UCF.ME™ UltraNuclease, còn được gọi là nuclease toàn năng, nuclease phổ rộng và endonuclease ức chế không giới hạn, có nguồn gốc từ Serratia Marcescen nhưng sau đó được thiết kế lại và sản xuất bởi
1. Nuclease toàn năng là gì?
2. Những trường hợp sử dụng nuclease toàn năng là gì?
3. Nuclease toàn năng cần có những ưu điểm gì?
4. Câu hỏi thường gặp
5. Sản phẩm liên quan
1. Nuclease toàn năng là gì?
Nuclease toàn năng là endonuclease biến đổi gen có khả năng phân hủy nhiều dạng axit nucleic, bao gồm axit nucleic mạch đơn, mạch đôi, tuyến tính, tự nhiên và biến tính. Chúng tạo ra oligonucleotide 5'-monophosphate với chiều dài từ 3 đến 5 bazơ và không biểu hiện khả năng nhận diện bazơ cụ thể. Các nuclease đa năng này thể hiện tính ổn định và hoạt động tiêu hóa mạnh mẽ trong nhiều điều kiện khác nhau, khiến chúng có hiệu quả cao trong việc loại bỏ các dư lượng axit nucleic trong mẫu hoặc sản phẩm. Điều này làm tăng độ tinh khiết của mẫu và hiệu quả sinh học của sản phẩm, khiến nuclease toàn năng trở thành chế phẩm enzyme được ưa chuộng cho nghiên cứu khoa học, vắc-xin và các ngành công nghiệp như dược phẩm protein và polysaccharide.
Hơn nữa, các nuclease toàn năng đóng vai trò quan trọng trong việc loại bỏ axit nucleic trong quá trình chuẩn bị vắc-xin, kháng thể, liệu pháp tế bào và các sản phẩm sinh học khác, đảm bảo tuân thủ các quy định của FDA quy định rằng axit nucleic còn lại trong sản phẩm cuối cùng để sử dụng trong điều trị không được vượt quá 10 pg/liều. Bằng cách phân hủy axit nucleic, các nuclease toàn năng làm giảm độ nhớt của dịch phân hủy tế bào, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình lọc dung dịch/siêu lọc trong quá trình tinh chế các hạt có nguồn gốc từ tế bào như vi-rút, vectơ AAV và thể vùi. Điều này hợp lý hóa quá trình xử lý, cải thiện quá trình ly tâm, tăng hiệu quả tách kết tủa và dịch nổi, đồng thời thúc đẩy hiệu quả tinh chế sắc ký, cuối cùng là tăng năng suất và độ tinh khiết của sản phẩm.
2. Những trường hợp sử dụng nuclease toàn năng là gì?
UltraNuclease có nhiều ứng dụng và sau đây là những trường hợp sử dụng cụ thể.
2.1 Làm sạch virus (lentivirus, AAV, vắc-xin adenovirus tái tổ hợp, virus bất hoạt, virus gây ung thư, v.v.)
Việc sử dụng vi-rút trong lĩnh vực y sinh đang mở rộng đáng kể, bao gồm các ứng dụng như vắc-xin, liệu pháp tế bào, liệu pháp gen và nhiều lĩnh vực khác. Các tế bào chủ chịu trách nhiệm sản xuất vi-rút chủ yếu là các tế bào truyền liên tục (CCL). CCL biểu hiện khuynh hướng di truyền về sự phát triển không kiểm soát, mang lại cho chúng khả năng sinh sôi vô thời hạn. Tuy nhiên, sự hiện diện của DNA còn sót lại từ CCL có thể gây ra những rủi ro tiềm ẩn, chẳng hạn như sự tăng sinh tế bào người không kiểm soát dẫn đến hình thành khối u. Hơn nữa, các đoạn DNA còn sót lại này có thể chứa bộ gen vi-rút gây nhiễm trùng, làm dấy lên mối lo ngại về nguy cơ nhiễm trùng cùng với quá trình hình thành khối u. Do đó, các biện pháp kiểm soát nghiêm ngặt là bắt buộc để quản lý DNA còn sót lại trong các sản phẩm sinh học, đảm bảo an toàn cho chúng. Về vấn đề này, UCF của chúng tôi.ME™ UltraNuclease cung cấp giải pháp an toàn để thanh lọc vi-rút.
