體外細胞轉染試劑產品選擇指南

體外細胞轉染試劑產品選擇指南

細胞轉染試劑已成為研究和調控真核細胞基因功能的常規試劑。轉染試劑廣泛應用於基因功能研究、基因表現調控和突變分析，以及基因治療、細胞治療、蛋白質生產和疫苗生產。那麼轉染是什麼呢？如何根據你的實驗情況選擇一種轉染試劑？

轉染的類型有哪些？

轉染試劑的特點 Yeasen

如何根據您的實驗選擇一種轉染試劑？

應用案例

轉染條件參考

常見問題解答

注意閱讀

轉染的類型有哪些？

根據轉染後核酸是否整合到宿主細胞染色體中，分為「瞬時轉染」(transient transfection)和「穩定轉染」(stable transfection)。不同轉染方法的轉染效率、細胞毒性、對正常生理的影響、基因表現量等均有所不同。其原理、應用、特性比較如下表：

表1 不同轉染方法比較

科技

原則

優點

缺點

化學轉染法

陽離子脂質體

帶正電荷的脂質體與帶負電荷的核酸磷酸基團形成複合物，並被細胞內吞。
  • 操作快速簡便
  • 結果可重複
  • 轉染效率高
  • 可轉染的 DNA、RNA 和蛋白質
  • 適用於瞬時和穩定蛋白質的生產
  • 可用於體內轉染
  • 需要最佳化條件（某些細胞系對陽離子脂質體敏感）
  • 有些細胞係不易轉染
  • 血清的存在會幹擾複合物的形成，導致轉染效率低下
  • 培養基中血清的消耗會增加細胞毒性

磷酸鈣共沉澱

磷酸鈣 DNA 複合物吸附於細胞膜並被細胞內吞
  • 價格便宜，容易取得
  • 適用於瞬時和穩定蛋白質的生產
  • 轉染效率高（不限於細胞株）
  • 需要仔細製備試劑－CaPO4 溶液對 pH 值、溫度和緩衝鹽濃度的變化很敏感
  • 重複性差
  • 細胞毒性，尤其是針對原代細胞
  • RPMI 培養基因磷酸鹽濃度高而不能使用
  • 不適合動物轉染。

葡聚醣

帶正電荷的DEAE-葡聚醣和帶負電荷的核酸磷酸骨架相互作用形成的複合物被細胞內吞。
  • 方便使用
  • 結果可重複
  • 便宜的
  • 對某些細胞有化學毒性
  • 僅適用於瞬時轉染
  • 轉染效率低，尤其是在原代細胞。

其他陽離子聚合物

帶正電荷的聚合物與核酸帶負電荷的磷酸基形成帶正電荷的複合物， 然後與細胞表面帶負電荷的蛋白聚醣相互作用，透過內吞作用進入細胞。
  • 在血清中穩定，對溫度不敏感
  • 轉染效率高（有限的細胞株）
  • 結果可重複
  • 對某些細胞有毒性
  • 不可生物降解（樹枝狀聚合物）
  • 多用於瞬時轉染，較少用於穩定轉染

生物轉染方法

病毒轉染

本能感染細胞並傳遞遺傳物質
  • 轉染效率高
  • 對於難以轉染的細胞系
  • 可用於體內轉染
  • 可用於建構穩定或瞬時表達細胞系
  • 轉染的細胞系必須含有病毒受體
  • 基因插入大小有限（病毒載體約 10 kb，非病毒載體約 100 kb）
  • 建構重組蛋白技術難度高、耗時長
  • 存在生物安全問題（潛在疾病的活化、免疫原性反應、細胞毒性、插入誘變、細胞惡性轉化）

物理轉染方法

電轉

高脈衝電壓破壞細胞膜電位，DNA經由膜上形成的孔隙引入。
  • 原理很簡單
  • 最佳化條件以產生可重複的結果
  • 無需承運人
  • 不受細胞類型和條件限制
  • 最佳化條件，快速轉染大量細胞
  • 需要特殊設備
  • 電脈衝和電壓參數需要優化
  • 對細胞的損傷很大
  • 細胞死亡率高，因此需要大量細胞
  • 不可逆地損害細胞膜，溶解細胞

生物傳遞粒子輸送（粒子轟擊）

用微小的重金屬粒子將DNA沉澱下來，然後用彈道裝置將包裹好的粒子投射到細胞內，DNA在細胞內逐漸釋放和表現。
  • 不受細胞類型和條件限制
  • 可用於動物轉染
  • 方法直接，結果可靠
  • 導入基因的大小和數量不受限制
  • 需要昂貴的設備
  • 樣品的物理損壞
  • 細胞死亡率高，因此需要大量細胞
  • 需要準備顆粒
  • 轉染效率相對較低
  • 對於研究應用來說價格昂貴

