E.COLI Host Cell DNA Rest Detection Kit (2G) Valideringsrapport

E. coli Værtscelle DNA-restdetektionskit (2G)

Kvalifikationsoversigt (Kat. nr.: 41308ES60)

1. Baggrund

Dataene opsummeret i denne rapport er udført af Yeasen Biotechnology for 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G) produkt. Opsummeringsdataene er kun til brug for brugerens reference, og brugeren skal verificere værtscelle-resten DNA-metoden ved at bruge deres egne prøver til at bekræfte, at metoden kan opfylde brugerens krav. Alle laboratorier, der bruger dette sæt, anbefales at verificere følgende parametre: Linearitet, Område, Nøjagtighed, Præcision, Kvantificeringsgrænse, Specificitet og Robusthed.

Yeasen Biotechnology kan levere den detaljerede kvalifikationsrapport for dette sæt. Hvis brugeren bruger denne rapport, er det kun egnetheden (som inkluderede Precision, Nøjagtighed og specificitet) skal verificeres.

2. Eksperimentelle materialer og metoder

2.1 E.coli værtscelle DNA-restdetektionskit (2G), Leverandør: Yeasen, Kat.nr.: 41308ES60.

2.2 MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit, Leverandør: Yeasen, Kat.nr.: 18461ES60.

2.3 National standard for E.coli DNA indhold: Kat. 270027, parti nr.: 201101, koncentration: 96,2 μg/mL, opbevaringstilstand: -70 ℃, købt fra: National Institutes for Food and Drug Control.

2.4 Originale data: den elektroniske version blev registreret i 'Eksperimentel rapport' underfilen til den overordnede fil 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G)'.

2.5 Metoder: Materialerne og operationsmetoderne, der blev brugt til eksperimentet, blev som udgangspunkt produceret eller indstillet af Yeasen Biotechnology, som blev vurderet og verificeret i lang tid, udviklingen og fremstillingen af ​​kittet er fulgt efter ISO 13485-systemet.

3. Kvalifikationens indhold og resultater

3.1 Detektionsområde

Sættets lineære område var 30 fg/μL~300 pg/μL med R²=1, og amplifikationseffektiviteten var 101,74% med CV <15% for hver koncentrationsanalyse.

Figur 1 E.coli DNA (2G) qPCR standardkurve

3.2 Nøjagtighed

3.2.1 Afvigelse fra National standard for E.coli DNA indhold

E.coli DNA-referencematerialet i hver batch af sættet blev kalibreret under anvendelse af den nationale standard for E.coli-DNA-indhold. Yeasen DNA-referencemateriale var som udgangspunkt fri for afvigelser fra den nationale standard for E.coli DNA-indhold kalibreringskurve, og afvigelsen af ​​assayværdien var <5%.

3.2.2 Recovery

3.2.2.1 Eksperiment til gendannelse af tomprøvespikning

Prøver af E.coli DNA-standarder i høje og lave koncentrationer: 300 pg/μL, 3 pg/μL og 30 fg/μL blev fremstillet henholdsvis og analyseret efter ekstraktion ved hjælp af den magnetiske perlemetode til rest-DNA Sample Pre-treatment Kit (2 ekstraktionsreplikater blev udført for hver analyseprøve, og gentagelser blev udført for hver analyseprøve og 3 gentagelser), og CV'er blev analyseret.

For forskellige koncentrationer af DNA-prøver varierede genfindingerne fra 70% til 130%, og CV'erne var alle <20%.

Prøvetype	Teoretisk koncentration	Udtræk 1 middelværdi	Uddrag 2 middelværdi	Gennemsnitlig koncentration	CV	Genopretning
Blank prøve	/	/	/	/	/	/
Genopretningsprøve 1	300 pg/μL	250,56 pg/μL	262,11 pg/μL	256,33 pg/μL	4,41 %	85,44 %
Genopretningsprøve 2	3 pg/μL	2,29 pg/μL	2,56 pg/μL	2,42 pg/μL	7,09 %	80,77 %
Genopretningsprøve 3	30 fg/μL	33,62 fg/μL	32,61 fg/μL	33.12 fg/μL	14,28 %	110,39 %

Tabel 1 Blank prøve Spiking Recovery

3.2.2.2 Simuleret prøvespikningsgendannelseseksperiment

Prøver af samme koncentration (3 pg/μL E.coli DNA) blev ekstraheret (2 ekstraktionsreplikater blev udført for hver prøve, og 3 assay-replikater blev udført for hver ekstraktion) med 5 forskellige baggrundsopløsninger (højt protein, høj nukleinsyre, høj og lav pH, højt salt), og prøvegenvindinger og CV'er blev analyseret.

DNA-prøvegenfindelser for forskellige baggrundsopløsninger varierede fra 70 % til 130 %, med alle CV'er <20 %.

Prøvetype	Teoretisk koncentration	Udtræk 1 middelværdi	Uddrag 2 middelværdi	Gennemsnitlig koncentration	CV	Genopretning
Grundlæggende prøve	/	/	/	/	/	/
Højt proteinindhold	3 pg/μL	2,25	2.23	2.24	1,09 %	74,74 %
Høj nuklear syre		3,93	3,96	3,95	1,56 %	131,52 %
Højt saltindhold		2,69	2,67	2,68	2,63	89,20 %
Høj pH		2,90	3,67	3.29	13,82 %	109,55 %
Lav pH		2,77	2,87	2,82	3,41 %	94,01 %

Tabel 2 Grundlæggende prøve gendannelse af spikes

3.3 Præcision

3.3.1 Gentagelighed

Gentag analysen 10 gange for E.coli DNA-standarder ved en koncentration på 3 pg/μL med en CV <15%.

