E.COLI Konak Hücre DNA Tortu Algılama Kiti (2G) Validasyon Raporu

E. coli bakterisi Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (2G)

Nitelik Özeti (Kat No.: 4)1308(ES60)

1. Arka plan

Bu raporda özetlenen veriler Yeasen Biotechnology tarafından 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G) ürünü için gerçekleştirilmiştir. Özet veriler yalnızca kullanıcının referansı içindir ve kullanıcının konak hücre kalıntısını doğrulaması gerekir DNA yöntemi, kullanıcının gereksinimlerini karşılayabildiğini doğrulamak için kendi örneklerini kullanarak. Bu kiti kullanan tüm laboratuvarların aşağıdaki parametreleri doğrulamaları önerilir: Doğrusallık, Aralık, Doğruluk, Hassasiyet, Kantitasyon Sınırı, Özgüllük ve Sağlamlık.

Yeasen Biotechnology bu kit için detaylı yeterlilik raporu sağlayabilir. Kullanıcı bu raporu kullanırsa, yalnızca uygunluk (Hassasiyet dahil) Kesinlik ve Özgüllük) doğrulanmalıdır.

2. Deneysel materyaller ve yöntemler

2.1 E.coli Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (2G), Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 41308ES60.

2.2 MolPure® Manyetik Kalıntı DNA Örnek Hazırlama Kiti, Satıcı: Yeasen, Katalog No.: 18461ES60.

2.3 E. coli DNA içeriği için ulusal standart: Kat. 270027, Parti No.: 201101, konsantrasyon: 96,2 μg/mL, saklama koşulu: -70℃, nereden satın alındı: Ulusal Gıda ve İlaç Kontrol Enstitüleri.

2.4 Orijinal veriler: Elektronik versiyon 'Deneysel Rapor'da kaydedildi 'E.coli Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (2G)' ana dosyasının alt dosyası.

2.5 Yöntemler: Deneyde kullanılan malzemeler ve çalışma yöntemleri temel olarak Yeasen Biotechnology tarafından üretilmiş veya belirlenmiş olup, uzun süredir değerlendirilmiş ve doğrulanmıştır, kit geliştirme ve üretimi ISO 13485 sistemini takip etmektedir.

3. Nitelik içerikleri ve sonuçları

3.1 Algılama aralığı

Kitin doğrusal aralığı R ile 30 fg/μL~300 pg/μL idi²=1 ve her konsantrasyon testi için amplifikasyon verimliliği CV<%15 ile %101,74 idi.

Şekil 1 E.coli DNA (2G) qPCR Standart Eğrisi

3.2 Doğruluk

3.2.1 Sapma E.coli DNA içeriği için ulusal standart

Kitin her partisindeki E.coli DNA referans materyali, E.coli DNA içeriği için Ulusal standart kullanılarak kalibre edildi. Yeasen DNA referans materyali, E.coli DNA içeriği için Ulusal standarttan temelde sapmadan arınmıştı Kalibrasyon eğrisi ve deney değerinin sapması <%5 idi.

3.2.2 Rgeri kazanım

3.2.2.1 Boş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi

Yüksek ve düşük konsantrasyonlarda (300 pg/μL, 3 pg/μL ve 30 fg/μL) E. coli DNA standartlarının örnekleri sırasıyla hazırlandı ve Manyetik Boncuk Yöntemi ile Kalıntı DNA Örneği Ön İşlem Kiti kullanılarak ekstraksiyondan sonra analiz edildi (her örnek için 2 ekstraksiyon tekrarı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı) ve örnek geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.

Farklı DNA örnek konsantrasyonları için geri kazanımlar %70 ile %130 arasında değişirken, CV'lerin hepsi %20'nin altındaydı.

