CHO Værtscelle DNA-restdetektionskit (3G)
Kvalifikationsoversigt (Kat.nr.: 41332ES60)
- Baggrund
Dataene opsummeret i denne rapport er udført af Yeasen Biotechnology for CHO Værtscelle-DNA-restdetektionskit (3G) produkt. Opsummeringsdataene er kun til brug for brugerens reference, og brugeren skal verificere værtscelle-resten DNA-metoden ved at bruge deres egne prøver til at bekræfte, at metoden kan opfylde brugerens krav. Alle laboratorier, der bruger dette sæt, anbefales at verificere følgende parametre: Linearitet, Område, Nøjagtighed, Præcision, Kvantificeringsgrænse, Specificitet og Robusthed.
Yeasen Biotechnology kan levere den detaljerede kvalifikationsrapport for dette sæt. Hvis brugeren bruger denne rapport, er det kun egnetheden (som inkluderede Precision, Nøjagtighed og specificitet) skal verificeres.
- Eksperimentelle materialer og metoder
2.1 CHO Værtscelle DNA-restdetektionskit (3G), Leverandør: Yeasen, Kat.nr.: 41332ES60.
2.2 MolPure Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit, Leverandør: Yeasen, Kat.nr.: 18461ES60.
2.3 Originaldata: den elektroniske version blev registreret i 'Eksperimentrapporten' underfilen til den overordnede fil CHO Værtscelle DNA-restdetektionskit (3G).
2.4 Metoder: Materialerne og operationsmetoderne, der blev brugt til eksperimentet, blev som udgangspunkt produceret eller indstillet af Yeasen Biotechnology, som blev vurderet og verificeret i lang tid, kitudvikling og fremstilling er fulgt ISO 13485-systemet.
- Kvalifikationens indhold og resultater
3.1 Detektionsområde
Det lineære område af sættet var 3 fg/μL~300 pg/μL med R2=1, og amplifikationseffektiviteten var 99,09% med CV <15% for hver koncentrationsanalyse.
Figur 1 CHO DNA (3G) qPCR standardkurve
3.2 Nøjagtighed
3.2.1 Recovery
3.2.1.1 Eksperiment til gendannelse af tomprøvespikning
Prøver af CHO DNA-standarder ved høje og lave koncentrationer: 30 pg/μL, 300 fg/μL og 3 fg/μL blev henholdsvis fremstillet og analyseret efter ekstraktion ved hjælp af den magnetiske perlemetode til rest-DNA-prøveforbehandlingskit (3 ekstraktionsreplikater blev udført for hver prøve, og 3 assay-replikater blev udført for hver ekstraktion), og prøveudvindingen og CV'erne blev analyseret.
For forskellige koncentrationer af DNA-prøver varierede genfindingerne fra 70% til 130%, og CV'erne var alle <20%.
| Prøvetype | Teoretisk koncentration | Udtræk 1 middelværdi | Uddrag 2 middelværdi | Uddrag 3 middelværdi | Gennemsnitlig koncentration | CV | Genopretning |
| Blank prøve | / | / | / |
| / | / | / |
| Genopretningsprøve 1 | 30 pg/μL | 27.07 | 27,51 | 28.27 | 27,62 | 2,20 % | 92,06 % |
| Genopretningsprøve 2 | 300 fg/μL | 285,53 | 301,25 | 295,71 | 294,16 | 2,71 % | 98,05 % |
| Genopretningsprøve 3 | 3 fg/μL | 3,50 | 3,54 | 3,31 | 3,45 | 3,56 % | 115,00 % |
Tabel 1 Blank prøve Spiking Recovery
3.2.1.2 Simuleret prøvespikningsgendannelseseksperiment
Prøver af samme koncentration (300 fg/μL CHO DNA) blev ekstraheret (3 ekstraktionsreplikater blev udført for hver prøve, og 3 assay-replikater blev udført for hver ekstraktion) med 5 forskellige baggrundsopløsninger (højt protein, høj nukleinsyre, høj og lav pH, højt salt) og prøvegenvindinger og CV'er blev analyseret.