微注射

顯微操作用於將 DNA 直接注入目標細胞的細胞核中。
  • 不受細胞類型和條件限制
  • 單細胞轉染
  • 方法直接，結果可靠
  • 導入基因的大小和數量不受限制
  • 無需承運人
  • 需要昂貴的設備
  • 技術要求高、勞力密集（一次只能轉染一個細胞）
  • 轉染細胞數量有限
  • 常常導致細胞死亡

的特點 轉染試劑 Yeasen

對於 DNA 轉染試劑和 RNA 轉染試劑， Yeasen 生物科技擁有強大的研發和生產團隊，不斷優化配方，改進生產工藝，推出了多種基於陽離子脂質體和陽離子聚合物的產品。科研機構及企業提供完整的產品，產品線涵蓋轉染試劑所涉及的所有領域。

Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑

Hieff Trans™ 懸浮無細胞脂質體轉染試劑

40802ES

40805ES

希夫傳輸™ 體外 siRNA/miRNA 轉染試劑

聚乙烯亞胺線性(PEI)MW40000（快速裂解）

40806ES

40816ES
  • 效率高：適用於細胞系的瞬時轉染或穩定轉染。
  • 低毒性：轉染的細胞仍保持良好的活力。
  • 適應性廣：全面覆蓋常見細胞及難轉染的原代細胞。
  • 操作簡單：適用於含血清的培養基，轉染前後無需更換培養基。
  • 性價比高：經濟實用、轉染效率高、價格低廉。

如何根據您的實驗選擇一種轉染試劑？

轉染試劑的選擇需要根據不同的實驗目的和實驗內容，根據轉染的物質、特定的細胞、操作的便利性等因素進行選擇。

產品

Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑

Hieff Trans™ 懸浮無細胞脂質體轉染試劑

希夫傳輸™ 體外 siRNA/miRNA 轉染試劑

聚乙烯亞胺線性(PEI)MW40000（快速裂解）

細胞類型

常規電池

常規電池

常規電池

常規電池

/

/

難以轉染的細胞

難以轉染的細胞

核酸類型

脫氧核糖核酸

脫氧核糖核酸

/

脫氧核糖核酸

幹擾RNA

幹擾RNA

幹擾RNA

/

/

/

miRNA

/

/

/

模擬miRNA

/

/

/

抗miRNA

/

DNA/siRNA共轉染

DNA/siRNA共轉染

/

/

病毒包裝

病毒包裝

/

病毒包裝

應用案例

Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑

希夫傳輸™ 以無菌液體形式供應。一般情況下，24孔板轉染每次約1.5μL，1mL Hieff Trans™ 可進行約660次轉染；對於 6 孔板，每次約 6 μL，1 mL Hieff Trans™ 可進行約660次轉染。 160 次轉染；

如欲了解更多詳情，請參閱 使用 Hieff Trans™ Lipofectamine 試劑進行轉染

聚乙烯亞胺線性 (PEI) MW40000 （快速裂解）

PEI 40000是一種分子量為40,000的高電荷陽離子聚合物，它非常容易與帶負電荷的核酸分子結合，形成複合物，並使得複合物進入細胞。 PEI 40000是一種瞬時轉染試劑，具有細胞毒性低、轉染效率高、在HEK293、CHO等細胞中基因表現效率高的特性。線性 PEI 轉染試劑已針對多種細胞系進行驗證，包括 HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 細胞。轉染效率高達80%~90%。

如欲了解更多詳情，請參閱 轉染新寵－線性PEI MW 40000，更有效率的轉染試劑

希夫傳輸™ 體外 siRNA/miRNA 轉染試劑

本產品在廣泛的細胞系中可實現1 nM siRNA的表達效率達到90%以上，並避免了脫靶效應。適用於多種細胞的轉染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等貼壁細胞；而對於難以轉染的懸浮細胞系，如K562或THP-1細胞，可以達到80%的沉默效率；包括一些原代細胞、原代人類纖維母細胞和原代人肝細胞等，可以達到80%的沉默效率。