Örnek türü	Teorik Konsantrasyon	1 ortalamasını çıkar	2. ortalamayı çıkar	Ortalama konsantrasyon	Özgeçmiş	İyileşmek
Boş Örnek	/	/	/	/	/	/
Kurtarma örneği 1	300 pg/μL	250,56 pg/μL	262.11 pg/μL	256,33 pg/μL	4.41%	85.44%
Kurtarma örneği 2	3 pg/μL	2.29 pg/μL	2,56 pg/μL	2.42 pg/μL	7.09%	%80,77
Kurtarma örneği 3	30 fg/μL	33.62 fg/μL	32.61 fg/μL	33.12 fg/μL	14.28%	110.39%

Tablo1 Boş Örnek Spiking Kurtarma

3.2.2.2 Simüle Edilmiş Örnek Spiking Kurtarma Deneyi

Aynı konsantrasyondaki (3 pg/μL E. coli DNA'sı) örnekler 5 farklı arka plan solüsyonuyla (yüksek protein, yüksek nükleik asit, yüksek ve düşük pH, yüksek tuz) çıkarıldı (her örnek için 2 ekstraksiyon tekrarı ve her ekstraksiyon için 3 analiz tekrarı yapıldı) ve örnek geri kazanımları ve CV'ler analiz edildi.

Farklı arka plan çözümleri için DNA örneği kurtarma oranları %70 ile %130 arasında değişirken, tüm CV'ler %20'nin altındaydı.

Örnek türü	Teorik Konsantrasyon	1 ortalamasını çıkar	2. ortalamayı çıkar	Ortalama konsantrasyon	Özgeçmiş	İyileşmek
Temel Örnek	/	/	/	/	/	/
Yüksek Protein	3 pg/μL	2.25	2.23	2.24	1.09%	74.74%
Yüksek Nükleer Asit		3.93	3.96	3.95	%1,56	131,52%
Yüksek tuzlu		2.69	2.67	2.68	2.63	89.20%
Yüksek pH		2.90	3.67	3.29	13.82%	109,55%
Düşük pH		2,77	2,87	2,82	3.41%	%94.01

Tablo2 Temel Örnek Spiking Kurtarma

3.3 Hassasiyet

3.3.1 Tekrarlanabilirlik

E.coli DNA standartları için 3 pg/μL konsantrasyon ve CV < %15'lik bir değerde deneyi 10 kez tekrarlayın.

Tekrarlar	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Anlam	Özgeçmiş
Tespit Değeri (fg/μL)	3.16	2,87	2,97	2,86	2.81	2,97	3.14	3.21	3.14	3.1	3.02	4.78%

Tablo3 Tekrarlanabilirlik Sonuçları

3.3.2 Orta düzey hassasiyet

Üç deneyci, E. coli DNA standart örneklerini yüksek ve düşük konsantrasyonlarda (300 pg/μL, 3 pg/μL ve 30 fg/μL) bağımsız olarak test etti ve her konsantrasyon için üç tekrar yapıldı ve elde edilen dokuz verinin CV'leri %15'in altındaydı.

Deneyim	Gerçek Konsantrasyon Teorik Konsantrasyon	E. coli DNA'sı (2G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 fg/uL
Deney 1	Karar 1	295,65	3.22	26.90
	Karar 2	287,71	3.24	32.00
	Karar 3	300.23	3.17	27.50
Deney 2	Kararlılık 4	306.06	3.13	37.30
	Kararlılık 5	299,76	3.02	32.70
	Kararlılık 6	299.63	3.02	34.00
Deney 3	Kararlılık 7	266,70	3.01	35.90
	Kararlılık 8	272,89	3.09	40.70
	Kararlılık 9	276,51	3.01	35.20
/	Anlam	289,46	3.10	33.60
/	Özgeçmiş	4.89%	3.02%	13.18%

Tablo4 Ara kesinlik Sonuçları

3.4 Spesifiklik

Biyolojik ürünlerin üretiminde yaygın olarak kullanılan hücresel genomik DNA'nın E. coli DNA tespit reaktifleri ile etkileşimi değerlendirilmiş ve etkileşim grubu kontrol grubu ile örtüşmüş olup herhangi bir etkileşim görülmemiştir (aşağıdaki şekil sırasıyla HEK293, Vero ve CHO genomik DNA'larının E. coli DNA tespit reaktifleri ile etkileşim verilerini göstermektedir).

