Die isotherme Nukleinsäureamplifikationstechnologie kann je nach Amplifikationsprinzip in viele Kategorien unterteilt werden. Die derzeit am weitesten verbreitete und am weitesten verbreitete ist die Loop-Mediated Isothermal Amplification Technology (LAMP), die im Jahr 2000 vom japanischen Wissenschaftler Notomi et al. entwickelt wurde. Bst-DNA-Polymerase ist das Kernenzym der isothermen Amplifikationstechnologie. Welche Funktion und Leistung hat Bst-DNA-Polymerase bei LAMP?

1. Welche Rolle spielt die Bst-DNA-Polymerase bei LAMP?
2. Was ist gefriergetrocknete Bst Plus DNA-Polymerase?
3. Was ist das Produktmerkmal von Lyophilisiert Bst Plus DNA Polymerase(14405ES)?
4. Was ist die Produktleistung von Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase(14405ES)?
5. Verwandte Produkte
6. Zum Thema Lesen

1. Welche Rolle spielt die Bst-DNA-Polymerase bei LAMP?

Das technische Merkmal von LAMP besteht darin, vier Primer für sechs Regionen des Zielgens zu entwerfen und die Amplifikationsreaktion unter Verwendung von BST-DNA-Polymerase bei konstanten Temperaturbedingungen von 60 bis 65 °C durchzuführen, wodurch innerhalb von 15 bis 60 Minuten eine 109- bis 1010-fache Amplifikation erreicht wird. Bst-DNA-Polymerase weist eine starke thermische Stabilität, Strangverdrängungsaktivität und Polymeraseaktivität auf. Sie kann unter konstanten Temperaturbedingungen ohne PCR-Wärmedenaturierungsamplifikationszyklus eine schnelle, effiziente und spezifische Amplifikationsvorlage sein und das gesamte LAMP-Experiment innerhalb von 1 Stunde abschließen.

2. Was ist gefriergetrocknete Bst Plus DNA-Polymerase?

Lyophilisierte Bst Plus DNA-Polymerase wird verwendet, um glycerinfreie Bst Plus DNA-Polymerase einzufrieren, wodurch das Problem der glycerinfreien Bst-Enzyminstabilität gelöst wird. Gleichzeitig weist dieses Produkt eine starke 5'-3'-DNA-Polymeraseaktivität, Strangverdrängungsaktivität und dUTP-Toleranz auf, was es besser für die isotherme Amplifikationsreaktion gegen Umweltverschmutzung geeignet macht. Es ist für Kunden praktisch, es bei der Herstellung gefriergetrockneter Produkte zu verwenden.

Abbildung 1: 14405ES-lyophilisierte Bst Plus DNA-Polymerase (60 U/μL, Glycerin-frei)

3. Was ist das Produktmerkmal von Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase(14405ES)?

• Das glycerinfreie Enzym, geeignet für die Gefriertrocknung
• Transport bei Normaltemperatur zur Kostensenkung
• Starke Strangverdrängungsaktivität, empfindlich und stabil
• Schnelle Wiederauflösung und komfortable Bedienung

4. Was ist die Produktleistung von Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase(14405ES)?

4.1 Form des gefriergetrockneten Pulvers: Im Vergleich zum Moment T0 bleibt die Form des Pulvers nach 45 °C – 15 TAGE Gefriertrocknung unverändert.

Abbildung 2. Form des gefriergetrockneten Pulvers

4.2 Stabilität

Die Leistung von gefriergetrocknetem Pulver nach thermischer Beschleunigung kann immer noch mit der von flüssigem Reagenz übereinstimmen, und gefriergetrocknetes Pulver (14405ES) ist
universell und für die Fluoreszenzfarbstoffmethode und die pH-Indikatormethode einsetzbar.

4.2.1 Fluoreszenzfarbstoffmethode – Stabilität

Im RT-LAMP-System zur Fluoreszenzfarbstoffverstärkung entspricht die Leistung des glycerinfreien gefriergetrockneten Bst-Pulvers nach T0, 45 °C – 7 Tagen und 45 °C – 15 Tagen thermischer Beschleunigung der flüssigen Version des glycerinfreien Bst-Enzyms, und der NTC erreicht keinen Spitzenwert.

Versuchsbedingungen:

Hinweis: Die Kontrollgruppe ist eine flüssige Version ohne Glycerin-Bst-Enzym in der gleichen Konzentration.

Abbildung 3. Stabilitätsergebnisse

4.2.2 Fluoreszenzfarbstoffmethode – Leistung des Bst-Enzyms nach Gefriertrocknung des RT-LAMP-Systems

Im RT-LAMP-Fluoreszenzfarbstoffverstärkungssystem stimmte die Produktleistung des im RT-LAMP-System gefriergetrockneten glycerinfreien Bst-Pulvers nach 45 °C – 15 Tagen mit der der flüssigen Version des glycerinfreien Bst-Enzyms überein. Die Nachweisrate des Produkts in der Kontrollgruppe und im RT-LAMP-System nach der Gefriertrocknung betrug 100 % (16/16) bzw. 94 % (15/16).

Versuchsbedingungen:

Hinweis: Die Kontrollgruppe ist eine flüssige Version ohne Glycerin-Bst-Enzym in der gleichen Konzentration.

Abbildung 4. Leistung des Bst-Enzyms nach Gefriertrocknung des RT-LAMP-Systems

4.2.3 PH-Indikatormethode ——Stabilität

Im RT-LAMP-pH-Indikatorverstärkungssystem betrug die Nachweisrate von gefriergetrocknetem Bst-Pulver nach 45 °C – 15 Tagen thermischer Beschleunigung im Vergleich zur T0-Zeit 88 % (7/8).

Versuchsbedingungen:

Hinweis: Die Kontrollgruppe ist eine flüssige Version ohne Glycerin-Bst-Enzym in der gleichen Konzentration.

Abbildung 5. Stabilitätsergebnisse

4.2.4 PH-Indikatormethode – Wiedergefrierstabilität

Im RT-LAMP pH-Indikator-Verstärkungssystem ist die Leistung nach 45 ℃ - 7 Tagen Wiedereinfrieren stabil. Die Kontrollgruppe ist flüssiges Bst-Enzym. Im Vergleich zur Kontrollgruppe beträgt die Nachweisrate von 14405ES nach thermischer Beschleunigung 94 % (30/32).

Versuchsbedingungen:

Hinweis: Die Kontrollgruppe ist eine flüssige Version ohne Glycerin-Bst-Enzym in der gleichen Konzentration.

Abbildung 6. Ergebnisse zur Wiedereinfrierstabilität

4.3 Spezifität

Im RT-LAMP-Fluoreszenzfarbstoff-Amplifikationssystem erreichte das 48-Well-NTC keinen Peak und die Spezifität von 14405ES lag bei 100 %.

Versuchsbedingungen:

Hinweis: Die Kontrollgruppe ist eine flüssige Version ohne Glycerin-Bst-Enzym in der gleichen Konzentration.

Abbildung 7. Spezifische Ergebnisse

5. Verwandte Produkte

Die zugehörigen Produkte, die Yeasen bereitstellen kann, sind in Tabelle 1 aufgeführt.

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