細胞凋亡簡介
細胞凋亡（Apoptosis）是細胞在發育過程中或受到某種因素影響時，透過細胞內基因及其產物的調控而發生的程序性細胞死亡現象。在細胞凋亡途徑中，事件依照時間順序一個接一個地發生，導致凋亡囊泡的呈現，進而發生細胞凋亡。細胞凋亡在胚胎發育和形態發生、組織中正常細胞穩定群體的維持、機體的防禦和免疫反應、疾病或中毒引起的細胞損傷、衰老以及腫瘤的發展中起著至關重要的作用，並具有潛在的治療價值。
檢測原理
正常細胞膜上磷脂的分佈是不對稱的。磷脂醯絲胺酸（PS）在活細胞內位於細胞膜內表面，在細胞凋亡過程中，細胞膜會發生變化，PS從細胞膜內表面翻轉到細胞膜外表面。 Annexin V 能特異性辨識凋亡細胞表面的 PS，而活細胞的 PS 位於細胞膜內表面，無法與 Annexin V 特異性結合。
壞死細胞的PS也會由細胞膜內表面翻轉到細胞膜外表面，而Annexin V又能辨識壞死細胞表面的PS，因此Annexin V無法區分壞死細胞與凋亡細胞。相反，PI 染料能夠與細胞內 DNA 結合併區分壞死細胞和活細胞。早期凋亡細胞和活細胞的細胞膜尚完好，PI染料不能自由穿過細胞膜進入細胞內與DNA結合，所以PI染料不能標記凋亡細胞和活細胞；而PI染料能夠穿過壞死細胞的細胞膜與細胞內部的DNA結合，壞死細胞中的PI染料受到488nm激光激發後會發出紅色螢光，被相應通道接收。因此可以同時利用Annexin V和PI來區分活細胞、早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。
圖2 Annexin V/PI檢測原理
流式細胞儀檢測
FITC的最大激發波長為488nm，最大發射波長為525nm，在FL1通道偵測到FITC的綠色螢光。 PI-DNA複合物的最大激發波長為535nm，最大發射波長為615nm，在FL2或FL3通道偵測到PI的紅色螢光。採用CellQuest等軟體進行分析，以FITC為橫座標，PI為縱座標繪製雙色散佈圖。在典型的實驗中，細胞可分為三個亞群，活細胞僅具有非常低強度的背景螢光，早期凋亡細胞僅具有強烈的綠色螢光，晚期凋亡細胞具有綠色和紅色螢光雙重染色。
圖3 流式細胞儀檢測
常見問題
Q：Annexin V 凋亡檢測可以應用於植物或細菌（原核生物）嗎？
答：是的，但需要準備原生質體，因為植物細胞或細菌（原核生物）含有細胞壁。染色液具體用量只需浸沒細胞即可，不同細胞的染色時間略有不同。
問：如何判斷實驗的結果？
A：活細胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細胞及壞死細胞呈雙陽性（Annexin V+/PI+）、裸核（Annexin V-/PI+）。
Q：Annexin V 和 TUNEL 有什麼區別？
答：末端脫氧核苷酸轉移酶 dUTP 缺口末端標記 (TUNEL) 是一種用於識別細胞內 DNA 碎片位點的染色方法 - 這是晚期細胞凋亡的標誌性特徵。
膜聯蛋白 V 染色透過與因細胞膜不對稱性喪失而暴露在細胞外的 PS 殘基結合，來識別細胞凋亡的早期階段。
Q：是否可以僅使用 Annexin V-FITC 進行檢測而不檢測 PI？
答：是的，有可能。對於特殊的測試樣本，例如沒有細胞核的紅血球，或使用乾擾 PI 檢測的藥物阿黴素 (Adriamycin)，在兩種情況下都可以僅使用 Annexin V-FITC 進行檢測。
產品詳情
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| Annexin V-FITC/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒 | 40311ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 |
| 40302ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒 | 40310ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 |
| 40303ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒 | 40313ES60 | 100噸 |
| 40305ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| 40304ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒 | 40312ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 |
| 40306ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| 40307ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 | |
| 40308ES20/50/60 | 20噸/50噸/100噸 |