轉染條件參考

除參考每款產品的使用說明外，顧客會根據自己具體的實驗內容進行操作，使用量也會有不同的差異。根據客戶使用產品後回饋的體外細胞轉染狀況，整理出來供大家參考。

產品名稱/產品編號

Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑/40802ES

細胞

培養皿

細胞接種密度

脫氧核糖核酸

希夫譯本

轉染效率

A549

6 好

90％

0.7微克

1.15 微升

+++

2號

24 好

95％

0.2微克

0.2 微升

++

C2C12

24 好

80% - 90%

1微克

5 微升

++

東風 1

24 好

80% - 90%

0.5微克

0.5 微升

+++

H520

6 好

80％

1.2微克

6 微升

++

鈣調蛋白

96 井

70％

100 納克

1 微升

++

HCT116

6 好

90％

4微克

10 微升

++

HEK 293

6 好

95％

2微克

10 微升

80 - 90%

293FT 型

24 好

85％

1微克

4 微升

90％

HEK 293T

12 好

1×105

1微克

2 微升

+++

HEK 293T（懸掛）

30 毫升

80％

30微克

60 μL

++

希拉

12 好

90％

0.2微克

0.6 微升

90％

希拉

12 好

80％

1微克

3 微升

+++

肝癌

12 好

80％

1微克

3 微升

++

臍靜脈內皮細胞

24 好

80％

1微克

2 微升

++

MCF10A

10厘米盤子

60％

5微克

15 微升

++

N2A

24 好

70% - 80%

300 奈克

900 μL

+

NCI H1975

6 好

80％

4微克

10 微升

+++

美國國立衛生研究院 3T3

6 好

90％

4微克

10 微升

+++

原始 264。7

35 毫米天線

80％

1微克

2 微升

90％

維羅

6 好

80％

3微克

9 微升

+++

細胞

培養皿

細胞接種密度

幹擾RNA

希夫譯本

轉染效率

HK2

6 好

65％

100 皮摩爾

6 微升

+++

常見問題解答

1 Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑

1.1問：製備核酸轉染試劑複合物時可以存在血清嗎？

答：血清的存在會影響脂質體的形成。在製備核酸轉染試劑複合物時建議使用無血清培養基（一般為MEM培養基）。

1.2問：使用Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑時應注意什麼？

一個：

1)轉染細胞時，細胞密度最好為80%-95%，具體接種密度依細胞的情況決定；

2）使用高純度的DNA有助於獲得更高的轉染效率；

3）製備轉染複合物時需以無血清培養基稀釋DNA及轉染試劑；

4）轉染時培養基中不能添加抗生素；

5)試劑應保存於2-8℃，注意避免長時間反覆開蓋；

6)首次使用時應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑數量，以獲得最大的轉染效率。一般建議DNA與轉染試劑的比例為1:2-1:3。

1.3 問：轉染後需要終止嗎？

答：不需要。脂質體複合物可穩定保存 6 小時。如果轉染前沒有更換細胞培養基，為了確保細胞正常生長所需的營養，需在4-6小時後換成新培養基。然而，如果轉染前已更換培養基，則脂質體轉染後無需更換培養基。

1.4 問：DNA和siRNA可以共轉染嗎？效果如何？

A：Yeasen，當DNA和siRNA共轉染時，siRNA的轉染效率會稍差。

1.5問：此轉染試劑可以用於慢病毒包裝的轉染嗎？

答：可以進行慢病毒包裝。

1.6 問：懸浮細胞可以用Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑轉染嗎？

答：Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑可用於懸浮細胞轉染，詳情請參考實驗方案。此外，我們也推出了專門針對懸浮細胞的轉染試劑（Cat No.40805，Hieff Trans™懸浮無細胞脂質體轉染試劑）

2 希夫 Trans™ 體外 siRNA/miRNA 轉染試劑

2.1問：轉染後需要更換轉染試劑嗎？

答：這個問題分成兩種：1.如果轉染前沒有換培養基，那麼轉染後6小時左右應該換培養基，以確保細胞生長所需的營養； 2.轉染前如果更換培養基，可以依照正常培養細胞的操作進行嗎？ ？換液操作後？

2.2問：轉染試劑可以冷凍嗎？

答：不可以冷凍，因為轉染試劑是PEI陽離子轉染試劑。低溫冷凍會破壞PEI轉染試劑的活性。因此最好保存在2-8°C下以保持最佳轉染效果。功效。

產品資訊

產品名稱 庫存單位 規格
Hieff Trans™ 脂質體轉染試劑 40802ES02 0.5 毫升
40802ES03 1.0 毫升
40802ES08 5×1毫升
Hieff Trans™ 懸浮無細胞脂質體轉染試劑（諮詢） 40805ES02 0.5 毫升
40805ES03 1.0 毫升
40805ES08 5×1毫升
Hieff Trans™ 體外 siRNA/miRNA 轉染試劑 （查詢） 40806ES02 0.5 毫升
40806ES03 1.0 毫升
聚乙烯亞胺線性(PEI)MW40000（快速裂解） 40816ES02 100毫克
40816ES03 1 克
40816ES08 5×1克

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轉染試劑 – Hieff Trans™ 和 PEI

線性 PEI MW 40000，一種更有效率的轉染試劑

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