Muối đóng vai trò then chốt trong việc làm giảm sự kết tụ protein hoặc vi-rút, tạo điều kiện tách DNA và RNA khỏi protein và các thành phần tế bào khác. Salt Active UltraNuclease, là một endonuclease không đặc hiệu, thể hiện hoạt động tối ưu ở nồng độ muối cao. Trong điều kiện muối cao, các enzyme tiếp cận tốt hơn với DNA và RNA được giải phóng, tăng cường sự phân hủy của chúng. Các nuclease có hoạt tính cao trong môi trường muối cao tỏ ra hiệu quả hơn trong việc tăng cường các quá trình tinh chế. Salt Active UltraNuclease có thể được sử dụng để giảm độ nhớt trong dịch siêu tế bào và dịch phân hủy, tăng cường hiệu quả tinh chế trong điều kiện muối cao. Enzym này cũng làm giảm các dư lượng axit nucleic của vật chủ xuống mức picogram, do đó tăng cường hiệu suất và tính an toàn của nhiều ứng dụng sản phẩm sinh học khác nhau, bao gồm tinh chế vi-rút, sản xuất vắc-xin và sản xuất dược phẩm protein và polysaccharide.
2.2 Tinh chế protein tái tổ hợp được biểu hiện trong E. coli
Một số protein được biểu hiện trong E. coli có xu hướng kết tụ thành các thể vùi, làm phức tạp quá trình tinh chế vì chúng thường bị đan xen với DNA của vật chủ. Các tế bào vi khuẩn bị vỡ kết quả có thể biểu hiện độ nhớt cao, làm giảm đáng kể hiệu quả tinh chế protein. Tuy nhiên, bằng cách đưa 10-50 U/mL UCF.ME™UltraNuclease vào dung dịch vi khuẩn trong quá trình phá vỡ siêu âm và ủ mẫu ở 37°C trong 30 phút hoặc 4°C qua đêm sau khi hoàn tất quá trình phá vỡ, độ nhớt trong dung dịch vi khuẩn có thể giảm hiệu quả. Điều này, đến lượt nó, tăng cường đáng kể hiệu quả của quá trình tinh chế. Tóm lại, bạn có thể tin tưởng vào UCF.ME™ UltraNuclease của chúng tôi để tạo điều kiện cho quá trình tinh chế protein hiệu quả.
2.3 Ngăn ngừa sự vón cục của tế bào
Trong những năm gần đây, việc sử dụng tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) được bảo quản lạnh trong xét nghiệm miễn dịch đã tăng đáng kể. Đặc điểm lớn nhất của tế bào PBMC là chúng rất dễ vón cục sau khi hồi sức, điều này có thể dễ dàng dẫn đến chất lượng tế bào thấp và kết quả xét nghiệm không đáng tin cậy. Khi các tế bào được hồi sức, nồng độ thích hợp (25-50 U/mL) của UCF.ME™UltraNuclease được thêm vào môi trường nuôi cấy và các tế bào được nuôi cấy đồng thời, có thể ngăn ngừa hiệu quả tình trạng vón cục tế bào. Do đó, bạn có thể tận dụng tối đa UCF.ME™ UltraNuclease của chúng tôi để tăng khả năng có kết quả thành công.
3. Nuclease toàn năng cần có những ưu điểm gì?
3.1 Phạm vi ứng dụng rộng rãi
UCF.ME™ UltraNuclease có thể cắt và phân hủy nhiều dạng DNA và RNA khác nhau trong nhiều điều kiện thử nghiệm khác nhau và có thể được ứng dụng để loại bỏ axit nucleic còn sót lại trong nhiều sản phẩm sinh học khác nhau.
3.2 Độ tinh khiết cao, hoạt động của enzyme cao
Đối với UCF.ME™ UltraNuclease của chúng tôi, độ tinh khiết của enzyme lớn hơn hoặc bằng 99% (HPLC) và hoạt động của enzyme lớn hơn hoặc bằng 1,5*106 U/mg (sử dụng phương pháp định lượng tuyệt đối cho chất nền chung).
3.3 Khả năng thích ứng mạnh mẽ
UCF.ME™ UltraNuclease có độ ổn định cao khi bảo quản và đông lạnh-rã đông. Chúng tôi bảo quản UCF.ME™ UltraNuclease ở -20 °C, 4 °C và 37 °C để phát hiện xu hướng hoạt động của enzyme. Khi đặt ở 37 °C trong 2 tuần, không có thay đổi đáng kể nào về hoạt động của enzyme.Trong khi đó, để đảm bảo sự ổn định của enzyme, chúng tôi sử dụng kết hợp đá khô + túi đá để chuyên chở UCF.ME™ UltraNuclease đến tận nơi của bạn. Nó cũng có khả năng chịu đựng mạnh mẽ và có thể thích ứng với nhiều điều kiện hoạt động khác nhau.
3.4 Tuân thủ Dược điển
UCF.ME™ UltraNuclease được sản xuất tại UCF.ME (Nhà máy siêu sạch. Enzyme phân tử) là một loại enzyme siêu sạch. Enzyme siêu sạch là gì? Đây là một loại enzyme phân tử đạt tiêu chuẩn chất lượng không có HCD、HCR、HCP, KHÔNG CÓ DNASE、KHÔNG CÓ RNASE, không có dư lượng protease, không có dư lượng vi khuẩn, không có mầm bệnh, có nguồn gốc động vật, ô nhiễm kháng sinh, dư lượng nội độc tố cực thấp, hoạt động của enzyme cao và độ tinh khiết cao, v.v. Do đó, bạn có thể tin tưởng vào sản phẩm của chúng tôi, một cách an toàn và đáng tin cậy.
