Yeasen 和 Molefuture 开发出耐热、高保真 T4 DNA 连接酶来对抗假连接

Yeasen 和 Molefuture 推出先进的 T4 DNA 连接酶以克服分子生物学挑战

Yeasen 和 Molefuture 联合开发了一种尖端的 T4 DNA 连接酶，利用其 ZymeEditor 平台解决了分子生物学和下一代测序 (NGS) DNA 文库构建中的关键问题。传统的 T4 DNA 连接酶面临稳定性差、接头二聚体形成率高和 DNA 片段自连接率高等挑战。这种新型酶旨在克服这些局限性。

T4 DNA 连接酶是一种 ATP 依赖性酶，具有紧凑螺旋 DNA 结合域 (DBD)、核苷酸转移酶 (NTase) 域和 OB 折叠域。通过分析蛋白质结构，研究人员确定了 DNA 底物 5 至 20Å 内的关键残基。利用先进的计算工具、计算机筛选和结构功能分析，他们通过一致序列比对设计了突变体，并结合了结构功能见解。

除了合理设计外，该团队还采用了 MTPS 方法进行定向进化，筛选了 10,000 多个突变体，以确定其稳定性、活性和残留活性。有希望的候选物经过了严格的纯化和测试。随后进行了详细的表征，评估了活性、稳定性、接头自连接、DNA 片段自连接和 DNA 产量。

研究人员将 DNA 合理设计和 G1 突变体的定向突变相结合，开发出适用于多种应用的卓越变体。这种综合方法产生了一种高效可靠的 T4 DNA 连接酶，有望增强分子生物学研究和 NGS 中的 DNA 文库构建。

图 1. 展示了 Versatility T4 DNA Ligase 的演变。(A) 合理设计 T4 DNA 连接酶。（B）在 45℃ 下筛选耐热 T4 DNA 连接酶突变体，鉴定出比活性显著增强的突变体。（C）筛选旨在减少 DNA 文库制备过程中接头二聚体的形成的 T4 DNA 连接酶突变体。 (D) 使用 DNA 文库制备方法在 42℃ 热处理 1 小时后评估文库产量的保留。
表 1. Yeasen 多功能T4 DNA连接酶具有热稳定性，酶在30℃下处理5天，并用DNA Lib Prep方法进行分析。
图 2. Yeasen 多功能T4 DNA连接酶具有更高的保真度 与野生型 (WT) T4 DNA 连接酶相比，通过 DNA Lib Prep 方法分析，由于自身错误连接 (A) 和 (B)，形成的接头二聚体较少。
图 3. Yeasen 通过 DNA Lib Prep 方法分析，与商用 T4 DNA 连接酶（包括耐热连接酶）相比，多功能 T4 DNA 连接酶显示出最低的接头二聚体形成。
这一突破表明 Yeasen 以及 Molefuture 对酶工程创新和卓越的承诺。

订购信息

姓名 猫＃ 笔记
酵素 Hieff™ 多功能 T4 DNA 连接酶 (600 U/µL) 12996ES 耐热、高保真肿瘤基因检测
脱氧核糖核酸 Hieff NGS® DNA 文库制备试剂盒 13577ES 肿瘤/机械方法
Hieff NGS® OnePot Pro DNA 文库制备试剂盒 V2 12194ES 肿瘤/酶法
Hieff NGS® OnePot Illumina II DNA 文库制备试剂盒 13490ES 病原体/酶/常规时间（140分钟）
Hieff NGS® OnePot Flash DNA 文库制备试剂盒 12316ES 病原体/ 酶/ 超快 (100分钟)
Hieff NGS® DNA&RNA 文库共制备试剂盒 V2 12305ES 病原体/酶/DNA 和 RNA 共制备
核糖核酸 Hieff NGS® Ultima 双模式 mRNA 文库制备试剂盒 12308ES 不含寡核苷酸 dT 磁珠，11 管
Hieff NGS® Ultima 双模式 mRNA 文库制备试剂盒 12309ES oligo dT 磁珠 plus，14 管
Hieff NGS® Ultima 双模式 RNA 文库制备试剂盒 12310ES 预混版，5 管
Hieff NGS ® EvoMax RNA Library Prep Kit（预混版）（放线菌素D 自由的） 12340ES 预混版本， （放线菌素 D 自由的）
Hieff NGS® MaxUp rRNA 耗竭试剂盒（植物） 12254ES 植物
Hieff NGS® MaxUp 人类 rRNA 耗竭试剂盒（rRNA 和 ITS/ETS） 12257ES 人类

请留言询问该酶与其他顶级耐热和常规T4 DNA连接酶的性能比较数据。

关于Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology 是 Yeasen 生物科技（上海）有限公司，专注于以酶进化技术为驱动，提供定制化的酶改造解决方案。依托 Yeasen 生物科技方面，Molefuture拥有六大技术平台：ZymeEditor创新酶进化平台、多宿主高效表达平台、发酵工艺开发平台、纯化工艺开发平台、超净酶生产平台、酶分析与质控平台。通过这六大技术平台，Molefuture可以提供从酶定向进化、新型酶开发、酶工艺开发到GMP级别放大生产等一整套定制化解决方案，满足体外诊断、生物医药、合成生物学、医学美容、医药中间体等领域的酶应用需求。

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