Die Afrikanische Schweinepest (ASF) ist eine akute, schwere und hoch ansteckende Infektionskrankheit, die durch das Afrikanische Schweinepestvirus (ASFV) verursacht wird und Haus- oder Wildschweine infiziert. Die Morbidität und Mortalität können bis zu 100 % betragen, was die globale Schweineindustrie ernsthaft gefährdet und unkalkulierbare wirtschaftliche Verluste verursacht. Die Weltorganisation für Tiergesundheit (OIE) führt sie als meldepflichtige Tierkrankheit auf.

Gegen die Afrikanische Schweinepest gibt es derzeit weder einen Impfstoff noch eine wirksame Behandlung. Eine schnelle und genaue Diagnose der Afrikanischen Schweinepest durch Labordiagnostikmethoden ist entscheidend, um die Ausbreitung der Krankheit zu verhindern. Die OIE empfiehlt qPCR als wichtigstes Instrument zur Routinediagnose von ASF.

Yeasen ist ein Hersteller mit umfassender Erfahrung in der Forschung und Entwicklung von IVD-Rohstoffen. Angesichts der afrikanischen Schweinepest reagiert Yeasen positiv und arbeitet mit Kunden zusammen, um drei Komplettprozesslösungen von der Extraktion bis zur Erkennung des afrikanischen Schweinepestvirus zu entwickeln. Was sind also drei Lösungen? Und was sind die Anwendungsgebiete dieser Lösungen? Weiterlesen...

Abbildung 1. Yeasen-Lösungen zur Erkennung der Afrikanischen Schweinepest

Lösung I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)（Anfrage）

Produkteigenschaften

👍UDG-Anti-Verschmutzungssystem, das das Risiko einer Aerosolkontamination wirksam verhindert

👍Langzeitstabilität der vorgemischten PCR-Lösung (Mastermix + Primer + Sonden) bei Raumtemperatur, was die Detektionsschwierigkeiten erheblich vereinfacht

👍Hohe Verstärkungseffizienz und gute Wiederholbarkeit

👍Geeignet für Multiplattform und Multisystem

Fallstudie

👉Langzeitstabilität der vorgemischten PCR-Lösung
Cat#13171 wurde verwendet, um die vorgemischte PCR-Lösung zu konfigurieren, die 7 Tage lang bei 37 °C aufbewahrt werden kann und bei der Amplifikation des ASF-Plasmidsystems 15-mal eingefroren und aufgetaut werden kann. Die Ergebnisse zeigten, dass sich der Ct-Wert und die Empfindlichkeit der PCR-Lösung nach 7 Tagen Lagerung bei 37 °C nicht signifikant unterschieden und der Ct-Wert sich nach 15-maligem Einfrieren und Auftauen nicht signifikant änderte.

Abbildung 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(Erkundigen) wird in vorgemischten PCR-Lösungen mit Langzeitstabilität bei der Amplifikation des ASF-Plasmidsystems verwendet. 2A-Ct-Wert bei 37 °C für 0 Tage und 7 Tage 2B-Empfindlichkeit bei 37 °C für 0 Tage und 7 Tage 2C-Stabilität nach 15-maligem Einfrieren und Auftauen

👉Stabile und reproduzierbare Reagenzien
Vier verschiedene Chargen von Cat#13171 wurden ausgewählt, um das ASFV-Plasmidsystem-Amplifikationsexperiment 20 Mal zu wiederholen. Es gab keine signifikanten Unterschiede in den Ct-Werten, mit einem CV von weniger als 1 %.

Abbildung 3.Wiederholbarkeitstest von Yeasen Cat#13171

👉Multiplattform- und Multisystem-Einsatz
Yeasen Cat#13171 wurde verwendet, um die Doppelplasmide der Afrikanischen Schweinepest ASFV/ACT auf den Plattformen Bio-Rad CFX96, ABI Q5 und Slan zu amplifizieren. Es ist ersichtlich, dass Yeasen Cat#13171 für verschiedene Instrumententypen geeignet ist und die Daten zuverlässig und stabil sind.

Abbildung 4. Bio-Rad CFX96 Echtzeit-PCR-System

Abbildung 5. ABI Q5 Echtzeit-PCR-System

Abbildung 6. Slan Echtzeit-PCR-System

Lösung II:Universeller TaqMan Multiplex-qPCR-Mastermix

Yeasens Universal TaqMan Multiplex qPCR Mastermix (Kat.-Nr. 11211) ist für die effiziente Amplifikation niedrig konzentrierter Vorlagen mithilfe antikörpermodifizierter Hot-Start Taq DNA-Polymerase und angepasstem Multiplex-Puffer optimiert. Dieses Produkt unterstützt bis zu 4-fach PCR-Reaktionen in einem einzigen Röhrchen und ist ideal für die Genotypisierung und Multiplex-qPCR-Analyse.

Produkteigenschaften

👍Hohe Toleranz gegenüber Blutverunreinigungen, kann mit dem Yeasen-Nukleinsäureextraktionsreagenz Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2 verwendet werden, ideal für direkte qPCR
👍Ultrahohe Empfindlichkeit bis zu 3 Kopien/Reaktion, deutliche Verbesserung der Nachweisgenauigkeit
👍Langzeitstabilität der vorgemischten PCR-Lösung (Mastermix + Primer + Sonden) bei Raumtemperatur, was die Detektionsschwierigkeiten erheblich vereinfacht

Fallstudie

👉Hohe Toleranz gegenüber Blutverunreinigungen
Im Vergleich zu ähnlichen Produkten anderer Marken weist Yeasen Cat#11211 eine höhere Toleranz gegenüber Inhibitoren in Blutproben auf. Die Ergebnisse zeigten, dass Yeasen Cat#11211 eine hohe Toleranz gegenüber EDTA und Natriumcitrat aufweist und 0,5 % Vollblut verträgt.

Abbildung 7. Kat.-Nr. 11211 Universal TaqMan Multiplex qPCR Mastermix und Mastermixe verschiedener Marken werden für ASF-qPCR-Lösungen verwendet, die mit 3 mM EDTA (3A), 6 mM Natriumcitrat (3B) bzw. 0,5 % Blut (3C) ergänzt sind.

👉Ultrahohe Empfindlichkeit bis zu 3 Kopien/Reaktion

Die Amplifikation des ASFV-Plasmids mit 20 Replikaten wurde basierend auf den Produkten verschiedener Marken durchgeführt. Die Ergebnisse der Experimente zeigen, dass die Nachweisrate der Yeasen-Produkte höher ist.

Abbildung 8. Vergleich der Erkennungsraten zwischen ähnlichen Produkten verschiedener Marken (3 Kopien im endgültigen System)

👉Langzeitstabilität, bei Raumtemperatur 7 Tage haltbar

Die PCR-Lösung des ASFV/ACT-Doppelplasmidsystems kann nach 7 Tagen bei 4 °C, 25 °C und 37 °C eine stabile Leistung aufrechterhalten. Es ist ersichtlich, dass sich der Ct-Wert und der Fluoreszenzwert nicht signifikant geändert haben.

Abbildung 9. Stabilität der PCR-Lösung

Lösung III: Isotherme Amplifikation

Die Produkte von Yeasen unterstützen die isotherme Amplifikationstechnologie, mit der die ASF-Erkennung schneller und effizienter durchgeführt werden kann. Kat.-Nr. 14402 Hieff™ Bst Plus DNA-Polymerase (40 U/μl) wird aus der thermophilen DNA-Polymerase I von Geobacillus sp gewonnen, der die 5'-3'-Exonuklease-Aktivität fehlt. Dieses Produkt hat eine stärkere 5'-3'-DNA-Polymerase-Aktivität, Strangverdrängungsaktivität und dUTP-Toleranz, was es besser für isotherme Amplifikationsreaktionen gegen Umweltverschmutzung wie LAMP, CPA usw. geeignet macht.

Produkteigenschaften

👍Hohe Verstärkungseffizienz

👍Hochleistungsverstärkung

👍dUTP-Toleranz, kann in Kombination mit Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG) verwendet werden (Erkundigen), hitzelabil, 1 U/μL, um das Risiko einer Aerosolkontamination zu vermeiden

Fallstudie

👉Bessere Alternative zu importierten Produkten der Marke N*

Der Amplifikationsprozess wurde mit Bst-DNA-Polymerase von Yeasen bzw. N* Company durchgeführt. Es gab keinen signifikanten Unterschied im Ct-Wert und der Fluoreszenzintensität zwischen verschiedenen Marken.

Abbildung 10. Verstärkungskurven verschiedener Marken

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