Gentagelser	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Betyde	CV
Detektionsværdi (fg/μL)	3.16	2,87	2,97	2,86	2,81	2,97	3.14	3.21	3.14	3.1	3.02	4,78 %

Tabel 3 Gentagelighedsresultater

3.3.2 Mellempræcision

Tre forsøgsledere testede uafhængigt E.coli DNA-standardprøver ved høje og lave koncentrationer: 300 pg/μL, 3 pg/μL og 30 fg/μL, og tre replikater blev udført for hver koncentration, og CV'erne for alle ni opnåede data var <15%.

Exp	Faktisk koncentration Teoretisk koncentration	E.coli DNA (2G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 fg/uL
Exp 1	Bestemmelse 1	295,65	3.22	26,90
	Bestemmelse 2	287,71	3.24	32.00
	Bestemmelse 3	300,23	3.17	27,50
Exp 2	Bestemmelse 4	306,06	3.13	37.30
	Bestemmelse 5	299,76	3.02	32,70
	Bestemmelse 6	299.63	3.02	34.00
Exp 3	Bestemmelse 7	266,70	3.01	35,90
	Bestemmelse 8	272,89	3,09	40,70
	Bestemmelse 9	276,51	3.01	35,20
/	Betyde	289,46	3.10	33,60
/	CV	4,89 %	3,02 %	13,18 %

Tabel 4 Resultater for middelpræcision

3.4 Specificitet

Interferensen af ​​cellulært genomisk DNA, der almindeligvis anvendes i produktionen af ​​biologiske lægemidler, blev vurderet for interferens med E.coli DNA-detektionsreagenser, og interferensgruppen overlappede med kontrolgruppen, og der blev ikke set nogen interferens (figuren nedenfor viser, i rækkefølge, interferensdataene for HEK293, Vero og CHO genomiske DNA'er med E.coli DNA-detektionsreagenser).

Figur 2 Interferenseksperimentresultater

3.5 Kvantificeringsgrænse

E.coli DNA blev påvist ved 50 fg/μL, 40 fg/μL, 30 fg/μL, 10 fg/μL og 5 fg/μL, med 10 replikater for hver koncentration. Resultaterne viste, at CV var <20 % ved koncentrationer på 30 fg/μL og derover. Det vil sige, at grænsen for kvantificering af E.coli-værtscelle-DNA-restdetektionskit (2G) var 30 fg/μL.

Gentagelser Test vare	E.coli DNA (2G) (fg/μL)
	Mængde	Genberegningsforhold
1	29,43	98,09 %
2	29,51	98,35 %
3	32.04	106,79 %
4	26.07	86,89 %
5	34.06	113,53 %
6	33,54	111,79 %
7	26,95	89,82 %
8	27,38	91,26 %
9	27.04	90,13 %
10	26.10	87,02 %
Betyde	29.21	/
CV	10,40 %	/

Figur 3 30fg/μL E.coli DNA (2G) qPCR-testresultat

3.6 Robusthed

Dette sæt er blevet testet og er velegnet til, men ikke begrænset til, følgende instrumenter:

Sælger	Instrumentmodeller	Forstærkningseffektivitet	R2	Kvantificeringsgrænse (fg/μL)	CV
Termo	ABI 7500	101,74 %	1	30	13,30 %
Termo	ABI QuantStudio5	100,46 %	1	30	12,40 %
Bio-Rad	CFX96	99,20 %	0,999	30	13,76 %
Shanghai Hongshi	SLAN	100,40 %	0,999	30	11,67 %

Tabel 5 Instrumentets egnethedstestresultater

3.7 Stabilitet

3.7.1 Fryse-tø stabilitet

E.coli værtscelle DNA-restdetektionskit (2G) blev testet ved gentagen frysning og optøning 10 gange, og sættets ydeevne blev ikke påvirket.

Testindikatorer Fryse-tø-tider	Parameter	T0 tid	Frys-tø 10 gange
Standard kurveparameter	Forstærkningseffektivitet	98,23 %	100,20 %
	R2	1	0,999
Kvantificeringsgrænse (30 fg/μL)	CV	15,07 %	9,66 %

Tabel 6 Fryse-tø stabilitet resultatanalyse

3.7.2 Accelereret stabilitet

E.coli værtscelle DNA-restdetektionskit (2G) blev opbevaret ved 2~8°C i henholdsvis 30 dage og 37°C i 14 dage. Ingen af ​​sættets ydeevne blev påvirket.

Testindikatorer Accelerationstemperatur og tid	Parameter	Forsøg 1		Forsøg 2
		T0 tid	2~8℃ 30 dage	T0 tid	37℃ 14 dage
Standard kurveparameter	Forstærkningseffektivitet	97,77 %	99,81 %	98,39 %	98,65 %
	R2	1	1	1	1
Kvantificeringsgrænse (30 fg/μL)	CV	11,04 %	13,79 %	9,55 %	14,55 %

Tabel 7 Accelereret stabilitetsresultatanalyse

4. 4.Reference

4.1 Chinese Pharmacopoeia Commission (ChPC). Farmakopé for Folkerepublikken Kina (Vol Ⅲ) [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, s. 542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: Generelle principper for teknisk gennemgang af analysemetodevalidering til kvalitetskontrol af biologiske produkter.

4.3 ICH(2022)《Analytisk metodevalidering Q2》, udkast til version.

Bestillingsinformation