3.5 Sản xuất GMP
Toàn bộ quá trình sản xuất UltraNuclease được hoàn thiện tại xưởng sản xuất GMP và kế hoạch kiểm tra chất lượng được thực hiện nghiêm ngặt bởi dược điển phương pháp đáp ứng nhu cầu lớn từ nghiên cứu phát triển đến sản xuất.
UCF.ME™ Đối tác của UltraNuclease —— Bộ xét nghiệm ELISA UltraNuclease
Trong các bước thanh lọc thông thường, UCF.ME™ Siêu Nuclease dễ dàng bị loại bỏ như một tạp chất. Để phát hiện dư lượng của UCF.ME™ Siêu Nuclease,
Siêu Nuclease Bộ xét nghiệm ELISA
Phạm vi tuyến tính nằm trong khoảng 0,047 và 3 ng/mL, và R2 lớn hơn 0,99. Với khả năng tái tạo giữa các lô tốt, chúng tôi thêm một nồng độ cố định của UltraNuclease vào mẫu và sử dụng 3 lô bộ dụng cụ ELISA khác nhau để phát hiện. Tỷ lệ thu hồi phát hiện nằm trong khoảng 70% đến 110% khi nồng độ nuclease nằm trong khoảng 3 đến 0,186 ng/mL, và CV nhỏ hơn 10%. Hơn nữa, tỷ lệ thu hồi mẫu mô phỏng của UltraNuclease với các nồng độ khác nhau đều nằm trong khoảng 70% đến 130% và tốt hơn các nhãn hiệu khác. Nó cũng có tính đặc hiệu mạnh khi chúng tôi đánh giá sự liên kết không đặc hiệu của kháng thể UltraNuclease với 8 mẫu thông thường. Kết quả của nhóm can thiệp và nhóm đối chứng chồng chéo nhau và không thấy có sự can thiệp nào.
Sau khi nộp đơn xin cấp bằng sáng chế DMF của UltraNuclease,
Số hồ sơ là:
| Con số | Tên sản phẩm | Số hồ sơ |
| 1 | Siêu Nuclease | MF037298 |
| 2 | Muối hoạt động UltraNuclease | MF037815 |
4. Câu hỏi thường gặp
Câu hỏi 1: Thêm UltraNuclease vào bước nào?
A: Tùy thuộc vào mẫu bạn đang xử lý. Trong quá trình tinh chế vi-rút, nó thường được thêm vào sau khi làm trong vi-rút; trong quá trình tinh chế protein E. coli, nó có thể được thêm vào khi các tế bào bị phân hủy; trong quá trình xử lý tế bào vón cục, nó có thể được thêm trực tiếp vào môi trường để đồng nuôi cấy với tế bào.
Câu hỏi 2: Nếu nhiệt độ phản ứng không thể đạt tới 37°C thì sử dụng như thế nào?
MỘT: Hoạt động của enzyme UltraNuclease bị ảnh hưởng bởi nhiệt độ, thời gian xử lý và đơn vị hoạt động của enzyme. Nếu nhiệt độ không đạt tới 37°C, có thể thêm lượng enzyme thích hợp hoặc kéo dài thời gian ủ.
Câu hỏi 3: UltraNuclease có tương thích với chất ức chế protease không?
MỘT: Tương thích, nhưng lưu ý rằng nhiều chất ức chế protease có chứa EDTA. Khi EDTA bắt đầu cao hơn 1mM, EDTA sẽ ức chế hoạt động của một số nuclease.
Câu hỏi 4: Làm thế nào để loại bỏ UltraNuclease?
MỘT: Có thể loại bỏ nó bằng các phương pháp như TFF, thẩm phân và cột sắc ký.
Câu hỏi 5: Bộ xét nghiệm ELISA UltraNuclease có thể được sử dụng để phát hiện các nhãn hiệu khác của các gốc nuclease toàn năng không?
MỘT: Chúng tôi không khuyến nghị thực hiện điều này. Bộ ELISA được phát triển hoàn toàn dựa trên UltraNuclease và có thể định lượng chính xác UltraNuclease. Các nuclease Altipotent của các thương hiệu khác có thể khác với UltraNuclease về trình tự và quy trình sản xuất, và kết quả xét nghiệm có thể không chính xác.
5. Sản phẩm liên quan
Các sản phẩm được cung cấp bởi
Bảng 1 Sản phẩm liên quan
| Tên sản phẩm | Mã sản phẩm | Thông số kỹ thuật |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Muối hoạt động Bộ xét nghiệm ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |