逆轉錄是將 RNA 轉化為互補 DNA(cDNA)的過程,由逆轉錄酶介導。在退火引子存在的情況下,逆轉錄酶首先與 RNA 模板結合。逆轉錄酶的 RNA 依賴性 DNA 聚合酶活性透過摻入反應混合物中的 dNTP 來合成 cDNA。這個過程導致 cDNA:RNA 混合鏈的形成,這被稱為第一鏈 cDNA 合成。

莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 逆轉錄酶是分子生物學實驗室程序中常用的逆轉錄酶之一。為了實現更高的逆轉錄效率、更好的熱穩定性和更高的cDNA合成速率,通常會對原始逆轉錄酶進行基因改造。目前,市面上的逆轉錄試劑一般需要15~30分鐘的反應時間,相對較長。當反應樣本數很大時,總體時間消耗會急劇增加。億森現有5分鐘的逆轉錄系列產品,只需5分鐘即可完成逆轉錄過程,節省時間、效率高。
磷產品 磷定位 | 產品名稱 | 貓# |
快速、有效率、高產量的逆轉錄預混料 | 希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 進行 qPCR | 11156ES |
快速、高效、高產量的逆轉錄預混料(去除 gDNA) | 希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 用於 qPCR(DNA 消化器加) | 11155ES |
一步快速完成 gDNA 去除與逆轉錄預混 | 11151ES | |
靈活引子選擇快速逆轉錄試劑盒(帶 gDNA 去除) | 11150ES | |
靈活引子選擇快速逆轉錄試劑盒(含 gDNA 去除和追蹤染料) | 希菲爾™ AdvanceFast 第一鏈 cDNA 合成試劑盒 | 11149ES |
精品推薦一
快速、高效、高產量逆轉錄預混料(帶 gDNA 去除)(目錄號:11155ES)
來自不同模板的高逆轉錄產量
樣本 | 293T 細胞 | 擬南芥 | 老鼠 | 魚肝 |
11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
品牌A | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
品牌B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
品牌C | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
品牌D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
數字。使用來自人類293T細胞、擬南芥、小鼠肝臟和魚類肝臟的RNA模板進行逆轉錄。 A、B、C、D品牌均為兩步驟消化逆轉錄試劑,逆轉錄時間為15至20分鐘不等。檢測結果顯示,Hifair 11155ES 5分鐘逆轉錄試劑盒相比其他品牌具有更高的產量,且Ct值更低。
精品推薦二
5 分鐘一步消化和逆轉錄預混料(目錄編號:11151ES)
逆轉錄產量高
數字。以人類293T細胞RNA為模板,分別檢測三個基因。品牌 A、B 和 C 均為一步式 gDNA 去除和逆轉錄試劑。檢測結果顯示,在1 μg、10 ng Total RNA輸入量下,11151ES試劑盒逆轉錄產量優於其他品牌,且Ct值較小。
數字。使用擬南芥RNA作為模板,品牌A,B和C均為一步式gDNA去除和逆轉錄試劑。檢測結果顯示,在1 μg、10 ng Total RNA輸入量下,11151ES試劑盒逆轉錄產量優於其他品牌,且Ct值較小。
出色的靈敏度
數字。以人類293T細胞RNA為模板,擴增GC含量為30%、50%GC、60%GC、70%GC的基因。分別以100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg總RNA輸入量進行逆轉錄,然後進行螢光定量檢測。結果表明,11151ES 可適應 100 pg 至 1 μg RNA 輸入的逆轉錄。
精品推薦 T韓
5分鐘快速逆轉錄試劑盒(貓號:11149/11150ES)
靈敏度高,最低檢測極限可達 10 pg
數字。以293T細胞總RNA為模板,以11149ES進行逆轉錄,對所得的cDNA進行qPCR定量分析。結果表明,11149ES 可以成功逆轉錄 10 pg 至 1 μg 範圍內的 RNA 輸入,並保證準確的定量結果。
擴增性能好,最長擴增14kb片段
數字。以293T細胞總RNA為模板,以11149ES進行逆轉錄,所得cDNA進行PCR檢測。結果表明,11149ES能夠合成1kb~14kb長度的cDNA片段,且後續PCR具有一定的適用場景。如果需要直接反轉錄10kb以上的片段,建議將反轉錄時間延長至20-30分鐘,以確保最終片段的獲得。
逆轉錄效率比較
RNA 輸入量 | Ct值 | |
11149ES | 品牌A | |
1微克 | 15.2 | 15.5 |
100 納克 | 18.0 | 18.5 |
10 納克 | 21 | 21.7 |
1 納克 | 24.5 | 25.1 |
100 包 | 29.1 | 29.7 |
10 頁 | 32.7 | 34.3 |
數字。使用293T細胞的總RNA作為模板,並以11149ES和品牌A進行逆轉錄,其中11149ES不經過gDNA去除步驟。將所得的 cDNA 進行 qPCR 定量分析。結果顯示,品牌A的逆轉錄時間為13分鐘,而11149ES的逆轉錄時間為5分鐘。不同產品定量分析發現,11149ES的Ct值小於或與競爭品牌相近,顯示11149ES的5分鐘逆轉錄效率優於或與品牌A相當。
RNA 輸入量 | Ct值 | |
11149ES | 品牌B | |
1微克 | 16.2 | 17.4 |
100 納克 | 19.0 | 20.5 |
10 納克 | 22 | 23.8 |
1 納克 | 二十六 | 27.9 |
100 包 | 31.4 | 33.2 |
10 頁 | 32.9 | 35.6 |
數字。使用293T細胞的總RNA作為模板,並以11149ES和品牌B進行逆轉錄,其中11149ES不經過gDNA去除步驟。將所得的 cDNA 進行 qPCR 定量分析。結果顯示,B品牌的逆轉錄時間為20分鐘,而11149ES的逆轉錄時間為5分鐘。不同底物量定量分析發現,11149ES的Ct值小於或與品牌B相近,顯示11149ES的5分鐘逆轉錄效率優於或與品牌B相當。
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