DNA-prøvegenfindelser for forskellige baggrundsopløsninger varierede fra 70 % til 130 %, med alle CV'er <20 %.
| Prøvetype | Teoretisk koncentration | Udtræk 1 middelværdi | Uddrag 2 middelværdi | Uddrag 3 middelværdi | Gennemsnitlig koncentration | CV | Genopretning |
| Grundlæggende prøve | / | / | / |
| / | / | / |
| Højt proteinindhold | 300 fg/μL | 302,29 | 332,86 | 342,76 | 325,97 | 6,47 % | 108,66 % |
| Høj nuklear syre | 284,47 | 290,66 | 308,76 | 294,63 | 4,28 % | 98,21 % | |
| Højt saltindhold | 272,96 | 286,25 | 312,91 | 290,71 | 7,00 % | 96.90 % | |
| Høj pH | 296,04 | 320,58 | 324,56 | 313,72 | 4,92 % | 104,57 % | |
| Lav pH | 314,77 | 327,89 | 340,26 | 327,64 | 3,89 % | 109,21 % |
Tabel 2 Grundlæggende prøve gendannelse af spikes
3.3 Præcision
3.3.1 Gentagelighed
Gentag analysen 10 gange for CHO DNA-standarder ved en koncentration på 3 fg/μL med en CV <15%.
| Gentagelser | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Betyde | CV % |
| Detektionsværdi (fg/μL) | 3.13 | 3,26 | 2,89 | 3.16 | 2,95 | 2,87 | 2,88 | 2,75 | 2,87 | 3.15 | 2,99 | 5,65 % |
Tabel 3 Gentagelighedsresultater
3.3.2 Mellempræcision
Tre forsøgsledere testede uafhængigt CHO DNA-standardprøver ved høje og lave koncentrationer: 300 pg/μL, 3 pg/μL og 3 fg/μL, og tre replikater blev udført for hver koncentration, og CV'erne for alle ni opnåede data var <15%.
| Exp |
Faktisk koncentration Teoretisk koncentration | CHO DNA (3G) | ||
| 300 pg/uL | 3 pg/uL | 3 fg/uL | ||
| Exp 1 | Bestemmelse 1 | 302,63 | 2,97 | 3,40 |
| Bestemmelse 2 | 294,54 | 3.01 | 3.14 | |
| Bestemmelse 3 | 287,67 | 2,99 | 3.01 | |
| Exp2 | Bestemmelse 4 | 292,27 | 2,92 | 3.47 |
| Bestemmelse 5 | 299,61 | 2,90 | 2,82 | |
| Bestemmelse 6 | 305,73 | 2,93 | 2,90 | |
| Exp 3 | Bestemmelse 7 | 301,06 | 3.17 | 3.15 |
| Bestemmelse 8 | 299,17 | 3.00 | 3.21 | |
| Bestemmelse 9 | 290,66 | 2,90 | 3,05 | |
| / | Betyde | 297,04 | 2,98 | 3.13 |
| / | CV % | 2.03 | 2,80 | 6,85 |
Tabel 4 Resultater for middelpræcision
3.4 Specificitet
Interferensen af cellulært genomisk DNA, der almindeligvis anvendes i produktionen af biologiske lægemidler, blev vurderet for interferens med CHO DNA detektionsreagenser, og interferensgruppen overlappede med kontrolgruppen, og der blev ikke set nogen interferens (figuren nedenfor viser, i rækkefølge, interferensdataene for Mouse, MDCK, HEK293 og E.coli genomiske DNA'er med CHO DNA detektionsreagenser).
Figur 2 Interferenseksperimentresultater
3.5 Kvantificeringsgrænse
CHO-DNA blev påvist ved 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0,5 fg/μL, 0,3 fg/μL og 0,1 fg/μL, med 10 replikater for hver koncentration. Resultaterne viste, at CV var <20 % ved koncentrationer på 0,3 fg/μL og derover. Det vil sige, at grænsen for kvantificering af CHO-værtscelle-DNA-restdetektionskit (3G) var 0,3 fg/μL.
|
Gentagelser Test vare | CHO DNA (3G) (fg/μL) | |
| Mængde | Genberegningsforhold % | |
| 1 | 0,28 | 93,33 % |
| 2 | 0,26 | 86,67 % |
| 3 | 0,32 | 106,67 % |
| 4 | 0,30 | 100,00 % |
| 5 | 0,33 | 110,00 % |
| 6 | 0,23 | 76,67 % |
| 7 | 0,29 | 96,67 % |
| 8 | 0,37 | 123,33 % |
| 9 | 0,31 | 103.33 % |
| 10 | 0,28 | 93,33 % |
| Betyde | 0,30 | / |
| CV % | 13,09 % | / |
Figur 3. CHO DNA (3G) qPCR-testresultat
3.6 Detektionsgrænse
CHO DNA blev påvist ved 0,3 fg/μL, 0,1 fg/μL, 0,05 fg/μL og 0,01 fg/μL, med 20 replikater for hver koncentration. Resultaterne viste, at detektionshastigheden var ≥19 (dvs. detektionshastighed ≥95%) i 20 replikatbrønde ved koncentrationer på 0,05 fg/μL og derover. Det vil sige, at detektionsgrænsen for CHO-værtscelle-DNA-restdetektionskit (3G) var 0,05 fg/μL.
