Bei der Verwendung herkömmlicher hochpräziser Enzyme für die PCR treten zwangsläufig einige heikle Probleme auf. Beispielsweise ist die Genauigkeit möglicherweise nicht ausreichend, was selbst nach der Sequenzierung der amplifizierten Fragmente zu Mutationen oder Deletionen in den Zielbasen führt. Die Amplifikationszeit ist außerdem relativ lang; manchmal kann die Amplifikation eines 5-kb-Fragments fast 2 Stunden dauern. Jetzt stellt XiaoYi eine schnelle hochpräzise PCR vor, die Ihre Probleme löst! – Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (ultraschneller High-Fidelity-PCR-Premix).
Der 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (mit Farbstoff) enthält einen vorab hinzugefügten Elektrophoreseindikator, sodass die PCR-Produkte direkt für die Elektrophorese verwendet werden können. Die amplifizierten Produkte haben stumpfe Enden. Dieser hochpräzise Enzymmix bietet die Vorteile, dass er schnell, einfach, hochempfindlich, stark spezifisch und stabil ist. Im Reaktionssystem müssen nur Primer und Vorlagen hinzugefügt werden. Darüber hinaus enthält das Produkt auch ein spezifisches Schutzmittel, das sicherstellt, dass der hochpräzise PCR-Premix auch nach wiederholtem Einfrieren und Auftauen eine stabile Aktivität behält.
Produkteigenschaften
- Hoch Treue: Niedrig Nichtübereinstimmung Rate, mit A Base Nichtübereinstimmung Verhältnis von 231/300.000 In hoch GC mutationsanfällig Sequenzen;
- Schnell Verstärkung Geschwindigkeit: Verlängerung Rate als schnell als 5 Sekunden pro kb;
- Breit Anwendbarkeit: Fähig von Abdeckung Gene mit 20 – 80 % GC Inhalt, verträgt Maus Lysate Und 20 % Blut;
- Gut Stabilität: Kann Sei gelagert bei 37°C für 7 Tage ohne beeinflussend Produkt Leistung;
- Schnell Und Komfortabel: Einfach hinzufügen Grundierungen Und Vorlage für Verstärkung, kommt mit Laden Farbstoff für direkt Elektrophorese.
Demonstration der Produktleistung
Hohe Wiedergabetreue, niedrige Fehlanpassungsrate
Unter Verwendung der Genome verschiedener Spezies als Vorlagen wurden sechs GC-reiche Fragmente, die sehr anfällig für Basenmutationen/-verluste sind, zur Amplifikation ausgewählt. Die jeweiligen PCR-Produkte wurden in Vektoren geklont und 100 einzelne Klone für jede Sequenz wurden zur Sequenzierung ausgewählt, um das Auftreten von Basenfehlpaarungen/-mutationen zu bestätigen. Die Ergebnisse zeigten, dass der schnelle, hochpräzise PCR-Mastermix (10164ES) im Vergleich zu inländischen und internationalen Markenreagenzien eine höhere Rate an Basenfehlpaarungen/-mutationen aufwies.
Die Verlängerungszeit kann bis zu 5 Sekunden betragen/kb
Mithilfe des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES) und des Produkts T wurden Fragmente unterschiedlicher Länge (0,4-10 kb) aus 100 ng menschlicher genomischer DNA-Vorlage mit einer Verlängerungsrate von 5 Sek./kb amplifiziert, wobei die erforderliche Verlängerungszeit 5 Sek./kb betragen musste. Die Ergebnisse zeigten, dass der schnelle, hochpräzise Enzym-Premix (10164ES) Fragmente innerhalb von 10 kb mit einer Verlängerungsrate von 5 Sek./kb amplifizieren kann.
Kann Genfragmente mit unterschiedlichem GC-Gehalt amplifizieren
Verwendung des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES) zur Amplifikation von Genfragmenten mit 23-76 % GC-Gehalt aus menschlichen genomischen DNA-Vorlagen, wobei die Verlängerungszeit auf 5 Sek./kb eingestellt ist. Die Ergebnisse zeigten, dass das Produkt eine gute Amplifikationsspezifität aufweist und Fragmente mit unterschiedlichem GC-Gehalt amplifizieren kann.
Kann Genfragmente mit unterschiedlichem GC-Gehalt amplifizieren
Verwendung des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES) zur Amplifikation von Fragmenten unterschiedlicher Länge aus verschiedenen Proben mit einer Verlängerungszeit von 5-10 Sekunden pro Kilobase. Die Ergebnisse zeigen, dass dieses Produkt eine ausgezeichnete Amplifikationsspezifität aufweist und mit der Amplifikation verschiedener Fragmente aus verschiedenen Vorlagen kompatibel ist.