Şekil 2 Girişim deneyi sonuçları

3.5 Miktar Belirleme Sınırı

E.coli DNA'sı 50 fg/μL, 40 fg/μL, 30 fg/μL, 10 fg/μL ve 5 fg/μL'de, her konsantrasyon için 10 tekrarla tespit edildi. Sonuçlar, CV'nin 30 fg/μL ve üzeri konsantrasyonlarda <%20 olduğunu gösterdi. Yani, E.coli konak hücre DNA kalıntısı tespit kitinin (2G) kantifikasyon sınırı 30 fg/μL idi.

Tekrarlar Test Öğesi	E.coli DNA'sı (2G) (fg/μL)
	Miktar	Yeniden Hesaplama Oranı
1	29.43	%98,09
2	29.51	%98,35
3	32.04	106,79%
4	26.07	86.89%
5	34.06	113,53%
6	33.54	111,79%
7	26.95	89.82%
8	27.38	%91,26
9	27.04	%90,13
10	26.10	87.02%
Anlam	29.21	/
Özgeçmiş	10.40%	/

Şekil 3 30fg/μL E.coli DNA (2G) qPCR Test Sonucu

3.6 Sağlamlık

Bu kit aşağıdaki aletler için test edilmiş olup, bunlarla sınırlı olmamak üzere uygundur:

Satıcı	Enstrüman Modelleri	Amplifikasyon Verimlilikleri	R2	Kantifikasyon sınırı (fg/μL)	Özgeçmiş
Termo	ABİ 7500	101,74%	1	30	13.30%
Termo	ABI QuantStudio5	100.46%	1	30	12.40%
Biyo-Rad	CFX96	%99,20	0,999	30	13.76%
Şanghay Hongshi	SLAN	100.40%	0,999	30	11.67%

Tablo 5 Enstrüman uygunluk test sonuçları

3.7 Kararlılık

3.7.1 Donma-çözülme kararlılığı

E.coli Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (2G), 10 kez tekrarlanan dondurma ve çözme işlemiyle test edildi ve kitin performansı etkilenmedi.

Test Göstergeleri Donma-çözülme Süreleri	Parametre	T0 zamanı	10 kez dondurup çözün
Standart Eğri Parametresi	Amplifikasyon Verimlilikleri	%98,23	100.20%
	R2	1	0,999
Kantifikasyon sınırı (30 fg/μL)	Özgeçmiş	15.07%	%9,66

Tablo 6 Donma-çözülme kararlılığı sonuç analizi

3.7.2 Hızlandırılmış Stabilite

E.E. coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G) 30 gün boyunca 2~8°C'de ve 14 gün boyunca 37°C'de saklandı. Kitin performansından hiçbiri etkilenmedi.

Test Göstergeleri İvme Sıcaklık ve Zaman	Parametre	Deney 1		Deney 2
		T0 zamanı	2~8℃ 30 Günler	T0 zamanı	37℃ 14 Gün
Standart Eğri Parametresi	Amplifikasyon Verimlilikleri	%97,77	%99,81	%98,39	%98,65
	R2	1	1	1	1
Kantifikasyon sınırı (30 fg/μL)	Özgeçmiş	11.04%	13,79%	9.55%	14.55%

Tablo 7 Hızlandırılmış kararlılık sonuç analizi

4. 4.Referans

4.1 Çin Farmakopesi Komisyonu (ChPC). Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi (Cilt Ⅲ) [S]. Pekin：Çin Tıbbi Bilim ve Teknoloji Basını，s.542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: Biyolojik Ürünlerin Kalite Kontrolü için Analitik Yöntem Doğrulamasının Teknik İncelemesine İlişkin Genel İlkeler.

4.3 ICH(2022)《Analitik yöntem doğrulaması Q2》, taslak sürüm.

Sipariş Bilgileri