Figur 4. CHO DNA (3G) qPCR-testresultat
3.7 Robusthed
Dette sæt er blevet testet og er velegnet til, men ikke begrænset til, følgende instrumenter:
| Sælger | Instrumentmodeller | Forstærkningseffektivitet | R2 | Kvantificeringsgrænse | CV | Detektionsgrænse | Detektionshastighed |
| Termo | ABI 7500 | 99,69 % | 1 | 0,3 fg/μL | 12,40 % | 0,05 fg/μL | 95,65 % |
| Termo | ABI QuantStudio5 | 99,26 % | 1 | 0,3 fg/μL | 15,30 % | 0,05 fg/μL | 100,00 % |
| Roche | LightCycler480 | 2,05 % | 0,978 | 0,3 fg/μL | / | 0,05 fg/μL | / |
| Shanghai Hongshi | SLAN | 101,14 % | 0,999 | 0,3 fg/μL | 14,41 % | 0,05 fg/μL | 95,65 % |
Tabel 5 Instrumentets egnethedstestresultater
3.8 Stabilitet
3.8.1 Fryse-tø stabilitet
CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) blev testet ved gentagen frysning og optøning 10 gange, og sættets ydeevne blev ikke påvirket.
|
Testindikatorer Fryse-tø-tider | Parameter | T0 tid | Frys-tø 10 gange |
| Standard kurveparameter | Forstærkningseffektivitet | 95,70 % | 98,62 % |
| R2 | 1 | 1 | |
| Kvantificeringsgrænse (0,3 fg/μL) | CV | 15,31 % | 17,16 % |
| Detektionsgrænse (0,05 fg/μL) | Detektionshastighed | 95,65 % | 100 % |
Tabel 6 Fryse-tø stabilitet resultatanalyse
3.7.2 Accelereret stabilitet
CHO-værtscelle-DNA-restdetektionskit (3G) blev opbevaret ved 2~8°C i henholdsvis 30 dage og 37°C i 14 dage. Ingen af sættets ydeevne blev påvirket.
|
Testindikatorer Accelerationstemperatur og tid | Parameter | Forsøg 1 | Forsøg 2 | ||
| T0 tid | 2~8℃ 30 dage | T0 tid | 37℃ 14 dage | ||
| Standard kurveparameter | Forstærkningseffektivitet | 100,53 % | 102,61 % | 101,76 % | 101,84 % |
| R2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| Kvantificeringsgrænse (0,3 fg/μL) | CV | 17,16 % | 12,63 % | 16,27 % | 12.49 |
| Detektionsgrænse (0,05 fg/μL) | Detektionshastighed | 95,65 % | 100 % | 95,57 % | 100 % |
Tabel 7 Accelereret stabilitetsresultatanalyse
3.9 Grænse for blank
3.9.1 Ingen skabelonkontrol (NTC)
Ingen skabelonkontrol (NTC) var DNA-fortyndingen med 96 gentagelser for at udføre kvantitativ qPCR-analyse, alle CT-værdier over de 96 testede replikatbrønde var >40.
Figur 5 NTC-eksperimentresultater
3.9.2 Negativ ekstraktionskontrolprøve (NCS)
Negativ ekstraktionskontrolprøve (NCS) var DNA-fortyndingen, og den blev først ekstraheret ved prøveforbehandling, derefter blev qPCR udført, alle CT-værdier over de 48 testede replikatbrønde var >40.
Figur 6 NCS forsøgsresultater
- 4.Reference
4.1 Chinese Pharmacopoeia Commission (ChPC). Farmakopé for Folkerepublikken Kina (Vol Ⅲ) [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, s. 542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Generelle principper for teknisk gennemgang af analysemetodevalidering til kvalitetskontrol af biologiske produkter.
4.3 ICH(2022)《Analytisk metodevalidering Q2》, udkast til version.
Bestillingsinformation
| Beskrivelse | Varenummer |
| 41332ES | |
| 41331ES | |
| 41307ES | |
| 41308ES | |
| 18461ES | |
| MycAway™ Mycoplasma qPCR Detection Kit (2G) | 40619ES |