Anmerkung: 1. Genomische Maus-DNA 1 kb; 2. Genomische Maus-DNA 2 kb; 3. Genomische Maus-DNA 6 kb; 4. Genomische Mais-DNA 1 kb; 5. Genomische Reis-DNA 2 kb-A; 6. Genomische Reis-DNA 2 kb-B; 7. Menschliche 293-Zell-cDNA 1 kb; 8. Menschliche 293-Zell-cDNA 2 kb; 9. Menschliche 293-Zell-cDNA 3 kb; 10. Menschliche 293-Zell-cDNA 12 kb; 11. E. coli-Brühe 8 kb; 12. E. coli-Brühe 16 kb; 13. Genomische Reis-DNA 10 kb-A; 14. Genomische Reis-DNA 10 kb-B; 15. Genomische Reis-DNA 10 kb-C; 16. Genomische Reis-DNA 20 kb-A; 17. Genomische Reis-DNA 20 kb-B; 18. Direkte Amplifikation aus menschlichem Blut 3 kb.
Hohe Erkennungsrate der Template-Amplifikation bei verschiedenen Spezies
Mithilfe des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES) wurden verschiedene GC-Inhaltsfragmente im Bereich von 0,5 bis 10 kb in Arabidopsis, Raps und Kartoffeln mit einer Verlängerungszeit von 5 Sek./kb amplifiziert. Die Ergebnisse zeigten, dass der schnelle, hochpräzise Enzym-Premix (10164ES) eine erfolgreiche Amplifikation gewährleisten kann.
Mithilfe des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES) wurden zufällig ausgewählte Sequenzen aus Arabidopsis, Raps, Fruchtfliegen, Caenorhabditis elegans und Zebrafischen mit Fragmentgrößen von 0,5–10 kb und einem GC-Gehalt von 20–80 % amplifiziert. Die Verlängerungszeit wurde auf 5 Sek./kb eingestellt. Die Ergebnisse zeigten, dass der schnelle, hochpräzise Enzym-Premix (10164ES) eine hohe Nachweisrate aufweist.
Gute Stabilität
Unter Verwendung des schnellen, hochpräzisen Enzym-Premix (10164ES), der 3 bzw. 7 Tage lang bei 37 °C hitzebeschleunigt gelagert wurde, werden 3 kb- und 5 kb-DNA-Fragmente aus 100 ng menschlicher genomischer DNA amplifiziert, wobei die Verlängerungszeit auf 5 Sek./kb eingestellt ist. Die Ergebnisse zeigen, dass das Produkt eine gute Stabilität aufweist.
Kundenfeedback zu Testversionen
Tier gDNA-120bp-50%GC
Kundenbewertung: Der PCR-Prozess ist schnell, die Bänder sind angemessen und können direkt in die Agarosegelelektrophorese geladen werden. Die Bänder der Marke N sind nach oben verzerrt, was auf den Einfluss des eigenen Puffers zurückzuführen sein kann, und da kein Ladepuffer hinzugefügt wurde, kann dieses Produkt das hochpräzise Enzym in meinem aktuellen Versuchsprotokoll ersetzen.
Anlage cDNA-729bp-45,13 %GC
Kundenbewertung: Im Vergleich zur Marke T sind die Klonierungsbänder klarer und einheitlicher und der gesamte PCR-Prozess ist schneller. Beim Ausführen des Gels muss kein zusätzlicher Farbstoff hinzugefügt werden, was sehr praktisch und zeitsparend ist.
Mikrobiell gDNA-1158, 1953 bp-58,8 %, 52,9 % GC
Kundenbewertungen: Im Vergleich zur Marke V ist die Wirkung vergleichbar, ich persönlich empfinde sie jedoch als noch besser.
Anlage cDNA-2000bp-40%GC
Kundenbewertung: Die Wirkung ist sehr gut und der Streifen ist klar.
Auswahlleitfaden für High-Fidelity-PCR
| Produktpositionierung | Produktname | Katze# |
| 5s/kb, sorgt für Wiedergabetreue und Geschwindigkeit (Mit Farbstoff) | 10164ES | |
| 5 s/kb, gewährleistet Wiedergabetreue und Geschwindigkeit (ohne Farbstoff) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix | 10163ES |
| 83×Taq, hohe Nachweisrate (mit Farbstoff) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR-Mastermix (mit Farbstoff) | 10154ES |
| 83×Taq Einzelenzym + Puffer separat | 10153ES |