逆轉錄是將 RNA 轉化為互補 DNA(cDNA)的過程,由逆轉錄酶介導。在退火引子存在的情況下,逆轉錄酶首先與 RNA 模板結合。逆轉錄酶的 RNA 依賴性 DNA 聚合酶活性透過摻入反應混合物中的 dNTP 來合成 cDNA。這個過程導致 cDNA:RNA 混合鏈的形成,這被稱為第一鏈 cDNA 合成。

莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 逆轉錄酶是分子生物學實驗室程序中常用的逆轉錄酶之一。為了實現更高的逆轉錄效率、更好的熱穩定性和更高的cDNA合成速率,通常會對原始逆轉錄酶進行基因改造。目前,市面上的逆轉錄試劑一般需要15~30分鐘的反應時間,相對較長。當反應樣本數很大時,總體時間消耗會急劇增加。億森現有5分鐘的逆轉錄系列產品,只需5分鐘即可完成逆轉錄過程,節省時間、效率高。

產品 定位

產品名稱

貓#

快速、有效率、高產量的逆轉錄預混料

希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 進行 qPCR

11156ES

快速、高效、高產量的逆轉錄預混料(去除 gDNA)

希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 用於 qPCR(DNA 消化器加)

11155ES

一步快速完成 gDNA 去除與逆轉錄預混

希菲爾™ AdvanceFast 一步法 RT-gDNA 消化 SuperMix,適用於 qPCR

11151ES

靈活引子選擇快速逆轉錄試劑盒(帶 gDNA 去除)

希菲爾™ AdvanceFast 第一鏈 cDNA 合成試劑盒(無染料)

11150ES

靈活引子選擇快速逆轉錄試劑盒(含 gDNA 去除和追蹤染料)

希菲爾™ AdvanceFast 第一鏈 cDNA 合成試劑盒

11149ES

精品推薦一

快速、高效、高產量逆轉錄預混料(帶 gDNA 去除)(目錄號:11155ES)

來自不同模板的高逆轉錄產量

樣本

293T 細胞

擬南芥

老鼠

魚肝

11155ES

23.4↓

19.6↓

24.9↓

21.1↓

品牌A

24.9

21.3

27.5

21.3

品牌B

26.1

20.5

27.1

23.1

品牌C

25.7

19.8

27.3

21.9

品牌D

24.3

21.3

28.1

24.5

數字。使用來自人類293T細胞、擬南芥、小鼠肝臟和魚類肝臟的RNA模板進行逆轉錄。 A、B、C、D品牌均為兩步驟消化逆轉錄試劑,逆轉錄時間為15至20分鐘不等。檢測結果顯示,Hifair 11155ES 5分鐘逆轉錄試劑盒相比其他品牌具有更高的產量,且Ct值更低。

精品推薦二

5 分鐘一步消化和逆轉錄預混料(目錄編號:11151ES)

逆轉錄產量高

數字。以人類293T細胞RNA為模板,分別檢測三個基因。品牌 A、B 和 C 均為一步式 gDNA 去除和逆轉錄試劑。檢測結果顯示,在1 μg、10 ng Total RNA輸入量下,11151ES試劑盒逆轉錄產量優於其他品牌,且Ct值較小。

數字。使用擬南芥RNA作為模板,品牌A,B和C均為一步式gDNA去除和逆轉錄試劑。檢測結果顯示,在1 μg、10 ng Total RNA輸入量下,11151ES試劑盒逆轉錄產量優於其他品牌,且Ct值較小。

出色的靈敏度

數字。以人類293T細胞RNA為模板,擴增GC含量為30%、50%GC、60%GC、70%GC的基因。分別以100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg總RNA輸入量進行逆轉錄,然後進行螢光定量檢測。結果表明,11151ES 可適應 100 pg 至 1 μg RNA 輸入的逆轉錄。

精品推薦 T

5分鐘快速逆轉錄試劑盒(貓號:11149/11150ES

靈敏度高,最低檢測極限可達 10 pg

數字。以293T細胞總RNA為模板,以11149ES進行逆轉錄,對所得的cDNA進行qPCR定量分析。結果表明,11149ES 可以成功逆轉錄 10 pg 至 1 μg 範圍內的 RNA 輸入,並保證準確的定量結果。

擴增性能好,最長擴增14kb片段

數字。以293T細胞總RNA為模板,以11149ES進行逆轉錄,所得cDNA進行PCR檢測。結果表明,11149ES能夠合成1kb~14kb長度的cDNA片段,且後續PCR具有一定的適用場景。如果需要直接反轉錄10kb以上的片段,建議將反轉錄時間延長至20-30分鐘,以確保最終片段的獲得。

逆轉錄效率比較

RNA 輸入量

Ct值

11149ES

品牌A

1微克

15.2

15.5

100 納克

18.0

18.5

10 納克

21

21.7

1 納克

24.5

25.1

100 包

29.1

29.7

10 頁

32.7

34.3

數字。使用293T細胞的總RNA作為模板,並以11149ES和品牌A進行逆轉錄,其中11149ES不經過gDNA去除步驟。將所得的 cDNA 進行 qPCR 定量分析。結果顯示,品牌A的逆轉錄時間為13分鐘,而11149ES的逆轉錄時間為5分鐘。不同產品定量分析發現,11149ES的Ct值小於或與競爭品牌相近,顯示11149ES的5分鐘逆轉錄效率優於或與品牌A相當。

RNA 輸入量

Ct值

11149ES

品牌B

1微克

16.2

17.4

100 納克

19.0

20.5

10 納克

22

23.8

1 納克

二十六

27.9

100 包

31.4

33.2

10 頁

32.9

35.6

數字。使用293T細胞的總RNA作為模板,並以11149ES和品牌B進行逆轉錄,其中11149ES不經過gDNA去除步驟。將所得的 cDNA 進行 qPCR 定量分析。結果顯示,B品牌的逆轉錄時間為20分鐘,而11149ES的逆轉錄時間為5分鐘。不同底物量定量分析發現,11149ES的Ct值小於或與品牌B相近,顯示11149ES的5分鐘逆轉錄效率優於或與品牌B相當。

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方法

產品 定位

產品名稱

貓#

基於染料的 qPCR

高特異性通用定量預混料(染料型)

希夫 UNICON™ 高級 qPCR SYBR 預混液

11185ES

高敏通用定量預混劑(染料型)

希夫 UNICON™ 通用藍色 qPCR SYBR 預混液

11184ES

反轉錄

5 分鐘一步消化和逆轉錄預混液(用於 qPCR)

希菲爾™ AdvanceFast 一步法 RT-gDNA 消化 SuperMix,適用於 qPCR

11151ES

5 分鐘快速逆轉錄,可合成高達 14 kb 的 cDNA,可去除 gDNA(用於 PCR/qPCR)- Tracer 版本

希菲爾™ AdvanceFast 第一鏈 cDNA 合成試劑盒

11149ES

5 分鐘快速逆轉錄,可合成高達 14 kb 的 cDNA,並去除 gDNA(用於 PCR/qPCR)

希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成試劑盒(無染料)

11150ES

高品質第一鏈 cDNA 合成預混料,帶 gDNA 去除功能(用於 qPCR)

希菲爾™ III 用於 qPCR 的第一鏈 cDNA 合成 SuperMix(gDNA digester plus)

11141ES

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