,82 | 2,97 | 2.90 | 3.71% | %96,58 | |
| Yüksek tuzlu | 2,88 | 2,70 | 2,79 | 4.47% | %92,89 | |
| Yüksek pH | 2.81 | 2,93 | 2,87 | 2,98% | %95,71 | |
| Düşük pH | 2.76 | 2,79 | 2,77 | 0,99% | %92,48 |
Tablo2 Temel Örnek Spiking Kurtarma
3.3 Hassasiyet
3.3.1 Tekrarlanabilirlik
HEK293 DNA standartları için 30 fg/μL konsantrasyonda ve CV < %15'lik bir değerde deneyi 10 kez tekrarlayın.
| Tekrarlar | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Anlam | ÖZGEÇMİŞ% |
| Tespit Değeri (fg/μL) | 29.51 | 30.02 | 30.13 | 30.16 | 27,99 | 31.01 | 31.05 | 30.95 | 31.02 | 29.86 | 30.17 | 3.15% |
Tablo3 Tekrarlanabilirlik Sonuçları
3.3.2 Orta düzey hassasiyet
Üç deneyci, HEK293 DNA standart örneklerini yüksek ve düşük konsantrasyonlarda (300 pg/μL, 3 pg/μL ve 30 fg/μL) bağımsız olarak test etti ve her konsantrasyon için üç tekrar yapıldı ve elde edilen dokuz verinin CV'leri %15'in altındaydı.
| Deneyim |
Gerçek Konsantrasyon Teorik Konsantrasyon | HEK293 DNA'sı (3G) | ||
| 300 pg/uL | 3 pg/uL | 30 fg/uL | ||
| Deney 1 | Karar 1 | 319.58 | 3.026 | 32.02 |
| Karar 2 | 309,76 | 3.051 | 37.01 | |
| Karar 3 | 309.24 | 3.067 | 36.03 | |
| Deney 2 | Kararlılık 4 | 308.34 | 2.909 | 29.91 |
| Kararlılık 5 | 308.54 | 2.9 | 29.67 | |
| Kararlılık 6 | 305,83 | 2.921 | 28.85 | |
| Deney 3 | Kararlılık 7 | 299,11 | 3.035 | 29.36 |
| Kararlılık 8 | 300.07 | 2.833 | 31.14 | |
| Kararlılık 9 | 302.03 | 3.033 | 33.07 | |
| / | Anlam | 306,95 | 2.975 | 31.90 |
| / | ÖZGEÇMİŞ% | 2,03% | 2.83% | %9.26 |
Tablo4 Ara kesinlik Sonuçları
3.4 Spesifiklik
Biyolojik ürünlerin üretiminde yaygın olarak kullanılan hücresel genomik DNA'nın HEK293 DNA tespit reaktifleri ile etkileşimi değerlendirilmiş ve etkileşim grubu kontrol grubu ile örtüşmüş olup herhangi bir etkileşim görülmemiştir (aşağıdaki şekil sırasıyla CHO, E. coli ve Pichia Pastoris genomik DNA'larının HEK293 DNA tespit reaktifleri ile etkileşim verilerini göstermektedir).
Şekil 2 Girişim deneyi sonuçları
3.5 Miktar Belirleme Sınırı
HEK293 DNA'sı 30 fg/μL, 20 fg/μL, 10 fg/μL ve 5 fg/μL'de, her konsantrasyon için 10 tekrarla tespit edildi. Sonuçlar, CV'nin 10 fg/μL ve üzeri konsantrasyonlarda <%20 olduğunu gösterdi. Yani, HEK293 konak hücre DNA kalıntısı tespit kitinin (3G) kantifikasyon sınırı 10 fg/μL idi.
|
Tekrarlar Test Öğesi | HEK293 DNA'sı (3G) (fg/μL) | |
| Miktar | Yeniden Hesaplama Oranı% | |
| 1 | 11.04 | 110.40% |
| 2 | 9.97 | %99,70 |
| 3 | 11.12 | 111.20% |
| 4 | 11.07 | 110.70% |
| 5 | 11.21 | 112.10% |
| 6 | 9.93 | %99,30 |
| 7 | 10.25 | 102,50% |
| 8 | 10.16 | 101.60% |
| 9 | 10.08 | 100.80% |
| 10 | 10.11 | 101.10% |
| Anlam | 10.49 | / |
| ÖZGEÇMİŞ% | 5.14% | / |
Şekil 3 10fg/μL HEK293 DNA (3G) qPCR Test Sonucu
3.6 Sağlamlık
Bu kit aşağıdaki aletler için test edilmiş olup, bunlarla sınırlı olmamak üzere uygundur:
| Satıcı | Enstrüman Modelleri | Amplifikasyon Verimlilikleri | R2 | Kantifikasyon sınırı (fg/μL) | ÖZGEÇMİŞ% |
| Termo | ABİ 7500 | 102.84% | 1 | 10 | %7 |
| Termo | ABI QuantStudio5 | 104.70% | 0,999 | 10 | %9 |
| Şanghay Hongshi | SLAN | 101,46% | 0,999 | 10 | %8 |
Tablo 5 Enstrüman uygunluk test sonuçları
3.7 Kararlılık
3.7.1 Donma-çözülme kararlılığı
HEK293 Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G), 10 kez tekrarlanan dondurma ve çözme işlemiyle test edildi ve kitin performansı etkilenmedi.
|
Test Göstergeleri Donma-çözülme Süreleri | Parametre | T0 zamanı | 10 kez dondurup çözün |
| Standart Eğri Parametresi | Amplifikasyon Verimlilikleri | %99,34 | 100,78% |
| R2 | 1 | 1 | |
| Kantifikasyon sınırı (30 fg/μL) | Özgeçmiş | %11 | %7 |
Tablo 6 Donma-çözülme kararlılığı sonuç analizi
3.7.2 Hızlandırılmış Stabilite
HEK293 Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (3G) sırasıyla 30 gün boyunca 2~8°C'de ve 14 gün boyunca 37°C'de saklandı. Kitin performansından hiçbiri etkilenmedi.
|
Test Göstergeleri İvme Sıcaklık ve Zaman | Parametre | T0 zamanı | 37℃ 7 Gün | 37℃ 14 Gün |
| Standart Eğri Parametresi | Amplifikasyon Verimlilikleri | 103.83% | 101,58% | 100.47% |
| R2 | 0,999 | 1 | 1 | |
| Kantifikasyon sınırı (30 fg/μL) | ÖZGEÇMİŞ% | %8 | %5 | %5 |
Tablo 7 Hızlandırılmış kararlılık sonuç analizi
3.8 Boşluğun Sınırı
Şablonsuz kontrol (NTC), CT değerlerinin >32 (artı ROX kalibrasyon eşik çizgisinin 0,06 olarak ayarlanması) ile 96 tekrarlı bir şablon seyreltmesiydi.
Şekil 4 NTC deney sonuçları
- 4.Referans
4.1 Çin Farmakopesi Komisyonu (ChPC). Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi (Cilt Ⅲ) [S]. Pekin：Çin Tıbbi Bilim ve Teknoloji Basını，s.542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Biyolojik Ürünlerin Kalite Kontrolü için Analitik Yöntem Doğrulamasının Teknik İncelemesine İlişkin Genel İlkeler.
4.3 ICH(2022)《Analitik yöntem doğrulaması Q2》, taslak sürüm.
Sipariş Bilgileri
| Tanım | Parça Numarası |
| 41332ES | |
| 41331ES | |
| 41307ES | |
| 41308ES | |
| 18461ES | |
| MycAway™ Mikoplazma qPCR Tespit Kiti (2G) | 40619ES |