- RT-qPCR được cung cấp năng lượng bởi phản ứng ngược hiệu quả cao phiên mã
Reverse Transcriptase (RT enzyme) là một enzyme có khả năng chuyển đổi các khuôn mẫu RNA thành DNA bổ sung (cDNA). Trong nghiên cứu sinh học phân tử, reverse transcriptase được sử dụng rộng rãi, đặc biệt đóng vai trò không thể thiếu trong lĩnh vực chẩn đoán phân tử. Thông qua quá trình phiên mã ngược, bộ gen RNA của virus có thể được chuyển đổi thành cDNA, sau đó có thể được khuếch đại và phát hiện bằng các kỹ thuật như qPCR. Đặc điểm này cho phép chẩn đoán chính xác các loại virus RNA, chẳng hạn như HIV, cúm A và cúm B.
Hình 1. Sơ đồ quá trình phiên mã ngược
Việc theo đuổi các thuốc thử chẩn đoán phân tử RT-qPCR nhanh hơn, nhạy hơn và dễ vận hành hơn đã trở thành xu hướng phát triển chính hiện nay. Là một trong những nguyên liệu thô chính trong quy trình RT-qPCR, phiên mã ngược cần phải có tốc độ phiên mã ngược nhanh hơn, năng suất tổng hợp cao hơn và khả năng chịu nhiệt tốt hơn. Để có được phiên mã ngược phù hợp hơn với RT-qPCR,
Hình 2. Sơ đồ hoạt động phiên mã ngược
Hifair™Phiên mã ngược
| Tên sản phẩm (Số sản phẩm ) | Tính năng sản phẩm | Ứng dụng được đề xuất |
| Ổn định nhiệt (lên đến 65°C), phù hợp với các mẫu phức tạp | ĐÈN RT | |
| Khả năng tương thích mạnh mẽ, tốc độ nhanh và năng suất tổng hợp cao | Một bước RT-PCR/qPCR |
Lưu ý: Tất cả các loại enzyme được đề cập ở trên đều có dạng nồng độ cao hoặc không chứa glycerol.
Bây giờ chúng tôi xin giới thiệu một phiên mã ngược được sử dụng trong thuốc thử chẩn đoán phân tử RT-qPCR: HifairTM V Reverse Transcriptase. Enzym này được phân biệt bởi khả năng tương thích mạnh, tốc độ nhanh và năng suất tổng hợp cao, có khả năng chịu được nhiệt độ phản ứng lên tới 58°C. Nó đặc biệt phù hợp để phát triển thuốc thử chẩn đoán phân tử RT-qPCR.
Biểu diễn trình diễn của Hifair™ V phiên mã ngược
1. Có khả năng chịu được nhiệt độ phản ứng là 58°C, thích hợp cho quá trình phiên mã ngược của khuôn mẫu RNA phức tạp.
Hình 3. Phiên mã ngược của HifairTM V Reverse Transcriptase và thương hiệu T* được ủ ở nhiệt độ lần lượt là 55℃ và 58℃ trong 30 phút để phát hiện hoạt động còn lại của enzyme. Kết quả cho thấy HifairTM V Reverse Transcriptase vẫn có thể duy trì hoạt động 70% sau khi ủ ở 58℃ trong 30 phút, cao hơn nhiều so với nhãn hiệu T*.
2. Tỷ lệ phát hiện của RT-qPCR tốt hơn so với các thương hiệu khác,và tphạm vi phát hiện là 1 pg-1 μg.
Hình 4. Sử dụng tổng RNA 1 pg-1 μg (7 gradient) của tế bào 293T làm khuôn mẫu, phiên mã ngược được thực hiện bằng HifairTM V one-step RT-gDNA tiêu hóa SuperMix cho qPCR(Cat#11142), V*, T*. cDNA thu được được phân tích định lượng bằng qPCR. Kết quả cho thấy độ nhạy của 11142ES có thể đạt tới 1 pg, tốt hơn so với các nhãn hiệu khác.
Thư viện đột biến phiên mã ngược của Yeasen
Bảng 2. Các Hướng dẫn lựa chọn đột biến phiên mã ngược của
Sản phẩm được đề xuất
| Phân loại sản phẩm | Tên sản phẩm | Số danh mục |
| Dòng enzyme PCR hiệu suất cao | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |