Die molekulardiagnostische Technologie unterscheidet sich von anderen Nachweismethoden durch ihre außergewöhnliche Sensitivität und Spezifität. Herkömmliche flüssige diagnostische Reagenzien haben jedoch Nachteile wie hohe Transportkosten und eine begrenzte Haltbarkeit, die ihre Nützlichkeit einschränken. Als Reaktion auf sich entwickelnde Marktanforderungen und technologische Fortschritte sind lyophilisierte molekulardiagnostische Testreagenzien entstanden. Gefriergetrocknete Produkte bieten gegenüber herkömmlichen flüssigen Testreagenzien mehrere Vorteile, darunter:
- Stabil bei Raumtemperatur - Die dreidimensionale Struktur ist fixiert, wodurch die Stabilität des Enzyms und des Reaktionssystems bei Raumtemperatur gewährleistet werden kann. Kein Kühlkettentransport und keine Lagerung in Kühlschränken oder Kühlhäusern erforderlich, was die Haltbarkeit der Produkte verlängern kann.
- Einfach zu bedienen- Kein wiederholtes Einfrieren und Auftauen, Flüssigkeitsdosieren usw. erforderlich.
- Reduzierte Kosten- Kein Kühlkettentransport und keine Tiefkühllagerung erforderlich, wodurch Transport- und Lagerkosten effektiv gesenkt werden.
- Hohe Präzision- Ein gefriergetrockneter Mikrokern wird in einer Reaktion verwendet, um den Zusammensetzungsfehler während der Reagenzienvorbereitung zu reduzieren, die Betriebszeit zu verkürzen, den Verlust der biologischen Aktivität während der Flüssigkeitsvorbereitung zu verhindern und die Präzision grundlegend zu verbessern.
- Flexibler Einsatz- Keine Begrenzung durch die Probenanzahl, es kann auch eine Probe geladen werden.
Herkömmliche molekulare Enzyme oder Vormischungen enthalten häufig hohe Konzentrationen von Glycerin als Kryoprotektivum und Stabilisator. Das Vorhandensein von Glycerin im Reagenz kann jedoch die strukturelle Integrität des Wassers zerstören, sodass es schwierig wird, das Wasser effektiv zu entfernen. Dies wiederum wirkt sich nachteilig auf die Struktur und Stabilität des gefriergetrockneten Produkts aus. Wenn Sie sich für Gefriertrocknung entscheiden, ist es daher ratsam, glycerinfreie Reagenzien auszuwählen.
Darüber hinaus kann bei Anwendungen, die besonders empfindlich auf die Reagenzzusammensetzung reagieren, wie z. B. bei der digitalen PCR, die Verwendung hochkonzentrierter glycerinfreier Enzyme den Einfluss von Glycerin auf die digitale PCR-Reaktion weiter abschwächen. Dieser Ansatz minimiert nicht nur Interferenzen, sondern erweitert auch das Potenzial zur Optimierung des digitalen PCR-Nachweisreagenzsystems.
YEASEN Glycerinfrei molekulare Enzymlösung
YEASEN hat eine umfassende Forschungs- und Entwicklungs- sowie Produktionsplattform für molekulare Enzyme ohne Glycerin aufgebaut und durch Materialauswahl, Umweltkontrolle, Prozessoptimierung und Qualitätssicherung eine großtechnische Produktion mehrerer molekularer Enzyme ohne Glycerin erreicht.
- Erprobung des Dialyseverfahrens
Optimierung des Dialyseprozesses für ein festes Volumen an Glycerinenzym:
- Screening nach dem optimalen Dialysepuffer für verschiedene molekulare Enzyme;
- Screening nach stabilen Lagerlösungen für verschiedene molekulare Enzyme, um eine Langzeitlagerung bei 4 °C oder -20 °C zu ermöglichen.
- Verstärkung des Tangentialflussfiltrationsprozesses
Basierend auf dem Screening des Dialyseprozesses können die optimalen Dialysepufferkomponenten und ihre optimalen Aufbewahrungslösungen bestimmt werden. Anschließend kann das Tangentialflussfiltrationsverfahren (auch als UFDF bekannt) zum Ersetzen der Lösungspuffer verwendet werden.
Die entscheidenden Faktoren bei der Entwicklung des Tangentialflussfiltrationsprozesses drehen sich um die Wahl der Formel für die Lagerlösung, die Formel für die Wasch- und Filtrationslösung sowie den während der Filtration angewendeten Transmembrandruck und die Durchflussrate. YEASEN hat einen standardisierten Ansatz für die Tangentialflussfiltration entwickelt, der eine schnelle Bestimmung der Wasch- und Filtrationsvolumina und Zeitparameter basierend auf dem gewünschten Glyceringehalt im Zielmolekülenzym ermöglicht. Dieser Ansatz hilft, sowohl Material als auch Zeit einzusparen.
