细胞凋亡简介
细胞凋亡是细胞在发育过程中或受到某些因素影响时发生的程序性细胞死亡现象，由细胞内基因及其产物的调控而引发。在细胞凋亡途径中，事件按时间顺序依次发生，导致凋亡小泡的呈现，进而发生细胞凋亡。细胞凋亡在胚胎发育和形态发生、组织中正常细胞稳定群体的维持、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒引起的细胞损伤、衰老以及肿瘤的发展中起着至关重要的作用，并具有潜在的治疗价值。
检测原理
正常细胞膜中磷脂的分布是不对称的。磷脂酰丝氨酸（PS）在活细胞中位于细胞膜内表面，在细胞凋亡过程中，细胞膜发生变化，PS从细胞膜内表面翻转到细胞膜外表面。Annexin V特异性识别凋亡细胞表面的PS，而活细胞的PS位于细胞膜内表面，无法与Annexin V特异性结合。
坏死细胞的PS也会从细胞膜内表面翻转到细胞膜外表面，Annexin V也能识别坏死细胞表面的PS，因此Annexin V无法区分坏死细胞和凋亡细胞。而PI染料却能与细胞内的DNA结合，区分坏死细胞和活细胞。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜尚完好，PI染料不能自由穿过细胞膜进入细胞内与DNA结合，因此PI染料无法标记凋亡细胞和活细胞，而PI染料却能穿过坏死细胞的细胞膜与细胞内部的DNA结合，坏死细胞中的PI染料受到488nm激光激发后会发出红色荧光，被相应通道接收。因此可以同时利用Annexin V和PI来区分活细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。
图2 Annexin V/PI检测原理
流式细胞术检测
FITC的最大激发波长为488nm，最大发射波长为525nm，在FL1通道检测到FITC的绿色荧光。 PI-DNA复合物的最大激发波长为535nm，最大发射波长为615nm，在FL2或FL3通道检测PI的红色荧光。用CellQuest等软件进行分析，以FITC为横坐标，PI为纵坐标绘制双色散点图。在典型的实验中，可将细胞分为三个亚群，活细胞仅有非常低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞则有绿色和红色荧光的双染。
图3 流式细胞术检测
常见问题
问：Annexin V 凋亡检测可以应用于植物或细菌（原核生物）吗？
A：可以，但需要准备原生质体，因为植物细胞或细菌（原核生物）含有细胞壁。染色液具体用量只需没过细胞即可，不同细胞染色时间有些不同。
问：如何判断实验的结果？
A：活细胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡细胞及坏死细胞呈双阳性（Annexin V+/PI+）、裸核（Annexin V-/PI+）。
问：Annexin V 和 TUNEL 有什么区别？
答：末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 是一种用于识别细胞内 DNA 碎片位点的染色方法 - 这是晚期细胞凋亡的标志性特征。
膜联蛋白 V 染色通过与由于细胞膜不对称性丧失而暴露在细胞外的 PS 残基结合，来识别细胞凋亡的早期阶段。
问：是否可以仅使用 Annexin V-FITC 进行检测而不检测 PI？
答：可以。对于特殊的测试样本，例如无核红细胞，或使用干扰 PI 检测的药物阿霉素 (Adriamycin)，在两种情况下都可以仅使用 Annexin V-FITC 进行检测。
产品详情
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 | 40311ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 |
| 40302ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 | 40310ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 |
| 40303ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒 | 40313ES60 | 100吨 |
| 40305ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| 40304ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD 细胞凋亡检测试剂盒 | 40312ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 |
| 40306ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| 40307ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 | |
| 40308ES20/50/60 | 20吨/50吨/100吨 |