- Qualitätskontrolle
Die oben beschriebenen verschiedenen Herstellungsprozesse sind darauf ausgelegt, den unterschiedlichen Anforderungen für unterschiedliche Mengen und Produkttypen gerecht zu werden. Um die Produktstabilität über verschiedene Chargen hinweg und innerhalb desselben Prozesses zu bewerten, hat YEASEN ein umfassendes System zur Charakterisierung von Leistungsparametern entwickelt. Dieses System ermöglicht eine gründliche Bewertung der Auswirkungen glycerinfreier Maßnahmen aus mehreren Perspektiven. Zu den Charakterisierungsmethoden gehören unter anderem Proteinquantifizierung, Bewertung der Enzymaktivität (Rückgewinnungsrate), Analyse des Glyceringehalts, Bewertung des Schutzmittelgehalts und Bewertung der Enzymleistung.
YEASEN glycerinfreie molekulare Enzymprodukte
YEASEN hat ein glycerinfreies Verfahren zur molekularen Enzympräparation eingeführt, um Enzyme ohne Glyceringehalt aus Enzymen herzustellen, die ursprünglich Glycerin enthielten. Derzeit können wir erhebliche Mengen glycerinfreier Enzymrohstoffe liefern, die für qPCR/RT-qPCR- und LAMP/RT-LAMP-Anwendungen geeignet sind. Diese Rohstoffe sind für die Gefriertrocknung in diagnostischen Tests konzipiert und weisen dabei die gleiche Qualität und Leistung wie ihre flüssigen Gegenstücke auf.
Glycerinfreie molekulare Enzymprodukte
Die qPCR-Vormischungen wurden hergestellt unter Verwendung von JASEN 14316ES E-Taq DNA-Polymerase und entsprechende glycerinfreie Enzyme, und die Vorlage von 105, 104 und 103 Kopien/mL wurden gleichzeitig amplifiziert. Die Ergebnisse zeigten, dass der Amplifikationseffekt von glycerinfreiem 14316ES mit dem von glycerinhaltigem übereinstimmte. Gegenstück. Der beschleunigte Stabilitätstest von 14316ES wurde bei 37 °C durchgeführt. Die Ergebnisse zeigten, dass die Expansionsleistung von 14316ES nach 54 Tagen beschleunigter Behandlung bei 37 °C mit der der nicht beschleunigten Kontrolle übereinstimmte. Die obigen Ergebnisse zeigten, dass es keinen Unterschied in der Leistung von glycerinfreiem Enzym und glycerinhaltigem gab Gegenstück, und die Stabilität war gut.
- RT-qPCR gefriergetrocknete Produkte: Gefriergetrocknete Produkte werden 25 Tage lang bei 50 °C beschleunigt und weisen eine stabile Morphologie und Leistung auf.
Abbildung 4: Daten aus beschleunigten Stabilitätstests gefriergetrockneter RT-qPCR-Produkte- RT-LAMP gefriergetrocknete Produkte: Gefriergetrocknete Produkte werden 30 Tage lang bei 45 °C beschleunigt und weisen eine stabile Morphologie und Leistung auf.
Die RT-LAMP-Vormischung wurde mit YEASEN hergestellt 14405ES und 11297ES, und der Leistungstest wurde nach dem Gefriertrocknen durchgeführt. Das positive Reaktionsloch war orange und das negative Reaktionsloch war magenta, was einen großen Kontrast zeigte, und das Ergebnis wurde klar interpretiert. Darüber hinaus veränderte sich die Morphologie der gefriergetrockneten Produkte nach 30 Tagen Beschleunigung bei 45 °C nicht signifikant. Die Ergebnisse zeigten, dass das gefriergetrocknete Produkt in Form und Leistung stabil war.
Produktinformationen
| Einstufung | Nmich | Katalog-Nr. |
| Glycerinfreie Enzymprodukte für qPCR/RT-qPCR | Hifair™ Lyo Multiplex Ein-Schritt-RT-qPCR-Kit -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Glycerinfreie Enzymprodukte für RT-LAMP | Hifair® III Reverse Transkriptase, 600U/μl, Glycerin-frei | 11297ES |
| Lyophilisierte Bst Plus DNA-Polymerase (60 U/μL, Glycerinfrei) | 14405ES |